核酸分子雜交試題全打印

核酸分子雜交試題一.名詞解釋:1.核酸分子雜交2.DNA復(fù)性3.Southern雜交4.Northern雜交5.斑點(diǎn)印跡6.原位雜交二.單選題:1.在加熱或紫外線照射下，可造成兩條DNA鏈中間的氫鏈斷裂，而核酸分子中全部的共價鍵則不受影響的稱為（）。A.DNA變性B.DNA復(fù)性C.DNA重組D.DNA雜交變性的本質(zhì)是（）的斷裂。A.鹽鍵B.氫鍵C.離子鍵D.共價鍵3.普通影響核酸變性的溫度可選在（）。A.60—70℃B.70—80℃C.80—90℃4.在核酸分子雜交時，普通對應(yīng)溫度作圖得到的DNA復(fù)性曲線所用的紫外吸取值是（）。A.A260吸取值B.A280吸取值C.A320吸取值D.A360吸取值5.進(jìn)行核酸分子雜交時，普通適宜的探針濃度是（B）。A.0.1μg—μg—μg6.雜交時如果使用單鏈核酸探針，隨著溶液中探針濃度的增加，雜交效率也會增加，因此探針長度控制在（）。A.50—300bpB.20—200bp—400bp—5007.進(jìn)行核酸雜交時，普通適宜的復(fù)性溫度較Tm值低（）。A.10℃B.15℃C.208.寡核酸探針雜交反映普通在低于Tm值（）下進(jìn)行。A.5℃B.10℃C.159.下列哪種試劑能減少核酸雜交的Tm值（B）。A．尿素B.甲酰胺C.甲醛D.乙醇10.在凝膠中核酸變性時，為了使DNA片段在合理的時間內(nèi)從凝膠中移動出來，必須將最長的DNA片段控制在大概（）。A.1KbB.2KbC.3KbD.4Kb11.將RNA或DNA變性后直接點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上，用于基因組中特定基因及其體現(xiàn)的定性及定量研究，稱為（）。A.原位雜交B.核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)C.斑點(diǎn)印跡D.狹縫印跡12.核酸保持在細(xì)胞或組織切片中經(jīng)適宜辦法解決細(xì)胞或組織后，將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，稱為（）。A.原位雜交B.核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)C.斑點(diǎn)印跡D.狹縫印跡13.在將固定于膜上的DNA片段與探針進(jìn)行雜交之前，必須將膜上全部能與DNA結(jié)合的位點(diǎn)全部封閉，稱為（B）。A.雜交B.預(yù)雜交C.雜交前解決D.Nouthern印跡雜交14.進(jìn)行間期細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的原位雜交時，核心是（）。A.細(xì)胞的培養(yǎng)B.加固定液C.載波片上的固定D.細(xì)胞染色體的制備15.組織細(xì)胞雜交前的預(yù)解決的核心是（C）。A.降解細(xì)胞外蛋白B.降解細(xì)胞內(nèi)蛋白C.降解核酸表面蛋白D.降解核酸內(nèi)DNA16.組織細(xì)胞雜交前預(yù)解決時，降解核酸表面的蛋白質(zhì)慣用的蛋白酶是（）。A.蛋白酶CB.蛋白酶KC.蛋白酶AD.蛋白酶I17.在進(jìn)行原位雜交時，RNA探針雜交的時間最佳是（）。A.2—4hB.4—6hC.6—8hD.過夜18.在核酸雜交中，現(xiàn)在應(yīng)用最為廣泛的一種探針是（A）。A.基因組DNA探針B.寡核苷酸探針C.cDNA探針D.RNA探針19.在Southern印跡雜交中用來標(biāo)記核酸探針最慣用的核素是（）。A.32PB.3HC.35SD.125I20．在下列非核素標(biāo)記物中，既屬于半抗原，同時也屬于配體的是（）。A.地高辛B.生物素C.親合素D.羅丹明21.某些標(biāo)記物可與某種物質(zhì)反映產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，通過化學(xué)發(fā)光能夠象核素同樣直接使X線膠片上的乳膠顆粒感光。這些標(biāo)記物稱為（）。A.半抗原B.配體C.熒光素D.化學(xué)發(fā)光探針22.SephadexG—50柱析法中，隨著流動相流出的是（）。A.小分子物質(zhì)B.dATPC.大分子探針D.dGTP23.下列DNA分子的構(gòu)成中，哪種是核酸變性的最重要的因素（C）。A.ATB.AGC.GCD.TC24.在探針的純化時，無水乙醇能夠沉淀（）。A．DNA片段B.蛋白質(zhì)分子C．RNA片段D.小分子物質(zhì)25.待測DNA樣品的電泳分離中，作為分子量原則的λDNA是用（）酶消化的。A.HindⅢB.BglIC.ApaID.BamHI三.多選題:1.造成DNA變性的慣用辦法有（）。A.熱變性B.堿變性C.酸變性D.化學(xué)試劑變性2.影響核酸雜交的因素有（）。A.核酸分子的濃度和長度B.溫度C.離子濃度D.核酸分子的復(fù)雜性3.核酸分子處在何種狀況下，核酸的雙鏈能夠完全打開成為單鏈（）。A.PH＜3B.3＜PH＜5C.5＜PH＜10D.PH＞104.在雜交液中加入甲酰胺，其目的是（）。A.在低溫下探針更穩(wěn)定B.使雜交液為中性C.能更加好的保存非共價結(jié)合的核酸D.減少核酸雜交的副反映5.為減少非特異性雜交反映，在雜交前將非特異性雜交位點(diǎn)進(jìn)行封閉，慣用的封閉物有（）。B.復(fù)性的非特異性RNAC.變性的非特異性DNAD.高分子化合物E.低分子化合物6.下列哪些環(huán)節(jié)屬于Southern印跡雜交（）。A.待測核酸樣品的制備B.待測DNA樣品的電泳分離C.凝膠中核酸的變性D.Southern轉(zhuǎn)膜7.Southern轉(zhuǎn)膜時慣用的膜是（）。A.化學(xué)活化膜B.尼龍膜C.硝酸纖維素膜D.濾紙8.慣用的Southern轉(zhuǎn)膜辦法有哪幾個（）。A.硝酸纖維素膜法B.毛細(xì)管虹吸印跡法C.電轉(zhuǎn)印法D.真空轉(zhuǎn)移法9.用于Southern印跡雜交的探針能夠是（）。A.純化的DNA片段B.純化的RNA片段C.多核苷酸D.寡核苷酸片段10.原位雜交能夠用來檢測（）。A.DNAB.RNAC.cDNAD.RNA和DNA11.原位雜交所用的探針能夠是（）。A.mRNAB.DNAC.RNAD.cDNA12.Northern印跡雜交中轉(zhuǎn)膜時可采用的辦法有（）。A.毛細(xì)管虹吸印跡法B.電轉(zhuǎn)印法C.真空轉(zhuǎn)移法D.凝膠分離法13.核酸原位雜交涉及（）。A.組織細(xì)胞的固定B.預(yù)雜交C.雜交D.沖洗14.下列哪些屬于核酸原位雜交的慣用固定液（）。A.10%甲醛B.4%多聚甲醛C.乙醇：冰醋酸（3：1）D.戊二醛15.RNA酶保護(hù)分析法可用于（）。A.mRNA定量B.mRNA定性C.mRNA末端定位D.擬定內(nèi)含子在對應(yīng)基因中16.核酸酶S1能降解（）。A.DNA單鏈B.DNA雙鏈C.RNA單鏈D.DNA/RNA雜交雙鏈17.根據(jù)檢測辦法的不同，非核素標(biāo)記物可分為下列幾類（）。A.半抗原B.配體C.熒光素D.化學(xué)發(fā)光探針18.下列物質(zhì)屬于半抗原的是（）。A.親和素B.羅丹明C.生物素D.地高幸19.核酸分子雜交所用探針采用體外標(biāo)記法的優(yōu)點(diǎn)是（）。A.安全系數(shù)高B.需要活體生物或細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)C.探針，核酸分離和純化及儲存很方便D.體外標(biāo)記普通比體內(nèi)標(biāo)記的比放射活性高20.化學(xué)法體外標(biāo)記核酸探針最慣用的是（）。A.125IB.光敏生物素C.3HD.32P21.DNA探針的酶促標(biāo)記法涉及（）。A.缺口平移法B.隨機(jī)引物法C.PCR標(biāo)記法D.末端標(biāo)記法22.探針的純化涉及（）。A．乙醇沉淀法B.SephadexG-50C.甲醇沉淀法D.絲柱離心法23DNA變性后的理化性質(zhì)的變化有（）。A.粘度減少B.密度增加C.紫外吸取值增加D.熔點(diǎn)減小24.Southern雜交成果檢測涉及（）。A．放射自顯影B.比色或化學(xué)發(fā)光檢測C.酶切圖譜分析D.凝膠電泳分離25.Southern雜交在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用涉及（）。A.酶切圖譜分析B.特定基因定性和定量C.基因突變分析D.限制性片段長度多態(tài)性的分析四.填空題:1.核酸分子雜交中，雜交的雙方分別稱為與。2.核酸分子雜交中已知的核酸序列稱為。3.適宜的電泳緩沖液中，DNA在電場作用下，由負(fù)極向正極泳動，分子越大，泳動速度。4.當(dāng)促使變性的因素解除后，兩條DNA又通過堿基互補(bǔ)配對結(jié)合形成DNA雙螺旋構(gòu)造，稱為。5.在DNA的堿基構(gòu)成中，AT之間是氫鍵，GC之間是氫鍵。6.鑒別DNA靶分子的雜交稱為，鑒別RNA靶分子的雜交稱為。7.根據(jù)檢測對象的不同，可將原位雜交分為和。8.慣用的液相雜交有和。9．RNA酶保護(hù)分析法（RPA）的基本程序涉及：、、、、。10.液相雜交的核酸酶S1保護(hù)分析法可用于、、和。11.核酸探針涉及：、、和。12.在用核酸標(biāo)記的探針，大多數(shù)標(biāo)記辦法需要的是α-32P，末端標(biāo)記必須使用。13.核酸的體外標(biāo)記法分為和。14.核酸的體外標(biāo)記法中的酶法最慣用的是和標(biāo)記。五、簡答題1、DNA變性的慣用辦法有哪幾個2、簡述DNA的復(fù)性過程。3、一種良好固相支持物應(yīng)含有哪些特性4、試比較硝酸纖維素膜、尼龍膜和化學(xué)活化膜的優(yōu)缺點(diǎn)。5、核酸原位雜交的抱負(fù)固定液應(yīng)含有哪些特點(diǎn)6、一種抱負(fù)標(biāo)記物應(yīng)含有哪些特性7、隨機(jī)引物法標(biāo)記DNA探針有哪些優(yōu)點(diǎn)六、敘述題1、試述核酸分子雜交的原理。2、試述影響核酸分子雜交的因素。3、試述Southern印跡雜交的基本環(huán)節(jié)。4、試述Southern印跡的慣用辦法及原理。5、試述核酸原位雜交的基本過程。6、試述探針的種類及其制備。7、試述切口平移法標(biāo)記DNA探針的原理。名詞解釋：SiRNA:運(yùn)用雙鏈小片段RNA高效、特異性降解細(xì)胞內(nèi)同源mRNA，從而阻斷體內(nèi)靶基因體現(xiàn)，使細(xì)胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型。Blue/whitescreen:藍(lán)白斑篩選。即β-半乳糖苷酶基因失活篩選。其原理是：某些質(zhì)粒載體帶有大腸桿菌乳糖操縱子的lacZ’基因，該基因含一段編碼β-半乳糖苷酶氨基末端145個氨基酸α－肽的DNA片斷，IPTG可誘導(dǎo)此片斷合成，此片斷能與宿主細(xì)胞所編碼的缺點(diǎn)型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)α－互補(bǔ)，形成完整的β－半乳糖苷酶。該酶能催化指使劑底物X－gal形成藍(lán)色菌落。當(dāng)外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位點(diǎn))，lacα－肽基因閱讀框架被破壞，細(xì)菌內(nèi)將無β－半乳糖苷酶活性，成果重組克隆呈白色菌落。Knockdown:（基因）敲除。是指對一種構(gòu)造已知但功效未知的基因，從分子水平上設(shè)計實(shí)驗(yàn)，將基因去除，或用其它次序相近基因取代，然后從整體觀察實(shí)驗(yàn)動物，推測對應(yīng)基因的功效?；蚯贸軌蚪K止某一基因的體現(xiàn)外，還涉及引入新基因及引入定點(diǎn)突變，既能夠是用突變基因或其它基因敲除對應(yīng)的正?；?，也能夠用正常基因敲除對應(yīng)的突變基因。G-protein:G蛋白。是三聚體GTP結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白的簡稱，位于質(zhì)膜內(nèi)胞漿的一側(cè)，由α，β，γ三個亞基構(gòu)成，βγ二聚體通過共價結(jié)合錨定于膜上起穩(wěn)定α亞基的作用，而α亞基本身含有GTP酶活性。G蛋白在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著分子開關(guān)的作用，當(dāng)G蛋白α亞基與GDP結(jié)合，處在關(guān)閉態(tài)；當(dāng)胞外配體與受體結(jié)合形成復(fù)合物時，造成受體胞內(nèi)構(gòu)造域與α亞基偶連，并促使α亞基結(jié)合的GDP被GTP交換而被活化，即處在啟動狀態(tài)，從而傳遞信號。DNA-chip:DNA芯片。指通過微陣列技術(shù)將高密度DNA片斷陣列通過高速機(jī)器人或原位合成方式以一定的次序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面作為探針，熒光標(biāo)記的樣品DNA/RNA借助堿基互補(bǔ)作用與探針進(jìn)行雜交，從而進(jìn)行大量的基因體現(xiàn)及檢測等方面的研究。Off-targeteffect:脫靶效應(yīng)。指的是與一種內(nèi)源性基因某一位點(diǎn)并不完全同源的RNA亦能通過克制翻譯而造成基因體現(xiàn)的靜默。Supergenefamily:超基因家族。指一種共同的祖先基因通過多個各樣的變異，產(chǎn)生了構(gòu)造大致相似但功效卻不盡相似的一大批基因，這一大批基因分屬于不同的基因家族，但能夠總稱為一種超基因家族。Environmentgeneticproject:環(huán)境基因工程，指專門鑒定體積暴露在特定環(huán)境下的那些顯示易感或抗性基因的DNA多態(tài)性。Tumorvaccine:腫瘤疫苗。腫瘤疫苗的本質(zhì)是將某一抗原組份作用于生物體，從而激發(fā)該機(jī)體對該抗原或抗原載體的免疫保護(hù)，這種抗原形式或抗原的載體形式即是疫苗。腫瘤疫苗的形式有細(xì)胞性疫苗和可溶性抗原疫苗兩大類。細(xì)胞疫苗是將腫瘤細(xì)胞進(jìn)行某些解決滅活后直接作用于機(jī)體?？扇苄钥乖蚨嚯囊呙鐒t是在體外通過基因工程的辦法制備出已知某腫瘤的抗原成分，與不同的佐劑聯(lián)合應(yīng)用達(dá)成免疫激發(fā)的目的。問答題：請從“一條基因一條蛋白”到“一條蛋白一條基因”說說你對基因概念的變化的理解?；蛟\療的優(yōu)缺點(diǎn)及發(fā)展前景。逆轉(zhuǎn)錄酶在RNA病毒感染宿主及本身復(fù)制中的意義。PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的異同點(diǎn)。（不少于5點(diǎn)）試從腫瘤多基因，多機(jī)制闡明腫瘤的基因篩選。答：1.基因概念演變過程以下：基因一次是19丹麥生物學(xué)家首先使用，以替代在此之前所用的“遺傳因子”這個術(shù)語。在開始使用“基因”一詞時，基因是遺傳性狀的符號，并未設(shè)計到基因的物質(zhì)概念。1926年Morgan發(fā)表了“基因論”，指出基因?qū)嵲谔囟ㄈ旧w上，并且是呈直線排列在染色體上的遺傳顆粒，位于同源染色體的同一位置的相對基因叫做等位基因；基因是世代相傳的，基因決定了遺傳性狀的體現(xiàn)。20世紀(jì)40年代，Bendle和Tatum用X射線照射鏈孢霉菌使其產(chǎn)生不同的突變體，發(fā)現(xiàn)突變能夠影響代謝反映，故認(rèn)為突變可致催化代謝的酶發(fā)生缺點(diǎn)，因而提出了“一種基因，一種酶”的學(xué)說。20世紀(jì)50年代初，Benzer在研究T4噬菌體的一群緊密連鎖的突變?nèi)簳r發(fā)現(xiàn)了順反效應(yīng)，從而提出了“順反子”概念。一種順反子即是一種基因。但后來“順反子”多用于指RNA分子中對應(yīng)于一種構(gòu)造基因的序列，當(dāng)代分子生物學(xué)中所稱單順反子RNA和多順反子RNA,即是由此而來。20世紀(jì)60年代，遺傳密碼的破譯使人們對基因體現(xiàn)的機(jī)制有了更多的理解，認(rèn)識到基因是基因組中的一種區(qū)域（一段DNA序列），其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是編碼一條多肽鏈的RNA分子或者是一種有獨(dú)力功效的RNA分子（tRNA或rRNA）。20世紀(jì)90年代以來，對基因的構(gòu)造與功效的研究不停進(jìn)一步，許多基因的核苷酸序列被測定，對基因的認(rèn)識更加豐富，逐步形成了基因的當(dāng)代概念。基因的當(dāng)代分子生物學(xué)概念是：基因是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位，是RNA和蛋白質(zhì)有關(guān)遺傳信息的基本存在形式，是指貯存RNA序列信息和有功效蛋白質(zhì)多肽鏈序列信息、以及體現(xiàn)這些信息所必需的全部核苷酸序列。大部分生物中構(gòu)成基因的核苷酸物質(zhì)是DNA，少數(shù)生物（如RNA病毒）中是RNA.題中“一條基因一條蛋白”反映的是20世紀(jì)40年代“一種基因，一種酶”的學(xué)說，而“一條蛋白一條基因”反映的是基因的當(dāng)代概念。兩種學(xué)說都是對的的，體現(xiàn)了對基因概念的理解的不停深化?；蛟\療是指采用分子生物學(xué)的技術(shù)辦法來分析受檢者的某一特定基因的構(gòu)造（DNA水平）或功效（RNA水平）與否異常，以此來對對應(yīng)的疾病進(jìn)行診療。基因診斷有時也稱為分子診療或DNA診療(DNAdiagnosis)XE"DNA診療(DNAdiagnosis)"。與傳統(tǒng)的辦法相比，基因診療含有下列優(yōu)點(diǎn)：（1）應(yīng)用范疇廣。（2）簡便、快速、經(jīng)濟(jì)。（3）特異性強(qiáng)，敏感性高，且便于定量操作。（4）可預(yù)先診療。基因診療的應(yīng)用：輔助遺傳病的臨床診療遺傳病患病風(fēng)險分析，如出生缺點(diǎn)的產(chǎn)前診療，植入前遺傳診療，遺傳篩選等。其它疾病易感性預(yù)測性診療，如腫瘤或其它家族性疾?。ㄌ悄虿?、高血壓、肥胖和AD等多基因?。┑囊赘行灶A(yù)測。療效評價及用藥指導(dǎo)，例如評價臨床治療急性淋巴細(xì)胞性白血病。法醫(yī)學(xué)個體認(rèn)定病原體診療，涉及病毒、細(xì)菌、真菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體以及寄生蟲等的診療。逆轉(zhuǎn)錄酶的三種反映活性①RNA指導(dǎo)的DNA合成②RNA水解③DNA指導(dǎo)的DNA合成逆轉(zhuǎn)錄酶的意義：（1）用于合成cDNA，建立cDNA文庫；（2）獲得基因或探針；（3）用于RT-PCR。4.原理相似，都是運(yùn)用堿基配對互補(bǔ)的原則并且復(fù)制的時候都是半保存復(fù)制，都需要引物，底物都是dNTP。不同點(diǎn)：所處的反映環(huán)境不同，復(fù)制方式不同，所需酶原料不同，復(fù)制起