實(shí)驗(yàn)二微生物的分離純化和接種

實(shí)驗(yàn)二微生物的分離、純化和接種

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化。接種是微生物實(shí)驗(yàn)及科研的一項(xiàng)最基本的操作技術(shù)，是將一種微生物移接到滅過(guò)菌的新培養(yǎng)基的過(guò)程。接種方法有斜面接種、液體接種、平板接種、穿刺接種等。在接種過(guò)程中，為了確保純種不被雜菌污染，必須采用嚴(yán)格的無(wú)菌操作。微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲取單菌落可用稀釋平板法、劃線分離法等。一、接種環(huán)的使用

接種環(huán)是用鉑絲或細(xì)電爐絲制成的，使用前后都要用酒精燈外焰嚴(yán)格滅菌。二、斜面接種法

1、將菌種管（若是液體菌種應(yīng)先搖勻）與空白斜面培養(yǎng)基管握在左手大拇指和其他四指之間，菌種管位于上側(cè)，培養(yǎng)基管位于下側(cè)，斜面均向上。

2、右手持接種環(huán)火焰滅菌。以右手掌心、小指和無(wú)名指同時(shí)夾取兩管口的棉塞，將兩試管口迅速通過(guò)火焰滅菌。

3、在火焰附近，用滅菌的接種環(huán)從菌種管挑取少量菌苔或一環(huán)菌液，伸進(jìn)待接種的培養(yǎng)基管斜面底部，向上“Z”形劃線。接種時(shí)不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基表面，沾菌的接種環(huán)進(jìn)出試管時(shí)不應(yīng)觸及試管口。

4、接種完后灼燒管口，塞上棉塞。灼燒接種環(huán)，放回原處。

5、將接種好的試管斜面放到37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。三、平板劃線接種法平板劃線接種法是最常用的分離培養(yǎng)細(xì)菌的方法,通過(guò)平板劃線后,可使細(xì)菌分散生長(zhǎng),形成單個(gè)菌落,有利于從含有多種細(xì)菌的標(biāo)本中分離出目標(biāo)菌。常用的平板劃線接種法有以下兩種：1、分區(qū)劃線法：先將接種環(huán)滅菌后,沾取標(biāo)本均勻涂布于平板培養(yǎng)基邊緣一小部分(第1區(qū)域),將接種環(huán)火焰滅菌,待冷卻后只通過(guò)第1區(qū)域3～4次后連續(xù)劃線(第2區(qū)域),依次可共劃線3～5區(qū)域,每一區(qū)域細(xì)菌數(shù)可逐漸減少,直到分離出單個(gè)菌落為止。最后將平皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

2、連續(xù)劃線法：滅菌接種環(huán)，冷卻后取適量混勻的菌液，然后在培養(yǎng)基表面連續(xù)“之”字形劃線，直至劃完整個(gè)平板表面。四、平板傾注接種法平板傾注法是將待檢原液或經(jīng)適當(dāng)稀釋的標(biāo)本1ml,置于直徑9cm無(wú)菌平皿內(nèi),傾入已融化并冷至50℃左右的培養(yǎng)基約15ml,立即混勻待凝固后倒置于37℃培養(yǎng)18～24小時(shí),做菌落計(jì)數(shù)。五、穿刺接種法穿刺接種是把菌種接種到固體深層培養(yǎng)基中（由培養(yǎng)基中央直刺到距管底約0.3～0.5cm處）的方法，也叫穿刺培養(yǎng)。接種完畢后，靜置培養(yǎng)，然后可根據(jù)穿刺部分菌落的生長(zhǎng)和擴(kuò)散狀況來(lái)判斷該微生物的運(yùn)動(dòng)性能和對(duì)氧氣的需求狀況。要保證穿刺接種的成功，主要