溫度對(duì)感染期幼蟲生存及死亡的影響

溫度對(duì)感染期幼蟲生存及死亡的影響

廣州管蟲是一種食源性寄生蟲，主要流行于太平洋、印度洋的一些島嶼和東南亞國(guó)家。在中國(guó)大陸地區(qū),自1984年由何竟智等報(bào)道我國(guó)首例廣州管圓線蟲病之后,病例報(bào)道越來(lái)越多,并逐漸由南向北擴(kuò)散。特別是2006年6-9月,北京暴發(fā)群體廣州管圓線蟲病,患者達(dá)160多例。廣州管圓線蟲病日益成為威脅我國(guó)人民健康的重大傳染病之一,引起了我國(guó)衛(wèi)生管理部門及衛(wèi)生工作者的注意。衛(wèi)生部在2003年將廣州管圓線蟲病列為我國(guó)新發(fā)疾病。人體感染廣州管圓線蟲病主要是食用了含有該蟲第3期幼蟲的螺類、魚、蝦以及被第3期幼蟲污染的蔬菜、瓜果和飲水。因此,在食用螺類、魚、蝦等食物之前,充分煮熟食物非常重要。但究竟多少溫度才能殺滅廣州管圓線蟲感染期幼蟲至今未見詳細(xì)報(bào)道。本研究較詳細(xì)地探討了溫度對(duì)廣州管圓線蟲感染期幼蟲的殺滅作用,為防治廣州管圓線蟲病提供了理論依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1不同肉泥的制備廣州管圓線蟲感染期幼蟲來(lái)源于廣州市番禺區(qū)自然感染的褐云瑪瑙螺。取新鮮褐云瑪瑙螺洗干凈,擊破,去殼,剁碎成肉泥。加入人工消化液(消化液成分:蒸溜水100ml,胃蛋白酶0.2g,鹽酸0.7ml)消化,取沉淀物置玻璃平皿內(nèi),解剖鏡下挑取活動(dòng)良好的感染期幼蟲,分裝于小培養(yǎng)皿內(nèi),置5℃冰箱中備用。1.1.2溫度調(diào)節(jié)至不同溫度的溫度35、30、20、20、20、20、20、20、20、20、20、20電熱恒溫水箱(CU600型,上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn),制造編號(hào):0811226),調(diào)節(jié)至35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃的不同溫度。在水浴箱里面放入1個(gè)裝滿清水的大培養(yǎng)皿及數(shù)個(gè)小培養(yǎng)皿(小培養(yǎng)皿內(nèi)預(yù)先裝有約1ml清水),預(yù)熱30min。1.2生物測(cè)定和計(jì)數(shù)將廣州管圓線蟲感染期幼蟲分組,25條/組。每個(gè)溫度分別加熱1min、5min、10min、15min、20min,同時(shí)每個(gè)時(shí)間段做3個(gè)平行組,計(jì)算平均數(shù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組加熱到預(yù)定時(shí)間后,迅速加入適量碎冰塊或冰水,取出小培養(yǎng)皿置于冰水中,使培養(yǎng)皿內(nèi)液體冷卻至室溫以下,以終止溫度對(duì)幼蟲的繼續(xù)作用。將培養(yǎng)皿置于解剖鏡下計(jì)數(shù),記錄生存和死亡的幼蟲數(shù)目。設(shè)立對(duì)照組,幼蟲放于自來(lái)水中,置室溫內(nèi)觀察。1.3解剖剖相法幼蟲生存和死亡判斷標(biāo)準(zhǔn):死亡幼蟲:幼蟲形態(tài)僵硬,呈“l(fā)”、“C”字形或僵硬“O”字形,蟲體不活動(dòng),或改變溫度、用解剖針碰觸沒(méi)有反應(yīng),判斷死亡。生存幼蟲:幼蟲柔軟卷曲,呈螺旋狀、波浪狀、“6”字形或不規(guī)則形,蟲體活動(dòng),判斷存活。1.4統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用MicrosoftOfficeExcel2007建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果2.1控制不同溫度對(duì)幼蟲死亡率的影響在解剖鏡下觀察,溫度35~45℃、作用1~20min時(shí),感染期幼蟲活動(dòng)狀態(tài)良好,未發(fā)現(xiàn)有幼蟲死亡的現(xiàn)象,幼蟲死亡率為0。幼蟲活動(dòng)狀態(tài)與實(shí)驗(yàn)前相比無(wú)明顯變化,溫度對(duì)幼蟲沒(méi)有殺滅作用。溫度為50~65℃時(shí),個(gè)別幼蟲開始死亡,死亡率為12.00%~100%。溫度為70~75℃時(shí),大部分幼蟲死亡,但加熱時(shí)間較短的時(shí)候,仍有極少數(shù)幼蟲存活,死亡率為97.22%~100%。80℃以上溫度時(shí),全部幼蟲死亡,死亡率為100%(表1)。2.2溫度對(duì)幼蟲的藥效試驗(yàn)在1~20min內(nèi),45℃以下溫度對(duì)幼蟲不具有殺滅作用,幼蟲死亡率為0。50℃以上,1min溫度開始對(duì)幼蟲具有殺滅作用。溫度對(duì)幼蟲的殺滅作用,隨著溫度的升高而增強(qiáng),加熱時(shí)間越長(zhǎng),殺滅作用越明顯,幼蟲死亡率越高。80℃以上溫度時(shí),對(duì)幼蟲具有完全殺滅作用,幼蟲迅速死亡,死亡率為100%(圖1)。2.3對(duì)照組感染期的幼蟲在1~20min內(nèi),幼蟲活動(dòng)情況良好,死亡率為0。3溫度對(duì)廣州管圓線蟲感染期幼蟲死亡率和作用時(shí)間的影響溫度對(duì)廣州管圓線蟲感染期幼蟲具有殺滅作用,其殺滅作用與溫度的高低以及作用時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)。本研究結(jié)果表明,在45℃以下溫度,作用時(shí)間1~20min,對(duì)廣州管圓線蟲感染期幼蟲沒(méi)有殺滅作用。當(dāng)溫度上升到50℃時(shí),作用時(shí)間1min,感染期幼蟲開始死亡,但死亡率十分低,僅12.00%。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),在同樣溫度(50℃)下,作用時(shí)間為5~20min時(shí),感染期幼蟲死亡數(shù)量逐漸增加,死亡率逐漸增高至20.00%~59.72%。同樣,隨著溫度的升高,感染期幼蟲死亡率也在增高,如溫度在55℃、60℃、65℃、70℃和75℃時(shí),除了55℃,10min,死亡率稍高于作用15min的死亡率以及75℃,作用1min,稍高于作用10min的死亡率之外,其余情況均是這樣。當(dāng)溫度上升到80℃以上時(shí),全部感染期幼蟲迅速死亡,死亡率為100%,溫度與感染期幼蟲死亡率的關(guān)系就更加明顯。因此可以認(rèn)為,溫度對(duì)廣州管圓線蟲感染期幼蟲的殺滅作用,溫度越高,作用時(shí)間越長(zhǎng),殺滅作用越強(qiáng)。本研究結(jié)果也表明,廣州管圓線蟲感染期幼蟲的死亡率除了與溫度的高低和作用時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)外,還可能與感染期幼蟲的個(gè)體差異有關(guān)。從研究結(jié)果可以看出,有極個(gè)別感染期幼蟲在相同溫度條件下,作用時(shí)間長(zhǎng)的死亡率反而低于作用時(shí)間短的感染期幼蟲,如溫度55℃、作用15min、死亡率為73.42%,低于作用10min、死亡率為82.67%;更明顯的是溫度60℃,作用15~20min,感染期幼蟲死亡率是100%,而溫度65℃,作用1~20min,死亡率反而更低,為70.90%~98.55%;極個(gè)別感染期幼蟲甚至在溫度到達(dá)70℃,作用1min;以及在溫度75℃,作用1min和10min還沒(méi)有被殺滅,說(shuō)明這極個(gè)別感染期幼蟲對(duì)溫度的耐受能力比較強(qiáng),存在個(gè)體差異。何竟智等(1993)用60℃溫度處理感染期幼蟲,幼蟲死亡時(shí)間是2min。而本研究在同樣溫度條件下觀察到的幼蟲死亡時(shí)間更早,從1min開始幼蟲已經(jīng)有57.39%死亡。這也間接說(shuō)明感染期幼蟲對(duì)溫度的耐受能力存在個(gè)體差異。這種差異是由蟲體本身造成的還是蟲體發(fā)育不同階段所致?張超威(2008)在觀察福壽螺體內(nèi)廣州管圓線蟲Ⅲ期幼蟲的形態(tài)學(xué)特征時(shí),觀察到有一些Ⅲ期幼蟲出現(xiàn)了Ⅳ期幼蟲的早期特征,認(rèn)為這可能與個(gè)體差異有關(guān)。本研究所觀察到的這極個(gè)別幼蟲會(huì)不會(huì)是出現(xiàn)了Ⅳ期幼蟲早期特征的幼蟲,因而能夠抵抗更高的溫度還有待進(jìn)一步觀察研究。本研究結(jié)果還表明,當(dāng)溫度達(dá)到80℃以上時(shí)可以在很短時(shí)間內(nèi)殺滅全部感染期幼蟲。但這并不表示人們?cè)谑秤寐蓊惖臅r(shí)候,只要把螺類加溫到80℃時(shí)就可以安全食用了。值得注意或提醒的是,由于感染期幼蟲都是寄生在螺體內(nèi),而且有螺肉的保護(hù),溫度對(duì)感染期幼蟲的實(shí)際殺滅作用會(huì)相應(yīng)的減弱,因此,在現(xiàn)實(shí)生活中食用螺肉時(shí)需要更高的溫度或需要更長(zhǎng)的時(shí)間,才能殺滅螺肉內(nèi)的感染期幼蟲。有報(bào)道指出,在烹調(diào)螺肉的過(guò)程中加入的一些調(diào)味品也有助于殺滅幼蟲。極低濃度的醬油對(duì)幼蟲殺滅作用明顯,但50%醋和25%乙醇對(duì)廣州管圓線蟲第Ⅲ期幼蟲活動(dòng)抑制不明