DNA的粗提取和鑒定課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

DNA的粗提取與鑒定一、實驗原理：1．提取DNA的原理利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。2．鑒定DNA的原理在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色。DNA含量相對較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。

(1)不能選擇哺乳動物成熟的紅細(xì)胞，因為哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA。二、材料用具1.選材：注意：2.試劑：①研磨液②體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺試劑⑤蒸餾水——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl——析出DNA——溶解DNA——鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用(2)以雞血為實驗材料時，每100mL血液中需要加入3g檸檬酸鈉，

防止血液凝固。三、方法步驟（視頻）1．稱取約30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨。三、方法步驟加入研磨液后，必須充分研磨，否則細(xì)胞核不會充分破碎，釋放出的DNA量就會減少。利用動物細(xì)胞提取DNA破碎細(xì)胞的方法：

動物細(xì)胞無細(xì)胞壁，可直接吸水漲破。研磨的目的：破碎細(xì)胞，使核物質(zhì)容易溶解在研磨液中2．去除濾液中的雜質(zhì)方案一在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液方案二直接將研磨液倒入塑料離心管中，在1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，再取上清液三、方法步驟為減少DNA的損失，過濾過程一般使用紗布過濾。

抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；①上清液中除DNA之外，可能含有哪些雜質(zhì)？可能含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)②低溫放置幾分鐘的作用：的析出方案一在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)，靜置2～3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分方案二將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干三、方法步驟攪拌時應(yīng)輕緩、并沿一個方向：減少DNA斷裂，以便獲得較完整的DNA分子1.提純DNA時，選用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精的原因：體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精提純效果更佳。預(yù)冷的酒精具有以下優(yōu)點(diǎn)：①可抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；②抑制分子運(yùn)動，使DNA易形成沉淀析出；③低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少其斷裂。2.實驗中出現(xiàn)的絲狀物的主要成分是DNA，實際上每一根“絲”都是由許多DNA分子聚集在一起形成的，應(yīng)用玻璃棒沿一個方向緩慢攪拌，避免破壞DNA。的析出的鑒定取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶解于其中一支試管的NaCl溶液中，再向兩支試管中加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min，待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。實驗組水浴加熱對照組注意事項：①先溶解再加二苯胺②沸水浴加熱目的：加快顏色反應(yīng)速率DNA耐高溫例1

若從植物細(xì)胞中提取DNA，發(fā)現(xiàn)實驗效果不好，如看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定時不顯示顏色反應(yīng)等，其可能的原因是①植物細(xì)胞中DNA含量低②研磨不充分③過濾不充分④95%冷酒精的量過大A.①②

B.③④

C.①④

D.②③√選項試劑操作作用A研磨液與生物材料混合提取溶解DNAB2mol·L－1NaCl溶液與提取出的DNA混合溶解DNAC冷卻的酒精加入到離心后的上清液中溶解DNAD二苯胺試劑加入到溶解有DNA的NaCl溶液中鑒定DNA√粗提取與鑒定實驗中所依據(jù)的原理是①DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同②DNA易被甲紫溶液染成紫色③溶解有DNA的NaCl溶液加入二苯胺試劑沸水浴后會呈現(xiàn)藍(lán)色④加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精，DNA會從溶液中析出⑤加入體積分?jǐn)?shù)為70%的冷酒精，DNA會從溶液中析出A.①②③

B.①③④C.②③④

D.①③⑤跟蹤訓(xùn)練12345√62.(2021·山東日照高二期中)下列有關(guān)“DNA粗提取與鑒定”實驗的敘述，正確的是A.用蒸餾水使家兔的紅細(xì)胞漲破，可獲取富含DNA的濾液不溶于95%的冷酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液C.新鮮的洋蔥和豬肝可作為實驗材料提取DNA，而菠菜不能用于提取

DNAD.鑒定DNA時，應(yīng)將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴12345√63.(2021·山東聊城高二期中)下列與DNA粗提取與鑒定過程有關(guān)的敘述中，錯誤的是A.將雞的成熟紅細(xì)胞置于清水中，紅細(xì)胞漲破后將DNA釋放出來B.用2mol/L的氯化鈉溶液溶解提取物并離心后，須保留上清液C.在提取液中加入75%的冷酒精后蛋白質(zhì)會與DNA分離并析出與二苯胺溶液在沸水浴加熱條件下會呈現(xiàn)藍(lán)色12345√64.在“DNA的粗提取與鑒定”實驗中，甲、乙、丙、丁四個小組除表中所列處理方法不同外，其他操作步驟均正確，但實驗結(jié)果卻不同。下列有關(guān)敘述不正確的是12345組別實驗材料提取核物質(zhì)時加入的溶液去除雜質(zhì)時加入的溶液DNA鑒定時加入的試劑甲雞血蒸餾水體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(25℃)二苯胺試劑乙菜花蒸餾水體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(冷卻)雙縮脲試劑丙豬血蒸餾水體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(冷卻)二苯胺試劑丁雞血蒸餾水體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(冷卻)二苯胺試劑6A.實驗材料選擇錯誤的組別是丙B.沸水浴后試管中溶液顏色變藍(lán)的組別是甲、丁C.甲組實驗現(xiàn)象不明顯的原因是25℃的酒精對DNA的凝集效果差D.乙組實驗不成功僅因為在鑒定時加入了雙縮脲試劑12345√65.(2021·山東濰坊高二期中)多種實驗材料都可以用于DNA的粗提取與鑒定，用香蕉也可以取得較好的實驗效果，下列操作正確的是A.向剪碎的香蕉果肉組織中加入蒸餾水，以釋放核DNAB.經(jīng)研磨后，將研磨液離心5min，取沉淀物進(jìn)行下一步操作C.冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精可以溶解某些蛋白質(zhì)，得到粗提取的

DNAD.將DNA溶于NaCl溶液后，加入現(xiàn)配的二苯胺試劑，混合均勻即可出

現(xiàn)藍(lán)色12345√6123456.實驗中對DNA進(jìn)行鑒定時，做如下操作，分析回答下列問題：試管序號AB1加2mol·L－1的NaCl溶液5mL加2mol·L－1的NaCl溶液5mL2不加加入提取的DNA絲狀物并攪拌3加4mL二苯胺試劑，混勻加4mL二苯胺試劑，混勻4沸水浴5min沸水浴5min實驗現(xiàn)象

實驗結(jié)論

(1)根據(jù)上圖，完成表格空白處的實驗內(nèi)容。溶液不變藍(lán)色溶液逐漸變藍(lán)色DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺試劑會被呈現(xiàn)藍(lán)色6(2)對于B試管，完成1、2、3的操作后溶液顏色如何變化？

。(3)在沸水浴中加熱的目的是