紅厚殼中2個(gè)新三衍生物的分離與鑒定

紅厚殼中2個(gè)新三衍生物的分離與鑒定

kashman等人（1992年）從馬來西亞雨林科學(xué)院calophylovlagoon和calophylov植物中分離并確定了一系列含有糊精素的吡咯素。這些香氣由三種化合物組成：由糊精環(huán)和反應(yīng)環(huán)組成的香豆素，以及由五種和八月異戊二醇甲基的苯并含有糊精素。該類化合物多具有抗HIV活性,其中(+)calanolideA和(-)calanolideB,inophyllumA,inophyllumP,具有明顯的抗HIV活性(Kashman等,1992;Patil等,1993),至今主要集中在對具有最好抗HIV活性的(+)-calanolideA(EC50=0.1μM,IC50=20μM,TI=200)的研究上,還報(bào)道了合成該化合物的一些方法(Chenera等,1993;Deshpande等,1997,1995;Kucherenko等,1995;Flavin等,1996;Khilevich等,1996),并研究了它們的構(gòu)效關(guān)系(Galinis等,1996;Zembowe等,1997)。通過對該化合物進(jìn)行了系統(tǒng)的相關(guān)藥效研究(Kashman等,1992;Cardellina等,1995;Newman等,1998;Hollingshead等,1999),結(jié)果表明它抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶,其毒性低,安全性好。該化合物是目前抗艾滋病的熱點(diǎn)先導(dǎo)物,美國正在試用于臨床研究,并且有可能成為治療艾滋病的新一代非核苷酸類藥物。紅厚殼屬(Calophyllum)為藤黃科(Guttiferae)植物,全世界約有80種,分布于東半球熱帶。我國有紅厚殼屬植物紅厚殼(C.inophyllumL.),薄葉紅厚殼(C.membranaceumGaertn.etChamp.),C.thoreliiPierre和滇南紅厚殼(C.polyanthumWall.etChoisy)等種,主要分布于南部和西南部(侯寬昭,1982)。為尋找抗HIV活性的植物資源,發(fā)現(xiàn)新的活性先導(dǎo)物,我們對化學(xué)成分未見研究的滇南紅厚殼(C.polyanthumWall.etChoisy)進(jìn)行了化學(xué)成分研究,本研究為尋找具有抗HIV活性的吡喃類香豆素化合物以及該植物資源的開發(fā)利用提供了化學(xué)依據(jù)。滇南紅厚殼(C.polyanthum)種子陰干、粉碎,經(jīng)乙醇室溫浸濾,減壓回收溶劑得乙醇提取物。提取物經(jīng)硅膠和反相Rp-18柱層析,從該植物中得到5個(gè)化合物。經(jīng)IR,MS,1HNMR,13CNMR等鑒定其結(jié)構(gòu)為滇南紅厚殼內(nèi)酯A、B(1,2),calanolideE2(3)(McKee等,1996),volenol(4)(Jakupovic等,1988),沒食子酸(5)。其中1和2為新化合物。本文詳細(xì)報(bào)道其分離和結(jié)構(gòu)鑒定?；衔?:黃色油狀物。[α]26DD26=-176.54°(CHCl3,c0.21);質(zhì)譜中的分子離子峰m/z:422并結(jié)合13CNMRDEPT推定其分子式為:C25H26O6;IR中3500、1709、1646、1580、1448cm-1的吸收峰,說明化合物1分子中有羥基、羰基、雙鍵、芳環(huán)存在。1HNMR(CDCl3)在δ1.0-1.4之間給出4個(gè)甲基信號,其中2個(gè)單峰甲基信號δ1.04(3H,s)和1.39(3H,s),2個(gè)二重峰甲基信號δ1.15(3H,d,J=7Hz),1.27(3H,d,J=7Hz),說明2個(gè)甲基與季碳相連,另2個(gè)甲基與叔碳相連接。δ5.40(1H,d,J=10Hz)和6.54(1H,d,J=10Hz)為兩個(gè)烯鍵質(zhì)子信號,其偶合常數(shù)說明該烯鍵質(zhì)子為順式關(guān)系。另外δ7.11-7.23(5H,m)有一組歸屬于苯環(huán)的信號,δ12.37有一羥基單峰信號,它處于特別低場,表明該羥基與臨近的羰基形成了分子內(nèi)氫鍵。上述化學(xué)位移值與文獻(xiàn)化合物canolideE2的極為相似(McKee等,1996),說明化合物1具有與canolideE2相同的結(jié)構(gòu)母核。不同之處僅在于化合物1無丙基信號,而有一組苯環(huán)信號。文獻(xiàn)報(bào)道化合物canolideE2的H-4化學(xué)位移為δ3.67(1H,br.m,H-4),而化合物1的H-4則為δ5.04(dq,J=8,8Hz,H-4),提示該苯基可能位于C-4位,使得H-4受苯環(huán)的去屏蔽效應(yīng)影響而移至低場。根據(jù)上述分析說明化合物1可能為canolideE2的C-4位丙基被苯基取代的衍生物。仔細(xì)分析化合物1的13CNMR(DEPT)譜,化合物有25個(gè)碳原子組成,除了一組苯環(huán)信號δ127.7(2×C)、127.2(2×C)、125.8、143.1外,其余碳共振信號與canolideE2的完全一致(McKee等,1996),不同之處僅在于取代基的差異(表1)。據(jù)此推測化合物1的結(jié)構(gòu)為:6,6-二甲基-12a-(2α,3α-H)-12a-(2-甲基-3-羥基丁?；?-8b-羥基-4-苯基-吡喃并-二氫香豆素[6,6-Dimethyl-12a-(2α,3α-H)-12a-(2-methyl-3-hydroxybutanoyl)-8b-hydroxy-4-phenyl-pyranodihydrocoumarin,1],此為一新化合物,命名為滇南紅厚殼內(nèi)酯A(calopolyanolideA,1)?；衔?:黃色油狀物。[α]26DD26=-9.960(CHCl3,c0.23);2的質(zhì)譜中分子離子峰m/z422并結(jié)合13CDEPT推定其分子式為:C25H26O6。IR中3500、1713、1647、1580、1495cm-1吸收峰說明分子中有羥基、羰基、雙鍵、芳環(huán)存在。上述數(shù)據(jù)表明化合物2與化合物1具有相同的分子組成和取代基,但比懸光度相差很大。仔細(xì)比較兩者的1HNMR數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),化合物1的H-10信號為δ4.34(1H,dq,J=7,3Hz),H-11信號為δ2.47(1H,dq,J=7,3Hz),此偶合裂分清楚的表明化合物1中位于C-10和C-11的甲基處于同側(cè)。而化合物2的H-10和H-11信號分別為δ4.19(1H,dq,J=7,11Hz)、2.49(1H,dq,J=7,11Hz),但其偶合常數(shù)差異較大,提示二者可能在C-10和C-11的立體構(gòu)型有異,分析這些偶合常數(shù)的變化,經(jīng)與文獻(xiàn)(McKee等,1996)相比較,提示化合物2中位于C-10和C-11的二甲基處于異側(cè),即此二甲基的構(gòu)型與calanolideE2相一致?；衔?的13CNMR(DEPT)與化合物1極為相似,也給出25個(gè)碳原子,除了一組苯環(huán)共振信號外(表1),其余信號與CalanolideE2相一致。綜上所述,化合物2的結(jié)構(gòu)為:6,6-二甲基-12a-(2α,3β-H)-12a-(2-甲基-3-羥基丁?；?-8b-羥基-4-苯基-吡喃并-二氫香豆素[6,6-Dimethyl-12a-(2α,3β-H)-12a-(2-methyl-3-hydroxybutanoyl)-8b-hydroxy-4-phenyl-pyranodihydrocoumarin,2],為一新化合物,命名為滇南紅厚殼內(nèi)酯B(calopolyanolideB,2)。cnmr化合物結(jié)構(gòu)IR用Bio-RadFTS-135型分光光度計(jì)測定,KBr壓片。EI-MS用AutoSPEC3000型質(zhì)譜儀測定,采用20eV或70eV的轟擊電離源。NMR用BrukerWH-400超導(dǎo)核磁共振儀測定,TMS作內(nèi)標(biāo),CDCl3作溶劑。青島海洋化工廠出品的200-300目硅膠,以及日本三菱化成公司出品的MCICHP-20P、RP-18作為柱層析材料;薄層層析用青島海洋化工廠出品的硅膠板指導(dǎo)分離。展開劑:A.EtOAc:petrol(3:7,v/v);B.Me2CO:petrol(2:8);C.H2O:MeOH(2:98)。顯色劑:A.I2;B.5%H2SO4-EtOH。滇南紅厚殼(CalophyllumpolyanthumWall.etChoisy)種子陰干,粉碎的粗粉6.1kg,用乙醇冷浸3次,每次72h,合并濾液,減壓回收溶劑得乙醇浸膏(890g)。取其中240g浸膏,以甲醇溶解后,吸附于100-150目硅膠,室溫?fù)]發(fā)至干,經(jīng)硅膠柱層析(1500g,200-300目),用EtOAc-petrol(0∶10-1∶1)梯度洗脫;每250mL為一流份,共得12個(gè)組分,其中第1-17流分合并為A1組分,第25為A6組分,第34-42為A12組分。A1組分在EtOAc中重結(jié)晶,析出黃色針狀結(jié)晶化合物3(900mg)。A12組分用EtOAc重結(jié)晶得棕色針晶化合物5(80mg)。將A6組分經(jīng)MCICHP-20P柱層析(H2O-MeOH,2∶8)、RP-18柱層析(H2O-MeOH,2∶8)、反復(fù)硅膠柱層析(EtOAc-petrol,1∶9-1∶1),得化合物1(120mg)、2(240mg)、4(60mg)?；衔?:黃色油狀物,[α]26DD26-176.540(CHCl3,c0.21);IRνmaxcm-1:3500(OH),1709(C=O),1646(C=C),1580,1448。EI-MS(20eV)m/z:422[M]+(36),407[M-Me]+(100),389[407-H2O]+(1),363(9),305(4),274(5),229(2),152(2),91,77;1HNMR(CDCl3)δ:1.04(3H,s,H-19),1.15(3H,d,J=7Hz,H-22),1.27(3H,d,J=7Hz,H-21),1.39(3H,s,H-20),2.47(1H,dq,J=7,3Hz,H-11),3.21(2H,br.d,J=8Hz,H-3ab),4.34(1H,dq,J=7,3Hz,H-10),5.04(dq,J=8,8Hz,H-4),5.40(1H,d,J=10Hz,H-7);6.54(d,J=10Hz,H-8),7.11-7.23(5H,m,H-14,15,16,17,18);12.37(s,8b-OH);13CNMR數(shù)據(jù)見表1。化合物2:黃色油狀物,[α]26DD26-9.960(CHCl3,c0.23);IRνmaxcm-1:3500-2600(OH),1713(C=O),1647(C=C),1580,1495,1191,1163,1125。EI-MS(20eV)m/z:422[M]+(54),408(51),407[M-Me]+(100),377(7),363(9),307(3),291(6),273(11),263(3),229(2),203(7),107(13),91(10),77;1HNMR(CDCl3,)δ:1.10(3H,s,H-19),1.14(3H,d,J=7Hz,H-22),1.31(3H,s,H-20),1.38(3H,d,J=7Hz,H-21),2.49(1H,dq,J=7,11,H-11),3.22(2H,br.d,J=8Hz,H-3ab),4.19(1H,dq,J=7Hz,11Hz,H-10),5.04(dq,J=8,8Hz,H-4),5.42(1H,d,J=10Hz,H-7);6.56(1H,d,J=10Hz,H-8);7.13-7.26(5H,m,H-14,15,16,17,18);12.48(s,8b-OH)。13CNMR數(shù)據(jù)見表1。化合物3:黃色針晶(EtOAc),[α]26DD26+78.900(CHCl3,c0.58);IRνmaxcm-1:3500-2500(OH),1704(C=O),1650(C=C),1624,1579,1446,1299,1193,1166,1146,1125。EI-MS(20eV)m/z:388[M]+(47),374(54),373[M-Me]+(100),345[373-CO]+(8),329(13),301[329-CO]+(6),285(1),268(7),257(6),149(28),91。1HNMR(CDCl3)δ:0.83(3H,t,J=8Hz,H-15),1.13(2H,m,H-14),1.17(3H,d,J=7Hz,H-19),1.37(3H,s,H-16),1.42(3H,s,H-17),1.43(3H,d,J=7Hz,H-18),1.51(1H,m,H-13),1.78(1H,m,H-13),2.49(1H,dq,J=6,11Hz,H-11),2.68(1H,br.d,J=8Hz,H-3),2.79(1H,br.d,J=8Hz,H-3);3.66(1H,brm,H-4),4.11(1H,dq,J=6,11Hz,H-10);5.43(1H,d,J=10Hz,H-7);6.57(1H,d,J=10Hz,H-8);12.45(s,8b-OH)。13CNMR數(shù)據(jù)見表1。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(McKee等,1996)報(bào)道的calanolideE2一致?；衔?:棕色針晶(EtOAc),[α]26DD262.6(CHCl3,c0.29);IRνmaxcm-1:3615(OH)、1647(C=C);EI-MS(20eV)m/z:238[M]+(9),220[M-M]+(83),202[220-H2O]+(27),177[220-C3H7]+(50),159[177-H2O]+(55),119(78),121(80),107(100),93(79),81(100),69(66),52(71),55(92)。1HNMR(CDCl3)δ:0.66(3H,s,H-14);0.83(3H,d,J=7Hz,H-12),0.92(3H,d,J=7Hz,H-13);1.17(2H,brm,H-9);1.24