辛伐他汀對高肺血流并野百合堿注射大鼠肺動脈高壓模型的影響

辛伐他汀對高肺血流并野百合堿注射大鼠肺動脈高壓模型的影響

動脈高壓（ph）是一種常見的臨床綜合征。最常見的是左右冠狀動脈粥樣硬化。這會導(dǎo)致右心衰竭和死亡。目前治療PH的標(biāo)靶已開始從單純血管擴張劑轉(zhuǎn)向抗血管重構(gòu),尤其是抗細胞增殖治療,但尚缺乏臨床長期使用方便、副作用輕微且效果良好的理想藥物。近年文獻報道辛伐他汀在一些PH的動物模型中能有效減輕甚至逆轉(zhuǎn)PH及肺血管重構(gòu)(PVR)。本研究通過高肺血流并野百合堿注射建立PH動物模型,采用辛伐他汀進行處理,探討辛伐他汀在防治PH中的作用和價值。1對象和方法1.1各組大鼠腹主動脈-下腔靜脈造瘺成功的檢測雄性SD大鼠40只(體質(zhì)量250～300g,購自四川大學(xué)實驗動物中心),平均隨機分為4組:安慰劑組、辛伐他汀A組[1mg/(kg·d)]、辛伐他汀B組[2mg/(kg·d)]、正常組。各組平均體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。前3組參照文獻的方法,行大鼠腹主動脈-下腔靜脈造瘺手術(shù),造瘺術(shù)結(jié)束前于下腔靜脈抽血觀察,若為動靜脈混合血則表示造瘺成功。參照文獻的方法配制野百合堿(購自美國Sigma公司),于造瘺術(shù)后第7d一次性腹腔注射野百合堿60mg/kg。1.2辛伐他汀對造瘺術(shù)后第535d的給藥安慰劑組于造瘺術(shù)后第5～35d給予安慰劑每日1次灌胃;辛伐他汀A、B組于造瘺術(shù)后第5～35d分別給予辛伐他汀1mg/(kg·d)或2mg/(kg·d)每日1次灌胃;正常組正常飼養(yǎng)35d,不予任何處理。1.3流量動力學(xué)指標(biāo)的測定1.3.1麻醉后右心導(dǎo)管術(shù)與多導(dǎo)生理儀檢測造瘺術(shù)后第37d,即辛伐他汀停藥1d,行12%烏拉坦8mL/kg腹腔內(nèi)注射麻醉,經(jīng)頸靜脈插管,肝素化后右心導(dǎo)管術(shù)與多導(dǎo)生理記錄儀檢測mPAP。測量完畢后,抽靜脈血3mL,用酶法測定血清總膽固醇。1.3.2rv/lv+s游離右心室(RV)和左心室加室間隔(LV+S),洗去血液,用濾紙吸去表面水分,分別用電子天平稱重,計算RV/(LV+S)。1.4免疫組化染色將氣管及完整心、肺自胸腔取出,10%中性福爾馬林經(jīng)氣管緩慢注入肺內(nèi),使肺膜平滑膨脹,切取右下肺,浸泡于10%中性福爾馬林液中固定48h,常規(guī)石蠟包埋,5μm厚度連續(xù)切片。切片分別行VanGieson彈力纖維(EVG)特殊染色和免疫組化LsAB法行α-平滑肌肌動蛋白(α-actin)染色(α-actin小鼠抗大鼠單克隆抗體購自武漢博士德公司)。EVG染色使肺小動脈彈力纖維著色,顯示肌層厚度;α-actin染色陽性表達使肌細胞呈黃色。1.5關(guān)于力學(xué)指標(biāo)的觀察1.5.1evg染色切片觀察采用Nikon&Spot圖象采集處理系統(tǒng)(美國),400倍光鏡觀察EVG染色切片,每張切片隨機計數(shù)20根管徑在50～150μm的肺小動脈,計算其管壁厚度和外徑。血管壁厚百分比(%)=2×管壁厚度÷外徑×100%。1.5.2切片觀察和-actin染色400倍光鏡觀察α-actin免疫組化染色切片,每張切片隨機觀察30根管徑在15～50μm的小動脈。α-actin染色陽性即為肌化。無肌性血管肌化程度(%)=(完全肌化+部分肌化的血管數(shù))÷30×100%。1.6統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準差表示,組間比較采用單因素方差分析和q檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1治療冠心病基肥與對照組相比,安慰劑組大鼠mPAP升高,右心室肥厚(P<0.05)。辛伐他汀治療不同程度減輕了上述改變(P<0.05);而辛伐他汀A、B組間比較,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。見附表。2.2組m肺小動脈-actin的表達增加安慰劑組大鼠直徑50～150μm的肺小動脈血管壁增厚,15～50μm肺小動脈α-actin的表達增加,與正常對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。辛伐他汀治療不同程度減輕了上述改變(P<0.05);而辛伐他汀A、B組間比較,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。見圖1、2和附表。2.3兩組患者mmol/l、mmol/l、mmol/l、mmol/l、.42.0.42.3.4.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3m正常組、安慰劑組、辛伐他汀A組、辛伐他汀B組血清總膽固醇濃度分別為(1.404±0.147)mmol/L、(1.455±0.247)mmol/L、(1.387±0.206)mmol/L、(1.434±0.229)mmol/L,組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3辛伐他汀治療ph的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)大量左向右分流的先天性心臟病若不及時手術(shù)根治,則可能并發(fā)梗阻性PH,從而使患者喪失手術(shù)機會。如何延緩先心病PH的形成;在已發(fā)生了梗阻性PH而喪失手術(shù)機會的患者如何減慢PH的進一步惡化,甚至在一定程度上逆轉(zhuǎn)PH,是小兒心臟病學(xué)所面臨的重要課題之一。目前普遍應(yīng)用的大鼠PH模型有低氧、野百合堿誘導(dǎo)、高肺血流(腹主動脈-腔靜脈造瘺或一側(cè)肺切除)PH模型。本研究中,我們在國內(nèi)首次通過腹主動脈-下腔靜脈分流加野百合堿注射建立PH動物模型,該動物模型的病理生理改變與左向右分流型先心病PH的病理生理改變更為接近。隨著對肺血管重構(gòu)的細胞生物學(xué)研究的快速進展,學(xué)者們已經(jīng)明確提出,肺血管重構(gòu)應(yīng)當(dāng)成為各種肺動脈高壓癥的治療的標(biāo)靶。他汀類藥物最早出現(xiàn)于1987年,在高脂血癥的治療中廣泛使用,近來發(fā)現(xiàn)多數(shù)他汀類藥物尚有多種調(diào)血脂以外的藥理作用。但目前罕見有關(guān)辛伐他汀用于PH的報道。本研究我們對肺小動脈的體視學(xué)改變進行了觀察。α-actin是血管平滑肌細胞收縮蛋白的主要構(gòu)成成分之一,直徑在15～50μm的小動脈由單一彈力層構(gòu)成管壁,為無肌性小動脈。無肌性小動脈出現(xiàn)α-actin陽性表達,則提示小動脈肌化。實驗證實辛伐他汀能明顯減輕無肌性血管的肌化和血管壁增厚,說明辛伐他汀抑制了肺小動脈的重構(gòu)。辛伐他汀正是通過抑制肺血管重構(gòu),進而抑制肺循環(huán)后負荷的增加,減輕了PH和右心室肥厚。由于辛伐他汀已有多年的臨床使用經(jīng)驗,是心內(nèi)科常用藥物,該藥長期應(yīng)用毒副作用很小、經(jīng)濟負擔(dān)不重、一天一次的用藥依從性良好,故我們初步認為辛伐他汀可作為左向右分流型先心病的長期治療用藥。本研究的目的之一是為辛伐他汀治療PH的臨床應(yīng)用進行前期研究,所以我們進行了初步的劑量探討。我們將辛伐他汀溶于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中形成混懸液,吸取溶液灌胃,從而保證了劑量的準確。辛伐他汀2mg/(kg·d)是參考Nishimura的用藥劑量,由于該劑量超過了成人(50kg)用量(5～80mg/d),所以我們又選擇了1mg/(kg·d)的劑量進行研究。結(jié)果顯示,辛伐他汀治療無論是1mg/(kg·d)還是2mg/(kg·d),均能有效減輕PH和肺血管重構(gòu),且兩組間治療效果的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示在臨床應(yīng)用治療PH時,可考慮使用每天1