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赤芍對(duì)大鼠腺泡內(nèi)肺動(dòng)脈構(gòu)形重組的影響
內(nèi)支泡動(dòng)脈是動(dòng)脈的末段,包括呼吸細(xì)氣管、肺泡管和肺周期前的環(huán)肌、部分肌和無肌動(dòng)脈。近年來的研究表明,IAPA構(gòu)形重組是肺動(dòng)脈高壓(pulmonaryhypertension,PHT)時(shí)肺血管的主要病變。本實(shí)驗(yàn)觀察赤芍對(duì)大鼠PHT發(fā)生過程中,IAPA構(gòu)形重組的影響和機(jī)制。材料和方法1mct和赤嫌犯模型1.1肺動(dòng)脈高壓組(M組)2%野百合堿(monocrotaline,MCT)水溶液(MCT結(jié)晶為Sigma公司產(chǎn)品),按0.25ml/100g體重,1次肩胛區(qū)皮下注射,即可誘發(fā)肺動(dòng)脈高壓。在MCT注射前3天,開始腹腔注射生理鹽水0.1ml/100g體重,每天1次,至動(dòng)物被處死日。1.2赤芍組(P組)在1次皮下注射MCT前3天,開始腹腔注射赤芍液(每毫升含赤芍生藥1g,同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究所制劑),按0.1ml/100g體重,每天1次,至動(dòng)物被處死日。1.3生理鹽水對(duì)照組(C組)以無菌生理鹽水替代MCT和赤芍液,給藥途徑和容量同P組。各組動(dòng)物均在MCT(或鹽水)皮下注射后第4、8、12、16、24天分批處死。2iapa的結(jié)構(gòu)表征2.1右心室收縮壓(RVSP)在動(dòng)物處死前,腹腔注射烏拉坦麻醉。將連有壓力傳感器和SJ-42型生理多道儀的聚乙烯導(dǎo)管,從頸外靜脈插入右心室,觀察和描記RVSP。2.2電鏡觀察測(cè)壓后,立即開胸取右肺下葉肺組織2粒(約1mm3),常規(guī)電鏡標(biāo)本半薄和超薄切片,光鏡定位,參照瞿一帆等的方法做“彈力纖維鞣酸-醋酸鈾組化電鏡染色”。OptonEM10C型透射電鏡觀察。2.3光鏡觀察以10%甲醛液氣管低壓灌注固定肺組織。取右肺下葉肺組織2片,常規(guī)石蠟連續(xù)切片,分別做HE、彈力纖維加膠原纖維復(fù)合染色。光鏡觀察。2.4IAPA中膜厚和血管構(gòu)形百分值彈力纖維染色切片,在全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)(MDZD型,Leitz)分別測(cè)量伴行呼吸細(xì)支、肺泡管的環(huán)肌型和部分肌型肺動(dòng)脈中膜厚度(MT%),單位面積肺組織內(nèi)IAPA3種類型血管(環(huán)肌型、部分肌型、無肌型)數(shù)目所占的百分值。2.5統(tǒng)計(jì)分析用IBMPC/XT386型計(jì)算機(jī),SAS軟包,對(duì)各項(xiàng)參數(shù)值分別進(jìn)行F檢驗(yàn)。并對(duì)RVSP、MT%、肌型肺小動(dòng)脈數(shù)目百分值等3項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行多元回歸分析。大鼠肌型及肺小動(dòng)脈的臨床各次給藥及病理改變1RVSPM組大鼠在注射MCT后第8天RVSP開始升高,至第16天,與C組或P組比較,差異有顯著性,P<0.05,見表1。2IAPA中膜厚度(MT)見表1。M組大鼠在注射MCT后第8天MT開始增大,與P組或C組相比較,差異有顯著性,P<0.05。3IAPA內(nèi)3種類型血管數(shù)目及其所占百分值,隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長,發(fā)生如下改變。M組大鼠肌型肺小動(dòng)脈(環(huán)肌型和部分肌型)所占百分值從46.17%(第4天)升高至63.89%(第24天),無肌型動(dòng)脈從58.85%(第4天)降至36.11%(第24天)。P組大鼠肌型與無肌型動(dòng)脈所占百分值,在實(shí)驗(yàn)全過程中的變化范圍為14.68%~19.17%,與C組(15.52%~17.07%)相比,差異無顯著性,P>0.05。4無肌細(xì)動(dòng)脈橫截面積(管腔面積)以P組最大(920.11±327.49μm),較M組大46.5%[(920.11-628.06)/628.06×100%],差異有顯著性(P<0.05)較C組(487.64μm)約大1倍(1.89)。將RVSP、MT、肌型肺小動(dòng)脈占IAPA總數(shù)目的百分值等項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行多元回歸分析,各指標(biāo)之間具有顯著的線性關(guān)系,復(fù)相關(guān)系數(shù)R=0.9580,P<0.01。5IAPA的形態(tài)學(xué)改變光鏡結(jié)合電鏡觀察(圖略),M組IAPA的早期血管改變主要是彌漫性內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變性,部分血管壁炎癥和血管周圍炎明顯,部分血管中膜平滑肌細(xì)胞變性、壞死,甚至僅留下血管的殘影,即所謂的“鬼影血管”(ghostartery)。血管壁內(nèi)、外彈力膜均有不同程度的破壞。P組動(dòng)物IAPA血管炎癥病變出現(xiàn)的時(shí)間較M組遲數(shù)天,程度較輕。內(nèi)皮細(xì)胞損傷和彈力膜破壞也明顯地輕于M組。在實(shí)驗(yàn)的中、后期(第12、16和24天組),M組動(dòng)物的IAPA仍有不同程度的血管炎現(xiàn)象,但多數(shù)血管壁中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大,胞漿豐富,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體明顯增多,細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原纖維和彈力纖維堆積增多,致使血管中膜顯著增厚。無肌細(xì)動(dòng)脈壁內(nèi)的周細(xì)胞增多,胞漿內(nèi)出現(xiàn)致密體和肌絲樣結(jié)構(gòu)等向平滑肌細(xì)胞分化的現(xiàn)象。P組動(dòng)物IAPA的上述改變不明顯。免疫組化作用1IAPA血管構(gòu)形改建是慢性肺動(dòng)脈高壓的重要血管病變。其病變以肌型動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞肥大、增生和細(xì)胞外膠原和彈力纖維堆積以及無肌細(xì)動(dòng)脈肌化為特征。這些改變與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似。確定肺毛細(xì)血管前細(xì)動(dòng)脈有周細(xì)胞(pericyte)存在,支持周細(xì)胞在病理情況下能向平滑肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化是使無肌型細(xì)動(dòng)脈發(fā)生肌化的重要原因。2赤芍注射液具有抑制實(shí)驗(yàn)大鼠肺動(dòng)脈壓升高和擴(kuò)張肺微血管的功能。此結(jié)果與赤芍的臨床療效和實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果相符。3赤芍對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠肺動(dòng)脈高壓的抑制效應(yīng)為22.56%[(5.79-4.44)/5.79kPa],雖與對(duì)照組相比仍有顯著性差異(P<0.05),但是對(duì)肌型肺小脈中膜增厚的抑制效應(yīng)高達(dá)43.87%(據(jù)表中數(shù)據(jù)計(jì)算),阻止無肌細(xì)動(dòng)脈肌化,達(dá)到與正常對(duì)照組鼠的無肌細(xì)動(dòng)脈數(shù)目無明顯差異的程度。進(jìn)一步證明赤芍減輕肺血管(IAPA)構(gòu)形改建的作用大于對(duì)肺動(dòng)脈壓升高的抑制作用,其原因可能與赤芍?jǐn)U張肺微血管作用以及文獻(xiàn)報(bào)道的抗凝血、抗纖維化作用
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