心肌損傷與心肌保護(hù)

心肌損傷與心肌保護(hù)中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系肖獻(xiàn)忠MyocardialInjuryandMyocardialProtection一、心肌損傷（myocardialinjury)MaincousesofmyocardialinjuryIschemiaincoronaryheartdisease

Ischemia-reperfusioninjuryMyocardialtoxicosis

Cardiacoverload

Nutritionalfactors(VitB1deficiency)Infection

MechanismsofmyocardialinjuryAcutemyocardialinjury

(example:ischemia-reperfusioninjury)

(1)ATP

deficiency(2)Calciumoverload-inducedhypercontraction(3)Osmoticgradientandcellswelling(4)Rapidgenerationofreactiveoxygenspecies(5)Inflammation

(6)

Openingofthemitochondrialpermeabilitytransitionpore(mPTP)JohansenJV,etal.BasicResCardiol,100:295–310(2005)缺血和再灌注導(dǎo)致心肌細(xì)胞不可逆損傷的主要機(jī)制(FerdinandyPetal,2007)2.

Chronicmyocardialinjury(myocardialremodeling)心肌重塑：指在心肌損傷過(guò)程中，由于持續(xù)負(fù)荷過(guò)重及神經(jīng)、體液過(guò)度激活，心肌組織在結(jié)構(gòu)、功能、數(shù)量及基因表達(dá)等方面所發(fā)生的適應(yīng)性變化。心肌缺血、心肌損傷、心肌重塑、心力衰竭之間形成惡性循環(huán)。心肌重塑的機(jī)制負(fù)荷過(guò)度神經(jīng)體液過(guò)度激活蛋白激酶

受體或力學(xué)感受器轉(zhuǎn)錄因子基因轉(zhuǎn)錄核心肌重塑原癌基因生長(zhǎng)因子膠原與膠原酶胎兒型蛋白表達(dá)增加心肌損傷Necrosisandapoptosismyocardialremodeling

HeartfailureIschemia慢性心肌損傷惡性循環(huán)的形成二、心肌保護(hù)實(shí)驗(yàn)研究主要進(jìn)展

1).心臟停搏液(cardioplegicsolutions)1950，Bigelow;1955,Melrose1).Coolcrystalloidcardioplegia

2).Coolbloodcardioplegia

3).Coolhyperpolarization

cardioplegia4).Warmbloodcardioplegia

SchipkeJD.EurJCardiothoracSurg.2006;29(4):479-85.LeosCLCardiolRev.2005;13(5):266-70.YangQ.AnnThoracSurg.2005;80(2):757-67.1.外源性心肌保護(hù)（exogenousmyocardialprotection)

50年代采用枸櫞酸鉀停搏，對(duì)心肌損傷較嚴(yán)重。70年代中期開(kāi)發(fā)含氯化鉀的高鉀停搏液(如St.Thomas液、UW液）使心臟外科發(fā)生革命性變化，使用10-30mM

氯化鉀，使心肌細(xì)胞靜息膜電位從約-85mV

降至-65～-40mV,從而使快Na+通道失活，阻斷動(dòng)作電位的傳導(dǎo)，引起“去極化停搏”。心臟停搏液存在的問(wèn)題1）低溫可通過(guò)影響酶的功能、細(xì)胞膜的穩(wěn)定性、糖的利用、ATP的生成和利用、以及pH值和滲透壓的平衡等因素造成心肌損傷；2）復(fù)雜心臟手術(shù)或心臟移植時(shí)由于長(zhǎng)時(shí)間缺血及隨后的再灌注導(dǎo)致心肌嚴(yán)重?fù)p傷，高K+低溫停搏仍不能有效保護(hù)；3）超極化心臟停搏液中含有diazoxide（二氮嗪）或

minoxidil（米諾地爾）或nicorandil（尼可地爾）等擴(kuò)血管藥物，可能會(huì)導(dǎo)致明顯血管舒張，出現(xiàn)嚴(yán)重低血壓。

自由基清除劑（Cu-Zn-SOD，過(guò)氧化氫酶，VitC，E，A,別嘌呤醇等）促紅細(xì)胞生成素(EPO)HDL甘氨酸，?；撬岽萍に卅?Rblockers，ACEINOdonor(L-arginine)Insulin……2).藥理學(xué)保護(hù)（Pharmacologic

protection）3).離子通道的激活劑和拮抗劑

KATPopener:nicorandil,diazoxideCa2+antagonist（L-type,T-type)NHE-1antagonist:HOE-642

NargeotJ.Circ.Res.2000;86;613-615GoldbergSP.AnnThoracSurg.2002,73(2):569-574.

mKATP

開(kāi)放導(dǎo)致下述結(jié)果：抑制Ca2+在線粒體堆積；抑制mPTP開(kāi)放；抑制氧自由基產(chǎn)生4).線粒體保護(hù)線粒體是細(xì)胞的產(chǎn)能和活性氧產(chǎn)生中心，也是介導(dǎo)細(xì)胞死亡（壞死和凋亡）的關(guān)鍵部位。心肌缺血-再灌注損傷時(shí)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP)開(kāi)放而導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡。

mPTP抑制劑環(huán)孢菌素A(cyclosporinA)可明顯減輕心肌缺血-再灌注損傷。WeissJN.Circ.Res.,2003,93:292-301JuhaszovaM.CardiovascRes.,2005,66:233–244各種心肌保護(hù)性物質(zhì)通過(guò)抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）抑制mPTP的開(kāi)放，從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。2.內(nèi)源性心肌保護(hù)（endogenousmyocardialprotection)心肌內(nèi)源性保護(hù)概念的提出：

1986，Murry發(fā)現(xiàn)缺血預(yù)適應(yīng)（ischemicpreconditioning）；

1988，Currie發(fā)現(xiàn)經(jīng)熱休克預(yù)處理后，大鼠心肌缺血-再灌注損傷減輕。1）缺血預(yù)適應(yīng)(ischemicpreconditioning)

指經(jīng)過(guò)一次或多次短暫缺血及再灌注后，心肌對(duì)隨后更長(zhǎng)時(shí)間的缺血損傷及再灌注損傷產(chǎn)生耐受的現(xiàn)象。Murryetal.Circulation1986:74:1124Fourcyclesof5minof

ischemiawithintermittentreperfusionwereshowntolimitinfarct

sizeby75%

OverviewofProposedSignallingPathways(-)mPTP

(1).ClassicIPC(2).

RemoteIPC

PrzyklenkK,BasicResCardiol98:149–157(2003)Inter-organprotectionagainstischaemia-reperfusioninjury.Briefischaemiaandreperfusionoforgansdistantorremotefromthehearthadtheabilitytomediateasubsequentreductioninmyocardialinfarctsize(seedashedblackarrows);Ageneralformofinter-organprotectionagainstischaemia-reperfusioninjury(solidblackarrows).

(HausenloyDJetal,CardiovascRes,2008)(3).

Ischemicpost-conditioning

ZhaoZQ.AmJPhysiol;285:579–88.2003ZhaoZQ.CardiovascularResearch70:200–211,2006SunHY.AmJPhysiol

288:H1900–1908.2005RISK:reperfusioninjurysalvagekinase再灌注損傷挽救激酶Hausenloy.CardiovascularResearch63:305–312,2004MatsuiT,Circulation，104(3):330–5，2001YangXM,JMolCellCardiol，36(3):411–21.2004RavingerováT.MolecularandCellularBiochemistry，247:127–138,2003.缺血后適應(yīng)的主要信號(hào)通路(FerdinandyPetal,2007)PreconditioningversusPost-conditioning(4)PharmacologicPCAdenosine,Sevoflurane,IsofluraneRossA.JAmCollCardiol,2002，39(2)：338-340.WillemsL.CardiovascularResearch,2005,66:245–255缺血性心臟疾病危險(xiǎn)因子對(duì)心肌缺血-再灌注損傷及心肌保護(hù)的影響(FerdinandyPetal,2007)2）.熱休克蛋白（HSPs）的心肌保護(hù)作用。

熱休克反應(yīng)與熱休克蛋白

生物細(xì)胞在高溫環(huán)境下所表現(xiàn)的以基因表達(dá)變化為特征的反應(yīng)稱熱休克反應(yīng)（heatshockresponse,HSR），所產(chǎn)生的一組蛋白質(zhì)叫熱休克蛋白（heatshockproteins,HSP）。

除了熱休克外，許多其它理化及生物刺激都可誘導(dǎo)HSP的產(chǎn)生，故HSP又稱為應(yīng)激蛋白（stressproteins,SP）。

ClassificationandexpressionregulationofheatshockproteinsKregelKC.JApplPhysiol92:2177–2186,2002;BenjaminIJ.CirRes,83;117-132;19981、廣泛存在2、結(jié)構(gòu)保守3、在細(xì)胞正常生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用4、應(yīng)激狀態(tài)下表達(dá)增多，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用

HSP的特點(diǎn)

HSP的功能—分子伴侶（molecularchaperone）

1、幫助新合成蛋白質(zhì)的折疊，防止其互相聚集2、幫助蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)移位3、幫助變性蛋白質(zhì)的復(fù)性4、通過(guò)泛素-蛋白酶體通路（ubiquitin-proteasomepathway）清除嚴(yán)重受損的蛋白質(zhì)

熱休克蛋白的分子伴侶功能改變HSP70水平的方法心肌損傷模型保護(hù)作用參考文獻(xiàn)熱休克大鼠離體心I/R超微結(jié)構(gòu),心功能,酶釋放CurrieRW,1988心肌缺血,熱休克大鼠在體心I/R心肌力學(xué),梗塞面積DonnellyTJ,1992基因轉(zhuǎn)染小鼠心肌細(xì)胞,缺氧細(xì)胞膜損傷,酶釋放WilliamsRS,1993基因轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞,缺氧細(xì)胞存活率,LDH釋放MestrilR,1994轉(zhuǎn)基因小鼠離體心I/R心肌力學(xué),PlumierJC,1995

能量代謝RadfordNB,1996

梗塞面積HatterJJ,1996基因轉(zhuǎn)染(HSC70)H9C2,氧化應(yīng)激膜脂質(zhì)過(guò)氧化,酶釋放ChongKY,1998腺病毒心肌內(nèi)注射家兔在體心I/R梗塞面積OkuboS,2001病毒脂質(zhì)體,冠脈內(nèi)大鼠離體心I/R心肌力學(xué),酶釋放JayakumarJ,2000

凋亡SuzukiK,2000HSP70的心肌保護(hù)作用研究

McMillanDR,XiaoX,JBiolChem.1998,273(13):7523-8

XiaoX.EMBOJ.1999,18(21):5943-52YanLJ,XiaoX,EMBOJ.2002,21(19):5164-72,HSP70iHSC70HS27HSF1genotypeHS(430C,1h)

+/++/--/-18SAuthorsHSPs/HSF1

PublishedFanGCHSP20Circulation.2005,12;111(14):1792-9.HollanderJM

HSP27

Circulation.2004,7;110(23):3544-52.RadfordNB

HSP70

ProcNatlAcadSciUSA.1996,19;93(6):2339-42.

TrostSUiHSP70JClinInvest.1998,15;101(4):855-62.LauSSHSP70AmJPhysiolHeartCircPhysiol.2000,278(5):H1439-45.KimYKHSP70knockoutCirculation.2006,6;113(22):2589-97.YanLJ

HSF1knockoutEMBOJ.2002Oct1;21(19):5164-72.CardiacprotectionusingHSPs/HSF1TransgenicanimalsorknockoutmiceHSPs的抗細(xì)胞凋亡作用及其機(jī)制研究Casp.3SmacC23cleavageHSP70HSP70GarridoC.BBRC,286,433–442，2001BeereHM,TICB，11(1):6-10,2001

JiangBM,FreeRadBioMed.39:658-667，2005LiuS,BBRC,354(1)：109-14，2007

JiangBM,CellStressChaperon.10(3):252-262,2005αBCBaxP53αBC+三、心肌保護(hù)轉(zhuǎn)化研究主要進(jìn)展轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)(translationalmedicine/research)BenchBedside定義：將基礎(chǔ)研究的成果“轉(zhuǎn)化”為臨床疾病診斷、預(yù)防、治療及預(yù)后評(píng)估的一種新概念和新的研究模式。其基本特征是多學(xué)科交叉合作,針對(duì)臨床提出的問(wèn)題,深入開(kāi)展基礎(chǔ)研究,并將研究成果快速應(yīng)用到臨床。中心內(nèi)容：1.將基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)快速地轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用（frombenchtobedside)；2.將臨床實(shí)踐中存在的問(wèn)題反饋至基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)科學(xué)家（frombedsidetobench)。轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)所涉及的學(xué)科生理學(xué)免疫學(xué)生物化學(xué)遺傳學(xué)生物學(xué)分子生物學(xué)基因組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)代謝組學(xué)...病理生理學(xué)病理學(xué)藥理學(xué)藥學(xué)臨床藥理學(xué)循證醫(yī)學(xué)診斷學(xué)……內(nèi)科學(xué)外科學(xué)兒科學(xué)傳染病學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)危重病醫(yī)學(xué)……BenchBedside高K+去極化停搏時(shí)，心肌細(xì)胞靜息膜電位降低。在這種較低的負(fù)膜電位下，存在一個(gè)內(nèi)向的非失活性Na+

“窗口”電流，加上心肌缺血、酸中毒引起的H+-Na+交換活化和缺血、低溫引起的Na+/K+交換受抑，導(dǎo)致心肌細(xì)胞中Na+負(fù)荷增加，通過(guò)Na+/Ca2+交換的反轉(zhuǎn)，致使心肌細(xì)胞中Ca2+超載、心肌攣縮和死亡。此外，細(xì)胞膜去極化超過(guò)L-型Ca2+通道的激活閾值時(shí)還會(huì)導(dǎo)致Ca2+的窗口電流，加劇Ca2+超載。所以,心臟停搏液后續(xù)研究的重點(diǎn)在于避免去極化帶來(lái)的有害作用。1.關(guān)于心臟停搏液的轉(zhuǎn)化研究

FallouhHBetal.Targetingforcardioplegia:arrestingagentsandtheirsafety,CurrentOpinioninPharmacology2009,9:220–226.PotentialmechanismsofNa+andCa2+loadingofthecardiacmyocytesduringdepolarisedarrest.（FallouhHBetal，2009）Thecellulartargetsforcardioplegicarrestandexamplesofpharmacologicalagents.（FallouhHBetal，2009）兩個(gè)臨床試驗(yàn)：theAcuteMyocardialInfarctionSTudyofADenosine(AMISTAD-I)、(AMISTAD-II)1.236例心?；颊咝腥芩ㄖ委煏r(shí)靜脈內(nèi)連續(xù)輸注腺苷能使前壁心肌梗死病人的心梗面積減小67%，但對(duì)其它心梗無(wú)明顯作用。

（MahaffeyKW

etal,JAmColl

Cardiol34:1711–1720,1999）2.2118例ST升高的心梗病人經(jīng)溶栓或PTCA治療時(shí)經(jīng)靜脈給予腺苷。結(jié)果顯示：大劑量組（70mg/kg/min)可減小心梗面積，但小劑量組（50mg/kg/min)無(wú)效,故建議采用70mg劑量再進(jìn)行大規(guī)模臨床試驗(yàn)。

（RossAMetal,JAmColl

Cardiol45:1775–1780,2005）2.關(guān)于腺苷的心肌保護(hù)轉(zhuǎn)化研究3.關(guān)于ATP敏感性K+通道（KATP）開(kāi)放劑的臨床試驗(yàn)前壁心肌梗死病人81例經(jīng)PTCA恢復(fù)血液灌流，隨機(jī)分為兩組，治療組靜脈給予尼可地爾（nicorandil)，另一組為對(duì)照。治療組左室功能恢復(fù)好，心衰與惡性心律失常發(fā)生少，心肌微血管血液灌流好（無(wú)復(fù)流現(xiàn)象改善）。

ItoHetal,JAmColl

Cardiol,33(3):654-60,1999SakataYetal,AmHeartJ,133:616-21,1997(20例）觀察尼可地爾對(duì)穩(wěn)定性心絞痛病人冠脈事件發(fā)生率的影響。5126例穩(wěn)定性心絞痛病人隨機(jī)分為兩組，治療組（n=2565)給予尼可地爾20mg,2次/天；對(duì)照組（n=2561)給予安慰劑。主要觀察終點(diǎn)包括：冠心病死亡、非致死性心肌梗死、胸痛住院、急性冠脈綜合征等。結(jié)果：尼可地爾明顯降低了穩(wěn)定性心絞痛病人的主要冠脈事件的發(fā)生率。

IONAstudygroup,Lancet,359:1269-75,20024.以線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)為靶點(diǎn)的心肌保護(hù)轉(zhuǎn)化研究缺血后適應(yīng)和環(huán)孢菌素A對(duì)小鼠和人類(lèi)心肌的保護(hù)作用。A.小鼠心肌缺血；B.經(jīng)PTCA進(jìn)行缺血后適應(yīng)的心肌梗死病人：C.環(huán)孢菌素A治療心肌梗死病人；SPECT：?jiǎn)喂庾影l(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)。ThibaultHetal.Long-termbenefitofpostconditioning.Circulation2008;117:1037–1044.PiotCetal.Effectofcyclosporineonreperfusioninjuryinacutemyocardialinfarction.NEnglJMed,2008;359:473–481.5.關(guān)于遠(yuǎn)隔部位缺血預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)的臨床研究

TakagiH對(duì)2000-2007年間四個(gè)隨機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)和Meta分析，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)隔部位預(yù)適應(yīng)能減輕心肌損傷。作者年份心血管手術(shù)例數(shù)IPC血管方法指標(biāo)結(jié)果Hausenloy2007冠脈搭橋57上肢（5/5m)×3TnT

降低Ali2007腹主動(dòng)脈瘤82髂總動(dòng)脈（10/10m）×2TnI

降低Cheung2006先心病37下肢（5/5m)×4TnI

降低Günaydin2000冠脈手術(shù)8上肢（3/2m)×2LDH降低TakagiHetal,AmJCardiol,2008,102:1487–14886.關(guān)于揮發(fā)性麻醉藥的心肌保護(hù)轉(zhuǎn)化研究最近的一個(gè)meta-analysis包括22個(gè)隨機(jī)臨床試驗(yàn)，共1922例心臟手術(shù)病人（其中1018例接受了七氟烷（sevoflurane）或地氟烷（desflurane），904例采用全部靜脈麻醉。結(jié)果：與全部靜脈麻醉者比，上述揮發(fā)性麻醉藥明顯減少了心梗發(fā)生率、總死亡率、TnI釋放、正性肌力藥物支持率、ICU觀察時(shí)間、住院時(shí)間、機(jī)械通氣時(shí)間以及追蹤一年內(nèi)的心臟事件發(fā)生率。LandoniGetal,MinervaAnestesiol,75:269-73,2009LandoniGetal,JCardiothorac

Vasc

Anesth,21:502-11,20077.關(guān)于促紅細(xì)胞生成素治療心肌梗死和心衰的轉(zhuǎn)化研究促紅細(xì)胞生成素對(duì)心肌梗死大鼠紅細(xì)胞比容、心臟舒縮功能及心肌中微血管生成的影響(

RuifrokWPTetal,EuroJPharmacol585,270–277,2008)vanVeldhuisen,DJetal,Eur.J.HeartFail.9,110–112,2007關(guān)于促紅素對(duì)心肌梗死和慢性心衰的治療研究，近年來(lái)有幾個(gè)大樣本、多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中，其結(jié)果受到全球的關(guān)注和期待。

HEBEⅢ試驗(yàn),心肌梗死

REVEAL試驗(yàn),心肌梗死

RED-HF試驗(yàn),慢性心衰心肌損傷與心肌保護(hù)研究已有30余年歷史，心肌內(nèi)源性保護(hù)研究也已有20余年歷史。在實(shí)驗(yàn)研究中獲得的結(jié)果是鼓舞人心的，大量研究表明以Ca2+超載、活性氧產(chǎn)生、炎癥反應(yīng)、能量代謝紊亂等分子事件為靶點(diǎn)的許多藥物均具有心肌保護(hù)作用，但以這些實(shí)驗(yàn)研究為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)結(jié)果則比較令人失望。轉(zhuǎn)化研究的成果尚不盡人意。實(shí)驗(yàn)研究與臨床研究的這種反差實(shí)際上是由實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c臨床病人之間的大量差異所決定的?；A(chǔ)科學(xué)工作者與臨床專(zhuān)家必須密切交流，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，共同改進(jìn)未來(lái)的研究。評(píng)述四.中南大學(xué)病理生理學(xué)系近年心肌保護(hù)研究工作簡(jiǎn)介1.心肌缺血預(yù)適應(yīng)相關(guān)基因的

分離及其功能研究UsingcDNAmicroarraytoanalyzethegeneexpressionprofileoftransientmyocardialischemia/reperfusion.MolecularbasisofSSHTestercDNAwithadaptor1DrivercDNATestercDNAwithadaptor2FirsthybridizationSecondhybridizationTworoundPCRIdentificationofup-regulatedgenes

usingreverseNortherndotblotShamoperatedIschemic/reperfusedFig.1-9ResultsofreverseNortherndotblot

InsilicoCloningFig.3-1BlastnanalysisofMipu1cDNApredictedbyGENSCANprogamwithdbESTdatabase

Fig.3-25′RACEofMip1

1:ΦX174/HaeⅢMarker;2:a350bpfragmentproducedby5′RACEofMip1

603bp310bp12

5′RACEgcaggcgcgggggctctgttgctggcagttctgtggcagctgtgagacggaggacgctgTAGggagatagctctcggtctcagtctctgaatgtggaccgtcaaagctgggaggaaagaATGcctgcagcccgagggaaatcaaaatccaaggcaccagtgacttttggggacttagccatctacttctcacaggaggaatgggaatggctgagtcccaatcagaaggatttgtacgaagatgtcatgttggagaactatcacaatctggtctcagttggtcttgcctgccggaggccaaatatcatcgccttgttggagaaagggaaagcaccatggatggtggagccatcaagaaagcgccggggtcctgaattagggtctaaggatgagaccaagaagttaccaccaagtcaatgtaacaaatctgggccaagcatctgtaagaaaccagattcttcacaacaaaaggttcccacagagaaggcaaaacataacaagaatgcagtcccaagaaaaaacaagaaagggcattcaggcaagaaatctttaaagtgtaatagctgtgggaaaaccttttttcgaagcttatctcttaaactccatcaaggctttcacactggagagaggtcttatgagtgcagtacttgtggacaagttttcaggcagatcttatctctcattcttcaccagagagttcacactcagaataaaagctatgaatgtgataagtgtggggacatttttaataaaaagttaactctgatgattcatagaagaagtcataatggaaaggaaaattttcaccatgagaagacttcagattcatgcccatccctcagtccacaccataataatcacgctattgacagcattcaccagtgcagaaaatgtgggaaagtcttcagccggatgtcatcccttttacttcataagaagattcacaacagaaagagaatacaaaaatacagtgcatgtgggagaggcttcaaaaagaagccagtccttgtacataaaagaatttgtattgggaagaaaactcatgaaaataaggccttaattcaaagtctcaggcagagaacttaccagtcagaaaacccttttacgtgtaggaaatgcaggaagtcctttagtaggatctcagccttaatgcttcatcagagagctcacacttcagggaacccctacaaatgtgataagtgtcagaaagacttcggacgactttcaacccttattctgcacctcagaattcatagtggggagaagcagtttaagtgcaacaagtgtgagaaggtatgcaatcgcctttcatcctttattcagcacaagaaaatccataaaaggaaaaagaaactcatcgagtgcaaggaatgtggaaagatgtttggtggaatgaaaaaccttaaagtacatctcaacatccattcggaggagaaacctttcaagtgcaataagtgtagtaaagtttttggccgtcagtcatttcttagtgaacatcaaagaattcatactggagagaagccctatcagtgtgaagaatgtgggaaagccttcagtcaccggatctctcttacccgacataagagaattcacagcgaggacagaccttacgaatgtgacctgtgtgggaaagccttcagccagagtgctcatcttgctcagcatgaaagaattcacactggagagaagccttacgcgtgcaaaatatgtaagaagtccttcactcagcgcatatccctcattctacatgaaagaagtcacactggggagaagccttacgagtgtaatgaatgtgggaaggcattcagtagtggctcagaccttatccgacatcagcgaagtcattcttcagagaaaccatatgaatgtagcaaatgtggtaaggcatatagccggagctcatctctgattcgacatcagagtatacattcggaggaaatgtccTAAggctgtcgctatatctgcaaaagctaaaaaggacatcaaagaagtgttcagagacatggaggatgtgtgtaagtgttcttgacttatgatgacgtatgtcccaataaacccatcgtaagttgaagcgtctgagacaaacagatatttaatatacctgacctaccaaatgtgatcatttagcagcacagtgtaatgtggagtcccagttgttcattctcctgactgtatggctttctggaagccatggcctgatcccgctgcccagcattgtgagagttagtatcctgcgtaccatccgcctaggtcacttttacccaattcctagttgaatggatattgcttctgtactatcgtaatgctaaaaaaatcataaattgggaactatctgcctataacatattttgtgtatgtggggccgttataatattctccctttgaaagccaaagaacaaaagtagttggtggattttgaagtgaagatctgaaatcagctgaggtatgctcagaattttggatcagggtttgtgaatgaaggtgtttttcaattggcatttctagtgtagtggagctttgagcctgagttgaggtcccaggaaaatagagtattaagtctaacaggcaaaccaggcaaagtagggtgcctctttctcctgacagatctgtgttggggtgagaacaaaaagagtgagtctttaggttgctagaaatagtagctacagtggatgtggaaaagtagtcaataccacaaaagataccctgagaaaattttttaagacaagctgggggcttgggcaggagatactgaaaaatgaggaacttcagagcagggagaagctattttttacttttttacttgaaaataaactgtctatatttatataagtaaacagtgttttcatgcaatatttccagttgctgtacaaaaaattactcttgagatacatgtttgggttttcatggtctggatatttgtgccaccccaaaactcatatgttgaagccctaacccttcaatatggtgatattttgaaatgagattaatgaagtcatgatgtggatgggcctttttgatacgctttgatcagacacacaagaaggctttgtcttcttctgtcccatgcaagaacacaggcaggccatctgcaaaccaaggaaaaaccctcaccagaacctgaccagtttggtactctcaccttggacttcagcttatagcggaactacgaggacctagtttctctgaagtcagcctgtctgtgatactgtgttatagagcacctcaaactgattagttcgtggaagaactcctaggttaaggtactggctgttttcctttgtcctgtccaacacgttcaatgtattttttttggtctccttttccagcctctgtaagctatttaaAATAAAgtctgaattcttttgtgtgattaggtcatacacAAAAAAAAAAAAAA

Fig.3-6CharacterofMip1cDNA

Fulllength:3396bp，ORF:1827bpNorthernblotanalysisofMipu1mRNAduringmyocardialischemiaandreperfusioninrats.Ratssufferedmyocardialischemiafor10min,andthenreperfusionfor1h,3h,6h,12h,24h,3dor5d(n=6).InsituhybridizationofMipu1mRNAinischemicandreperfusedmyocardium.A&B,Sham;C&D,Ischemia10min/reperfusion6h;E&F,negativecontrol.WesternblotshowedtheexpressionofMipu1proteininthesham-operatedheartandinfarctedheart.

1718pcDNA3.1-C2C12Mip1β-actinIdentificationofhighexpressioncellclonesbyWesternblot.17,18:clone17and18transfectedwithMip1-pcDNA3.1/myc-His(-);pcDNA3.1-C2C12:C2C12cellstransfectedwithpcDNA3.1/myc-His(-)TheeffectofMip1overexpressiononLDHreleaseinducedbyH2O2treatment.

*,vspcDNA3.1-C2C12,P<0.01(n=6);#,vspcDNA3.1-C2C12+H2O2,P<0.01(n=6)0246810LDHreleasepcDNA3.1-C2C12Mip1-C2C12pcDNA3.1-C2C12+H2O2Mip1-C2C12+H2O2*#OverexpressionofMipu1inhibitedapoptosisinducedbyH2O2(0.5mmol/LH2O2for12h)inH9c2myocardialcells.RNAiofMipu1sensitizedH9c2myocardialcellstoH2O2-inducedapoptosis.

2.熱休克蛋白的心肌保護(hù)作用及其機(jī)制研究WesternblotshowedtheexpressionofαB-crystallin

,HSC70,HSP70andHSP90inmurinecardiactissuesinducedbyheatshockpretreatment(HS,42℃for15minandrecoveryfor24h).αBC

HSC70HSP70HSP90HSCtrolMSI/RHS+I/REffectofheatshockpretreatmentonmyocardialapoptosisinducedbyischemia-reperfusioninjuryinmice.M:marker;S:sham;I/R:ischemia30min/reperfusion12h;HS+I/R:I/Rafterheatshockpretreatment***###Heatshockpretreatment(HS)inhibitedtheactivationofcaspase-3,8,9inducedbymyocardialischemia/reperfusion(I/R)inmice.*,vssham,P<0.01;#vsI/R(30min/8h)，P<0.01.ExpressionofHSP70inC2C12cellsaftertransfectionwithpcDNA3.1-HSP70recombinantplasmid.pcDNA3.1pcDNA3.1-HSP70β-actinHSP70HSP70**：vsCtrlgroup,P<0.05.n＝3pcDNA3.1pcDNA3.1-HSP70Hoechst33258stainingshowedtheeffectofHSP70overexpressiononH2O2-inducedapoptosisinC2C12myogeniccellspcDNA3.1+H2O2(12h)pcDNA3.1-HSP70+H2O2(12h)

pcDNA3.1****###*：vsCtrlgroup,P<0.05;#：vsCtrlgroup,P<0.05,n＝3EffectofHSP70overexpressiononH2O2-inducedDNAladderinginC2C12myogeniccells.

MvectorHSP70

Ctrl12h24h12h24hH2O2vector

HSP70

0.5kb1.0kb2.0kb1.5kbProcas3P11vectorHSP70vectorHSP70vectorHSP70H2O21hH2O22hβ-actinCtrlHSP70overexpressioninhibitedtheactivationofCaspase-3inducedbyH2O2inC2C12cells.Procas8P20vectorHSP70vectorHSP70vectorHSP70H2O21hH2O22hβ-actinCtrlHSP70overexpressioninhibitedtheactivationofCaspase-8inducedbyH2O2inC2C12cells.

Procas9P10vectorHSP70vectorHSP70vectorHSP70H2O21hH2O22hβ-actinCtrlHSP70overexpressioninhibitedtheactivationofCaspase-9inducedbyH2O2inC2C12cells.

OverexpressionofHSP70inhibitedH2O2–inducedcleavageofBidtotBidinC2C12cellsBid(22kD)

vectorHSP70vectorHSP70vectorHSP70vectorHSP70H2O21hH2O22hβ-actinCtrlWestern-blotshowedtheeffectofHSP70overexpressiononcleavegeofBidtotBidinducedbyH2O2inC2C12cellstBid(15kD)H2O24h采用蛋白質(zhì)相互作用組學(xué)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)缺血-再灌注損傷時(shí)心肌中HSP70與32個(gè)蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用。這些蛋白質(zhì)主要涉及糖酵解、氧化磷酸化、氧自由基清除等重要生物學(xué)功能。心肌中HSP70的相互作用蛋白質(zhì)組分析進(jìn)一步證實(shí)了HSP70與其中α-烯醇化酶（ENOA）、3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）、乙醛脫氫酶（ALDH）-2具有相互作用，保護(hù)這些酶的活性而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。

LuoQ,XiaoXZ,etal,FreeRadicRes,2011，45（11-12）：1355-65各種HSPs通過(guò)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，保護(hù)糖代謝、能量代謝、抗氧化相關(guān)酶的活性而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。推論：HSP70與核仁素的相互作用及其心肌保護(hù)作用與機(jī)制研究核仁素（nucleolin,C23)在核仁中含量豐富，屬rRNA結(jié)合蛋白，能與含UCCCGA序列的rRNA結(jié)合，在核糖體的生成、細(xì)胞增殖、發(fā)