產(chǎn)透明質(zhì)酸酶菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化的開題報(bào)告

產(chǎn)透明質(zhì)酸酶菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化的開題報(bào)告一、研究背景和意義透明質(zhì)酸(hyaluronicacid，簡(jiǎn)稱HA)是一種泛在于自然界中的生物高分子聚糖，廣泛存在于動(dòng)物腔膜、結(jié)締組織、神經(jīng)組織等處，是一種重要的生物醫(yī)學(xué)材料。由于其在水中高度溶解、界面活性低、對(duì)生物體相容性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此在組織工程學(xué)、生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域等方面應(yīng)用廣泛。產(chǎn)業(yè)上用于制備透明質(zhì)酸溶液、凝膠和粉末等產(chǎn)品，具有廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景。而產(chǎn)HA的重要工具就是透明質(zhì)酸酶（hyaluronidase），極限酶制透明質(zhì)酸的適宜溫度是37℃，pH5.5，在極限條件下通常需要多步反應(yīng)過(guò)程，以獲得高效的產(chǎn)品產(chǎn)量。目前市場(chǎng)上商業(yè)化的透明質(zhì)酸酶多來(lái)自于動(dòng)物源，使用這些來(lái)源的透明質(zhì)酸酶容易遇到質(zhì)量穩(wěn)定性差、產(chǎn)量低、含有多種其他蛋白等問(wèn)題，因此迫切需要開發(fā)高效、穩(wěn)定、低成本的透明質(zhì)酸酶來(lái)源。微生物來(lái)源的透明質(zhì)酸酶因?yàn)榭芍貜?fù)性較好、產(chǎn)量大、生長(zhǎng)周期短等特點(diǎn)，成為了近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。因此本文將以產(chǎn)HA微生物酶為研究對(duì)象，找到一種高效、適應(yīng)性強(qiáng)的透明質(zhì)酸酶產(chǎn)生菌株和優(yōu)化酶產(chǎn)菌株的乳shake液態(tài)培養(yǎng)條件，提高透明質(zhì)酸酶的產(chǎn)量和純度，為透明質(zhì)酸的生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。二、研究?jī)?nèi)容及方法本文將從以下三個(gè)方面開展研究：1、篩選產(chǎn)透明質(zhì)酸酶的微生物菌株：采用實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法從樣品中篩選產(chǎn)HA的菌株，通過(guò)透明質(zhì)酸酶活性測(cè)定和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)驗(yàn)證，篩選出一種產(chǎn)量高、適應(yīng)性強(qiáng)的優(yōu)良菌株。2、調(diào)節(jié)和優(yōu)化菌株的液態(tài)發(fā)酵條件：根據(jù)菌株特性和發(fā)酵需求，采取對(duì)菌種、培養(yǎng)基、溫度、pH值、氣體氣體組成等多個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)單因素、響應(yīng)面等方法對(duì)液態(tài)培養(yǎng)條件進(jìn)行篩選，最終確定最佳的培養(yǎng)條件。3、透明質(zhì)酸酶酶提純及性質(zhì)鑒定：采用分離純化法和凝膠層析分析法對(duì)透明質(zhì)酸酶進(jìn)行提純和鑒定，并對(duì)酶的最適反應(yīng)溫度、pH值、底物特異性等性質(zhì)進(jìn)行測(cè)試。三、研究預(yù)期成果及意義預(yù)期成果：1、篩選出一種產(chǎn)量高、適應(yīng)性強(qiáng)的透明質(zhì)酸酶菌株。2、找到一種最優(yōu)的菌種和液態(tài)培養(yǎng)條件，能夠大大提高透明質(zhì)酸酶的產(chǎn)量和純度。3、對(duì)透明質(zhì)酸酶的性質(zhì)進(jìn)行深入研究，為更好地應(yīng)用透明質(zhì)酸酶提供參考和依據(jù)。意義：1、發(fā)掘適合產(chǎn)透明質(zhì)酸酶的高生產(chǎn)菌株和最佳培養(yǎng)條件，為透明質(zhì)酸生產(chǎn)提供了技術(shù)支持。2、在提高透明質(zhì)酸酶產(chǎn)量和純度的基礎(chǔ)上，降低了生產(chǎn)成本、改善了產(chǎn)業(yè)鏈的供應(yīng)能力和質(zhì)量。3、為透明質(zhì)酸制備、底物特異性和降高效提供了更好的理論參照。四、研究進(jìn)度計(jì)劃1、第一階段（2019年5月——2019年9月）：確定最佳篩選方法，獲得三個(gè)優(yōu)良的透明質(zhì)酸酶產(chǎn)菌株。2、第二階段（2019年10月——2020年3月）：確定最優(yōu)發(fā)酵液態(tài)培養(yǎng)條件和調(diào)節(jié)優(yōu)化菌株，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得出充分論證結(jié)果。3、第三階段（2020年4月——2020年8月）：對(duì)透明質(zhì)酸酶進(jìn)行提純