血液學(xué)：凝血因子的檢驗

FVII(a)血管損傷TFTF-VIIa-Ca++表面接觸FXIIFXIIaFXIFXIaHMWKFIXFIXaFVIIIaFVIIICa++PLCa++FXaFVaCa++PLFXFIIFIIaFVFgFbFXIIIaCa++FXIII外源凝血系統(tǒng)內(nèi)源凝血系統(tǒng)凝血機(jī)制圖PTAPTT第十一章血栓與止血檢驗的基本方法

第四節(jié)凝血因子的檢驗（P340-344）

一、凝血酶原時間（篩查試驗，P325）二、活化部分凝血活酶時間（篩查試驗）三、試管法凝血時間（篩查試驗）四、凝血酶時間（篩查試驗）五、血漿纖維蛋白原六、血漿凝血因子II、V、VII、X七、血漿凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ八、血漿組織因子九、凝血因子XIII十、凝血活化分子標(biāo)志物原理：

參考值：>正常對照10″或<5″有臨床意義不同激活劑、不同實驗室有別，均應(yīng)做正常對照PF3血漿

足量激活劑Ca++37℃

為內(nèi)源凝血系統(tǒng)的篩選試驗

是一個敏感且可靠的檢查內(nèi)源凝血系統(tǒng)的篩選試驗。當(dāng)血漿凝血因子低于正常水平的15%-30%時，即出現(xiàn)異常。二、活化部分凝血活酶時間測定--APTT臨床意義：

1、延長：內(nèi)源凝血系統(tǒng)因子缺乏、肝素、狼瘡抗凝物。(VIII：C<25%)。

2、縮短：血栓前狀態(tài)、DIC前期或早期等。

3、監(jiān)測肝素抗凝治療的首選指標(biāo)。

應(yīng)用肝素的第１～２天內(nèi)，應(yīng)每４～６小時監(jiān)測一次，以后酌情決定每天的監(jiān)測次數(shù)。治療的安全有效范圍是APTT檢測值為同時檢測的正常對照值的1.5~2.5倍。四、凝血酶時間測定（TT）原理：受檢血漿+“標(biāo)準(zhǔn)化”凝血酶液，測定出現(xiàn)纖維蛋白絲的時間。臨床意義：延長：

a、低（無）纖維蛋白原血癥

b、血中FDP增高（DIC）

c、抗凝物存在，如：肝素、類肝素

縮短：見于高纖維蛋白原血癥。血漿S-IIa37℃

五、血漿纖維蛋白原測定方法：功能法、演算法等臨床意義：

1、是凝血酶和纖溶酶的底物，在溶栓治療及抗凝治療時測定。

2、血栓前狀態(tài)預(yù)測，預(yù)防血栓形成。

3、DIC的診斷與治療。減低：見于DIC、原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎、肝硬化等。增高：見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病、大手術(shù)后、應(yīng)急性反應(yīng)、妊娠晚期、惡性腫瘤等。功能法又稱Clauss法(為NCCLS推薦方法）原理：

Fg

血漿

Fb（血漿凝固）凝固時間與Fg含量呈反比凝血酶肝素、FDP、D-D

使結(jié)果偏低酶促反應(yīng)：0級時，底物濃度與反應(yīng)速度成線性。演算法又稱PT-衍生法原理：

當(dāng)PT反應(yīng)完成時全部Fg

Fb

此時Fb產(chǎn)生的濁度與Fg含量成正比當(dāng)Fg在正常范圍時此法與Clauss法無顯著差異。黃疸、脂濁、溶血使結(jié)果偏高受檢血漿乏因子血漿

PT試劑患者正常六、血漿因子II、V、VII、X促凝活性檢測原理：臨床意義：增高見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。減低見于相應(yīng)的先天性因子II、V、VII、X缺乏癥或獲得性減低，如VK缺乏、肝病、口服抗凝藥、DIC、血中存在抗凝物質(zhì)等。肝損的評價指標(biāo)：減少依次為VII、II、X、V。制備不同稀釋度時間活度受檢血漿乏因子血漿APTT試劑患者正常七、血漿因子VIII、IX、XI、XII促凝活性檢測原理：臨床意義：增高主要見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。減低

FVIII見于血友病A、VWD、VIII抗體存在、DIC等。

FIX見于血友病B、肝病、VK缺乏、口服抗凝藥、DIC等

FXI見于血友病C、肝病、DIC等。

FXII見于先天性FXII缺乏癥、肝病、DIC和某些血栓性疾病。制備不同稀釋度時間活度八、血漿組織因子1、組織因子活性(TF:C)測定：發(fā)色底物法2、組織因子抗原(TF:Ag)測定：ELISA法臨床意義：病理性凝血酶生成，尤其是DIC，都是由于TF釋放增多引起。是一早期出現(xiàn)的敏感顯示凝血系統(tǒng)變化的指標(biāo)。凝血在體內(nèi)被活化的分子標(biāo)志物九、凝血因子XIII1、凝血因子XIII定性試驗原理：受檢血漿中加入鈣溶液，使FIB轉(zhuǎn)變?yōu)镕b凝塊，將此凝塊置入5mol/L尿素溶液中。如果受檢血漿缺乏因子XIII，則形成的可溶性Fb凝塊易溶于尿素溶液中。臨床上患者不明原因出血，而其他因子都正常時做的實驗2、乏因子血漿糾正試驗：檢測活性，操作繁瑣3、肽底物酶動力學(xué)法：檢測活性，臨床上很少開展4、火箭電泳法：檢測抗原含量十、凝血活化分子標(biāo)志物（一）血漿凝血酶原片段1+2（F1+2）

ELISA法，為凝血酶在體內(nèi)生成的標(biāo)志（二）血漿纖維蛋白肽A（FPA）

ELISA法，增高表明凝血酶活性增加（三）血漿凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物

ELISA法，增高表明血液處于高凝狀態(tài)以上檢測較繁瑣，當(dāng)結(jié)果出來時患者的凝血狀態(tài)可能已發(fā)生變化，故臨床很少推廣使用。

四、血友病和血管性血友病

（一）血友病

是一組遺傳性因子Ⅷ、IX基因缺陷、突變、缺失、插入等導(dǎo)致內(nèi)源凝血途徑功能障礙所引起的出血性疾病。包括：血友病A---缺Ⅷ（最常見）

血友病B---缺IX

A型和B型血友病為性連鎖（伴性）

隱性遺傳

臨床特點：

自發(fā)性或輕微外傷后出血難止，出血部位：

大關(guān)節(jié)腔內(nèi)、負(fù)重的肌肉群內(nèi)、內(nèi)臟、顱內(nèi)。皮膚瘀斑、粘膜出血也較常見。

創(chuàng)傷或手術(shù)出血更為嚴(yán)重。檢驗：1.篩選試驗：APTT延長，PT正常2．凝血因子活性檢測：VIII：C、IX：C、XI：C

重型<1%、中型2—5%、輕型6—25%、亞臨床型26—50%3．血小板計數(shù)、出血時間、血塊收縮正常4.攜帶者和產(chǎn)前診斷：基因分析、染色體（二）血管性血友病

為vWF基因的合成與表達(dá)缺陷而導(dǎo)致它的質(zhì)和量異常所引起。據(jù)遺傳方式、臨床表現(xiàn)、實驗室檢驗可分為三型：I型：vWF量合成減少，為常染色體顯性遺傳。II型（四個亞型）：vWF結(jié)構(gòu)、功能缺陷，為常染色體顯性遺傳。III型：vWF抗原和活性均低或缺，為常染色體隱性遺傳。臨床出血最嚴(yán)重。檢驗:Ⅷ:C、vWF:Ag多數(shù)

五、肝臟疾病的凝血障礙出血是肝臟疾病的常見癥狀，且出血的嚴(yán)重程度與肝功能呈正相關(guān)。出血的原因甚為復(fù)雜，但主要與以下幾個方面有關(guān)：1）凝血因子和抗凝蛋白的合成減少，大部分凝血因子和抗凝蛋白在肝合成。2）凝血因子和抗凝蛋白的消耗增多，肝病常并發(fā)原纖或DIC。3）循環(huán)抗凝物和FDP增多，類肝素、FDP具抗凝血作用。4）血小板減少及其功能障礙，損傷骨髓、脾亢、免疫復(fù)合物—壽命、功能。肝病出血診斷：．VII:C、II:C↓先于肝功能異常。．FIB、V:C↓反映肝病嚴(yán)重、肝硬化。．異常II↑診斷肝癌參考指標(biāo)之一。．VIII:C、VWF越高肝病越嚴(yán)重，

VIII:C↓提示并發(fā)DIC。．XIIIa:Ag、AT-III<35%或PLG<20%時

提示預(yù)后不良。．肝病時常呈多個因子的聯(lián)合變化，故需綜合分析。

六、依賴維生素K凝血因子缺乏癥

由于缺乏VK所引起II、VII、IX、X缺乏使皮膚、粘膜、內(nèi)臟的出血傾向