反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定厚樸溫中滴丸中4種成分

反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定厚樸溫中滴丸中4種成分

厚樸滴丸是在傳統(tǒng)的舊厚樸溫湯基礎(chǔ)上簡(jiǎn)化而成的。它是一種新型的中藥復(fù)方制劑，由厚樸、干姜、木香、甘草等材料現(xiàn)代提取、提取而成。具有凈化溫度和濕度的功效。用于治療感冒氣滯綜合征的腹脹、腹脹、不想吃的東西、舌苔白膩、腕痛等疾病。現(xiàn)代藥理研究表明,制劑中主要成分厚樸酚、和厚樸酚、6-姜酚、木香內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯具有抗菌抗炎、抗病毒、抗氧化、鎮(zhèn)痛、止瀉、利膽等多方面的藥理作用,也是該制劑的主要有效成分,本文參考相關(guān)文獻(xiàn)建立了同時(shí)對(duì)這5個(gè)有效成分含量進(jìn)行HPLC測(cè)定的方法,為該制劑質(zhì)量控制提供方法。1色譜柱及儀器Agilent1100高效液相色譜儀(配置:手動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、高壓二元梯度泵、恒溫柱溫箱、DAD檢測(cè)器,Agilent1100色譜工作站)、ZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱;超純水器(Mililpore);DL-360A超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司);十萬分之一電子天平(德國(guó)Sartorius)。對(duì)照品和厚樸酚、厚樸酚均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,6-姜酚、木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯由百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司提供,含量均達(dá)98.5%以上;厚樸溫中止痛滴丸(批號(hào)20090322,20090324,20090326)自制(每丸40mg);甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1溶液的制備2.1.1對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取對(duì)照品木香內(nèi)酯15.82mg、去氫木香內(nèi)酯20.56mg、6-姜酚17.52mg、和厚樸酚11.53mg、厚樸酚12.05mg,分別置10mL量瓶中,加甲醇溶解并定容,搖勻,即得濃度分別為1.582,2.056,1.752,1.153,1.205mg·mL-1的單一成分溶液;精密吸取上述5個(gè)單一成分溶液各2mL,置同一10mL量瓶中,加甲醇定容,搖勻,即得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL置10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得混合對(duì)照品溶液(木香內(nèi)酯31.64μg·mL-1、去氫木香內(nèi)酯41.12μg·mL-1、6-姜酚35.04μg·mL-1、和厚樸酚23.06μg·mL-1、厚樸酚24.10μg·mL-1)。2.1.2供試品溶液制備取本品適量,研碎,取粉末(過20目篩)約80mg,精密稱定,置20mL量瓶中,加入甲醇約15mL,超聲(250W,25kHz)處理30min,放冷,用甲醇補(bǔ)足至刻度,搖勻,用0.22μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.1.3陰性樣品溶液按處方比例分別配制缺木香、干姜、厚樸的陰性樣品,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備成陰性樣品溶液。2.2理論板數(shù)測(cè)定采用ZORBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱,柱溫30℃;流動(dòng)相為甲醇-水(60∶40),流速1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm;進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)以木香內(nèi)酯峰計(jì)不得小于5000,待測(cè)組分與其他峰的分離度應(yīng)良好。分別吸取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μL,按上述色譜條件進(jìn)樣,見圖1。從圖1結(jié)果可以看出,各被測(cè)組分與其他成分均達(dá)到基線分離,分離度大于1.5,木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、6-姜酚、和厚樸酚、厚樸酚保留時(shí)間分別約為18.83,22.54,28.66,31.60,54.74min,陰性對(duì)照均無干擾。2.3線性關(guān)系的考察精密吸取混合對(duì)照品溶液2,6,10,12,16,20μL,注入液相色譜儀,以峰面積積分值為縱坐標(biāo),對(duì)照品量(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸,得木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、6-姜酚、和厚樸酚、厚樸酚回歸方程分別為:Y=1.806×105X+957r=0.9998Y=2.628×106X+6.761×103r=0.9997Y=2.335×106X+8.372×103r=0.9998結(jié)果表明,木香內(nèi)酯在0.063～0.633μg、去氫木香內(nèi)酯在0.082～0.822μg、6-姜酚在0.070～0.701μg、和厚樸酚在0.046～0.461μg、厚樸酚在0.048～0.482μg范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。2.4不同酚峰面積的rsdn精密吸取混合對(duì)照品溶液10μL,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、6-姜酚、和厚樸酚、厚樸酚峰面積的RSD(n=6)分別為0.97%,0.85%,1.1%,1.3%,1.6%,結(jié)果表明精密度良好。2.5供試品溶液穩(wěn)定性精密吸取20090322號(hào)樣品的供試品溶液10μL,每間隔2h進(jìn)樣1次,共進(jìn)樣6次,結(jié)果表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定,木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、6-姜酚、和厚樸酚、厚樸酚峰面積的RSD(n=6)分別為1.4%,1.6%,1.6%,1.4%,1.5%。2.6樹莓原汁、去氫公所、去氫南果木香兩味酚、植物酚含量的差異取20090322號(hào)樣品6份,按“2.1.2”項(xiàng)下方法處理,進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、6-姜酚、和厚樸酚、厚樸酚含量平均值(n=6)分別為0.660%,0.887%,0.740%,0.514%,0.538%;RSD分別為1.7%,2.1%,2.1%,1.9%,2.1%。2.7加樣回收試驗(yàn)取20090322號(hào)樣品粉末6份,每份約40mg,精密稱定,分別置20mL量瓶中,加入混合對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL及甲醇約15mL,按“2.1.2”項(xiàng)下方法操作,進(jìn)樣測(cè)定各成分的量,并計(jì)算回收率。結(jié)果木香內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、6-姜酚、和厚樸酚、厚樸酚平均回收率(n=6)分別為97.62%,97.81%,97.16%,97.32%,96.55%;RSD分別為0.59%,0.96%,0.86%,0.63%,0.59%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,待測(cè)組分的平均加樣回收率均在95%～105%之間,加樣回收率良好。2.8測(cè)定含量測(cè)定每批樣品取3份,每份樣品均按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液和混合對(duì)照品溶液各10μL,注入液相色譜儀,以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表1。3檢測(cè)波長(zhǎng)的確定3.1供試品溶液的制備根據(jù)待測(cè)組分的極性,選擇甲醇作為提取溶劑,參考相關(guān)文獻(xiàn),采用超聲法提取,通過預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)超聲20min以上可將待側(cè)成分提取完全,故本實(shí)驗(yàn)將提取時(shí)間定為30min。3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及5個(gè)待測(cè)成分紫外吸收情況,選擇在250nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。在此波長(zhǎng)下樣品中5個(gè)待測(cè)組分吸收強(qiáng)度相差較小,陰性干擾小,符合方法學(xué)的要求。3.3流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)過程中先后采用了甲醇-水(65∶35)、乙腈-水(50∶50)等度