白薇黑斑病室內(nèi)藥劑敏感性測定研究

白薇（CynanchumatratumBunge）為蘿藦科（Asclepiadaceae）、鵝絨藤屬（CunanchumLinn.）多年生草本藥用植物，廣泛分布于日本、韓國和中國等多個(gè)亞洲國家。其中，我國大部分地區(qū)均有分布。以其根及根莖入藥，清熱散腫，生肌止痛，可用于治腎炎、水腫、支氣管炎及風(fēng)濕性腰腿疼等癥，具有較高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近幾年來，隨著白薇市場需求的大幅度增加，野生資源日漸枯竭，東北遼吉地區(qū)開始進(jìn)行人工歸圃栽培，種植面積和年限逐年增加，由于白薇為新型種植藥材，所以，白薇的一些病害鑒定及防治還未見系統(tǒng)報(bào)道。2020—2021年對遼吉地區(qū)的白薇人工種植基地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，白薇黑斑病發(fā)生程度較為嚴(yán)重，表現(xiàn)為葉片、莖稈及果實(shí)產(chǎn)生褐色至黑色病斑，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致整株枯死，對白薇的產(chǎn)量和品質(zhì)產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，各白薇種植基地的工作人員對防治白薇黑斑病的藥劑選擇還沒有明確的認(rèn)知，也沒有系統(tǒng)化的防治措施。本項(xiàng)目將對8種藥劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)篩選試驗(yàn)，得出防治白薇黑斑病效果較佳的藥劑，為白薇黑斑病的化學(xué)防治提供一定的理論及基礎(chǔ)，并為后續(xù)的田間藥劑篩選試驗(yàn)提供翔實(shí)的參考結(jié)果，以確保白薇人工種植的經(jīng)濟(jì)效益及社會(huì)效益。1材料與方法1.1試驗(yàn)材料1.1.1供試菌源白薇黑斑病病原菌（由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院B樓病理實(shí)驗(yàn)室分離并保存在4℃冰箱中）。1.1.2供試試劑參加試驗(yàn)試劑詳見表1-1。表1-1參試殺菌劑及生產(chǎn)廠商1.2試驗(yàn)方法1.2.1含藥培養(yǎng)基的制備根據(jù)每種供試殺菌劑的有效成分，首先需要計(jì)算好配制所需濃度殺菌劑的藥劑用量，在精度為0.001g的電子天平上稱取計(jì)算所需的藥量并溶于無菌水中，充分溶解后用滅菌的移液器移入滅菌培養(yǎng)皿，然后，將滅菌后冷卻至45~50℃左右的PDA培養(yǎng)基倒入含藥培養(yǎng)皿中，輕輕振蕩，使藥液培養(yǎng)基充分混合。最后，采用平板生長速率法測定殺菌劑對病菌的抑制效果，預(yù)實(shí)驗(yàn)中，8種殺菌劑均設(shè)置一個(gè)濃度，在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上每種殺菌劑設(shè)計(jì)5個(gè)處理，分別為：70%甲基托布津WP稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液；10%苯醚甲環(huán)唑ME稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液；43%戊唑醇SC稀釋成1500、2000、2500、3000、3500倍液；75%百菌清WP稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液；75%多菌靈WP稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液；50%福美雙WP稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液；70%代森錳鋅WP稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液；12.5%烯唑醇WP稀釋成500、1000、1500、2000、2500倍液，此外以無菌水作為空白對照。1.2.2菌餅接種試驗(yàn)在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行，將供試藥劑用紫外燈照射2~3h除菌后，在無菌條件下，挑選無污染的經(jīng)過PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)活化5d后的供試菌種用直徑為5mm、已經(jīng)滅菌的圓形打孔器打取菌餅，用接種針接種到不同濃度的含藥培養(yǎng)基中央，最后，再將接種好的培養(yǎng)皿倒放入25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2結(jié)果與分析2.1供試藥劑對白薇黑斑病病原菌的相對抑制率由表2-1可知：70%甲基托布津、10%苯醚甲環(huán)唑、75%百菌清、75%多菌靈、50%福美雙、70%代森錳鋅、12.5%烯唑醇、43%戊唑醇在稀釋倍數(shù)為500~2500倍液時(shí)，對白薇黑斑病菌的相對抑制率分別為5.65%~48.39%、60.81%~74.52%、9.83%~35.65%、65.00%~70.16%、34.35%~65.32%、23.23%~45.97%、51.94%~69.03%、44.35%~65.06%。通過與對照組相比較，8種不同殺菌劑以及不同濃度的同一種殺菌劑對白薇黑斑病菌的生長都有著不同程度的抑制作用，其中，對菌落生長的抑制作用、抑菌效果最好的為200mg/L的苯醚甲環(huán)唑，其相對抑制率為74.52%，其次為1400mg/L的多菌靈和250mg/L的烯唑醇，這兩種相對抑制率分別為70.16%、69.03%；相比之下，濃度為280mg/L的甲基托布津、300mg/L的百菌清抑制率就較小，其抑制率分別為5.65%、9.83%.雖然不同藥劑的不同濃度以及同一種藥劑的不同濃度的抑制率差別各不相同，但是，同一種藥劑的不同濃度的抑制率都是隨著藥劑濃度的增加而增大。表2-18種藥劑不同濃度對白薇黑斑病病原菌的抑制率2.2供試藥劑對白薇黑斑病病原菌的EC50值比較由表2-2可知：70%甲基托布津、10%苯醚甲環(huán)唑、75%百菌清、75%多菌靈、50%福美雙、70%代森錳鋅、12.5%烯唑醇、43%戊唑醇對白薇黑斑病菌的EC50值分別為1368、14、2451、4、448、1899、39mg/L和138mg/L。測定結(jié)果表明，白薇黑斑病菌對各種藥劑均表現(xiàn)敏感，其中白薇黑斑病菌對藥劑多菌靈最為敏感，其EC50值為4mg/L；其次為苯醚甲環(huán)唑，其EC50值為14mg/L。白薇黑斑病菌對藥劑百菌清最不敏感，其EC50值為2451mg/L。表2-28種藥劑對白薇黑斑病菌的毒力回歸方程和EC50值2.3供試藥劑對白薇黑斑病病原菌菌絲生長影響的差異顯著性分析由表2-3可知：在試驗(yàn)所用的8種殺菌劑中，藥劑濃度為200mg/L的苯醚甲環(huán)唑?qū)Π邹焙诎卟【囊种坡首詈茫湟种坡蕿?4.52%。百菌清對白薇黑斑病菌的抑制率最低。苯醚甲環(huán)唑與戊唑醇對白薇黑斑病病原菌抑制效果差異不顯著，多菌靈與烯唑醇對白薇黑斑病病原菌抑制效果差異性顯著，其余各藥劑對白薇黑斑病病原菌抑制效果之間差異性極顯著。表2-3不同藥劑對白薇黑斑病病原菌菌絲生長影響的差異顯著性分析3結(jié)論與討論本試驗(yàn)研究了8種不同殺菌劑的不同濃度對白薇黑斑病菌相對抑制率的比較以及算出8種殺菌劑對白薇黑斑病菌的EC50值。從不同藥劑的不同濃度對該種病菌的抑制作用來看，其結(jié)果表明：70%甲基托布津、10%苯醚甲環(huán)唑、75%百菌清、75%多菌靈、50%福美雙、70%代森錳鋅、12.5%烯唑醇、43%戊唑醇在稀釋倍數(shù)為500~4500倍液時(shí)，對白薇黑斑病菌的相對抑制率分別為5.65%~48.39%、60.81%~74.52%、9.83%~35.65%、65.00%~70.16%、34.35%~65.32%、23.23%~45.97%、51.94%~69.03%、44.35%~65.06%。其中，濃度為200mg/L的苯醚甲環(huán)唑?qū)Π邹焙诎卟【囊种坡首罡?，其抑制率?4.52%，而抑制率最小濃度為280mg/L的甲基托布津，其抑制率為5.65%，由此可見濃度為200mg/L苯醚甲環(huán)唑?qū)Π邹焙诎卟【囊种坡适菨舛葹?80mg/L的百菌清13.19倍。從8種殺菌劑對白薇黑斑病菌的致死中濃度來看，其結(jié)果表明：白薇黑斑病菌對各種藥劑均表現(xiàn)敏感，8種殺菌劑對白薇黑斑病菌都有一定的抑制作用，并且不同藥劑的不同濃度對該種病菌的抑制作用也有一定差異。70%甲基托布津、10%苯醚甲環(huán)唑、75%百菌清、75%多菌靈、50%福美雙、70%代森錳鋅、12.5%烯唑醇、43%戊唑醇對白薇黑斑病菌的EC50值分別為1368、14、2451、4、448、1899、39mg/L和138mg/L。其中白薇黑斑病菌對藥劑多菌靈最為敏感，其EC50值為4mg/L，而白薇黑斑病菌最不敏感的藥劑是代森錳鋅，其EC50值為2451mg/L，是戊唑醇藥劑濃度的612.7