動(dòng)物檢疫專業(yè)方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證-檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)管理信息系統(tǒng)課件

動(dòng)物檢疫專業(yè)方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證

馬貴平2013年6月內(nèi)容動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序內(nèi)容動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案

1選定試行驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求3驗(yàn)證時(shí)間4備選標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證

內(nèi)容動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序

1適用范圍2術(shù)語(yǔ)和定義3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)4標(biāo)委會(huì)的驗(yàn)證或/和審定活動(dòng)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案1選定試行驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)云南檢驗(yàn)檢疫局負(fù)責(zé)起草制定的“猴T淋巴細(xì)胞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范”（2011B018）中國(guó)檢科院負(fù)責(zé)起草制定的“牛及其產(chǎn)品中特定轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測(cè)方法”（2012B398）。前者涉及的技術(shù)方法有ELISA和PCR，后者涉及的技術(shù)方法是PCR。

動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案1選定試行驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)備選了2個(gè)正在起草制定的標(biāo)準(zhǔn)：天津檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的“口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢疫技術(shù)規(guī)范”（2012B031）福建檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的“牛病毒性腹瀉/粘膜病檢疫規(guī)范”（2011B464r）。備選驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)按照被選定驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行驗(yàn)證準(zhǔn)備。

2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求標(biāo)準(zhǔn)起草人按照“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序”對(duì)起草制定的標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證方法敏感性和特異性的陽(yáng)性樣品、陰性樣品量根據(jù)被驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)能達(dá)到的參數(shù)而定。

注：假定方法標(biāo)準(zhǔn)DSe為98%、DSp為95%，置信區(qū)間為95%，DSe和DSp的錯(cuò)估率為5%。陽(yáng)性樣品不應(yīng)少于30份，陰性樣品不應(yīng)少于73份。標(biāo)準(zhǔn)起草人完成驗(yàn)證試驗(yàn)并取得滿意的結(jié)果后，向動(dòng)檢標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委秘書(shū)處提交標(biāo)準(zhǔn)送審稿及標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證文字材料。特定置信區(qū)間下不同的DSe和DSp要求的已知樣品的理論數(shù)量來(lái)自O(shè)IE《ManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerrestrialAnimals2012》：CHAPTER1.1.5PRINCIPLESANDMETHODSOFVALIDATIONOFDIAGNOSTICASSAYSFORINFECTIOUSDISEASES2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求動(dòng)檢標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委秘書(shū)處收到標(biāo)準(zhǔn)送審稿及其驗(yàn)證材料后，指派2名專家對(duì)有關(guān)材料進(jìn)行審查。審查合格的，秘書(shū)處指定3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行驗(yàn)證。標(biāo)準(zhǔn)起草人向獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室提供驗(yàn)證所需的樣品，獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室也可以用自己擁有的經(jīng)確認(rèn)的已知樣品。審查不合格的，要求標(biāo)準(zhǔn)起草人繼續(xù)完善相關(guān)材料。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室按照“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序”對(duì)指定的標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行驗(yàn)證。并將驗(yàn)證結(jié)果及相關(guān)驗(yàn)證記錄提交給秘書(shū)處。2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求秘書(shū)處指定至少3名專家與標(biāo)準(zhǔn)起草人對(duì)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行分析、判定。驗(yàn)證結(jié)果符合“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序”相關(guān)要求及被驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)適用目的的，推薦進(jìn)行會(huì)議審定。驗(yàn)證結(jié)果不符合“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序”相關(guān)要求及被驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)不適用目的的，不推薦進(jìn)行會(huì)議審定，要求標(biāo)準(zhǔn)起草人繼續(xù)完善后再驗(yàn)證。2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求負(fù)責(zé)“猴T淋巴細(xì)胞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范”驗(yàn)證工作的三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室：

廣西檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室廣東檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室上海檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)“牛及其產(chǎn)品中特定轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測(cè)方法”驗(yàn)證工作的三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室：

珠海檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室山東檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室福建檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求本次標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作總負(fù)責(zé)人為孫穎杰責(zé)任人為馬貴平驗(yàn)證工作組專家為鄭騰、薄清如、林志雄、岳志芹。責(zé)任人和專家負(fù)責(zé)本次標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證試驗(yàn)材料的審核。3驗(yàn)證時(shí)間起草制定標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室須于2013年8月底完成驗(yàn)證工作。指定的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室須于2013年9月底完成驗(yàn)證工作。4備選標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證指定北京檢驗(yàn)檢疫局、中國(guó)檢科院、遼寧檢驗(yàn)檢疫局、深圳檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證天津檢驗(yàn)檢疫局起草制定的“口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢疫技術(shù)規(guī)范”（2012B031）、福建檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的“牛病毒性腹瀉/粘膜病檢疫規(guī)范”（2011B464r）。標(biāo)準(zhǔn)制定實(shí)驗(yàn)室和獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的驗(yàn)證工作要求與本方案第2條的要求相同。內(nèi)容動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序

1適用范圍2術(shù)語(yǔ)和定義3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)4標(biāo)委會(huì)的驗(yàn)證或/和審定活動(dòng)動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序1適用范圍本程序規(guī)定了動(dòng)物檢疫方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂過(guò)程中的驗(yàn)證要求及程序。本程序適用于出入境動(dòng)物檢疫方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂過(guò)程中的驗(yàn)證活動(dòng)。2術(shù)語(yǔ)和定義

方法標(biāo)準(zhǔn)(standard)：為實(shí)現(xiàn)特定檢測(cè)目的，對(duì)所采取的途徑、步驟和手段的規(guī)定要求所做的統(tǒng)一認(rèn)定。它以科學(xué)、技術(shù)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的綜合成果為基礎(chǔ)，經(jīng)有關(guān)方面協(xié)商一致，由主管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，以特定形式發(fā)布，作為共同遵守的準(zhǔn)則和依據(jù)。驗(yàn)證（Verification）：通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定。確認(rèn)(Validation)：通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。2術(shù)語(yǔ)和定義

樣品（Sample）：取自某一整體的一個(gè)或多個(gè)部分，旨在提供該整體的相關(guān)信息，通常作為判斷該整體的基礎(chǔ)。臨界值（Cut-offvalue）：區(qū)分陰性和陽(yáng)性結(jié)果的試驗(yàn)數(shù)值，是連續(xù)的檢測(cè)結(jié)果中間的一個(gè)值。重復(fù)性（Repeatability）：是指在相同的檢測(cè)條件下，對(duì)同一樣品的同一目標(biāo)分析值進(jìn)行連續(xù)多次測(cè)量，所得結(jié)果之間的一致性。敏感性（Sensitivity）：指檢出的陽(yáng)性樣本占被檢陽(yáng)性樣品總數(shù)的百分比。也就是指診斷/檢測(cè)疾病時(shí)不漏診/不漏檢（假陰性）的機(jī)會(huì)有多大（小）。2術(shù)語(yǔ)和定義

特異性（Specificity）：指檢出的陰性樣本占被檢陰性樣品總數(shù)的百分比。也就是指診斷/檢測(cè)疾病時(shí)不誤診（假陽(yáng)性）的機(jī)會(huì)有多大（?。?。線性范圍（Linearrange）：檢測(cè)結(jié)果或檢測(cè)結(jié)果的轉(zhuǎn)換值和目標(biāo)檢測(cè)物的濃度呈線性關(guān)系的數(shù)值范圍。在線性范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好,結(jié)論可信度高。再現(xiàn)性（Reproducibility）：就是當(dāng)一個(gè)方法被不同實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用于同一樣品的不同重復(fù)的檢測(cè)時(shí)，能夠給出相同結(jié)果的能力。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)驗(yàn)證時(shí)應(yīng)考慮所有影響方法標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)結(jié)果的因素。如果所制修訂的方法標(biāo)準(zhǔn)等同采用了知名的技術(shù)組織或刊物認(rèn)可或發(fā)布的方法，或者是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法，在被證實(shí)適用于規(guī)定的檢測(cè)/診斷目的之前，都應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

如果所制修訂的方法標(biāo)準(zhǔn)采用的是非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)方法，在被證實(shí)適用于預(yù)期的檢測(cè)/診斷目的之前，應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。

3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)應(yīng)記錄驗(yàn)證活動(dòng)所用的方法及獲得的結(jié)果。選擇樣品時(shí)，應(yīng)注意的因素：質(zhì)量和數(shù)量。選擇試劑時(shí)，應(yīng)注意的因素：標(biāo)準(zhǔn)化，保質(zhì)方法標(biāo)準(zhǔn)的敏感性的驗(yàn)證：篩查方法要求敏感性必須高。

3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)方法標(biāo)準(zhǔn)特異性的驗(yàn)證：1如果是用于確診的，方法標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)具有足夠的特異性，以將檢測(cè)中產(chǎn)生的交叉反應(yīng)降到最低。

2樣品應(yīng)包括含有目標(biāo)分析物的樣品和含有目標(biāo)分析物的相似物的樣品。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)重復(fù)性的驗(yàn)證重復(fù)性所選擇的樣品應(yīng)該是在方法的線性范圍內(nèi)具有代表性的樣品。所用樣品數(shù)量與前述敏感性和特異性驗(yàn)證試驗(yàn)所用數(shù)量相同。設(shè)定相同的程序、相同的操作人員、在相同的條件下使用相同的儀器、相同的地點(diǎn)在3個(gè)不同的日期進(jìn)行，以保證所有的檢測(cè)是獨(dú)立的。重復(fù)性的變異不能超過(guò)30%。如果超過(guò)30%，就需要進(jìn)行更多的初步研究，以證明該方法是足夠穩(wěn)定的。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)線性范圍臨界值（cut-off值）方法標(biāo)準(zhǔn)間的比較和協(xié)調(diào)方法標(biāo)準(zhǔn)間比較是為了證明新方法是現(xiàn)有技術(shù)的提高；方法標(biāo)準(zhǔn)間比較包括對(duì)方法的工作特性（如敏感性和特異性）或?qū)Ψ椒ǖ牟僮魈匦裕ㄈ绯杀尽⑺璀h(huán)境、時(shí)間周期、檢測(cè)量等）進(jìn)行比較。

Robustness、RuggednessRobustnessmeasureofatest'scapacitytoremainunaffectedbysmallchangesorvariationintroducedintestconditionstomimicanticipatedroutinelaboratoryoperation,partofoptimizationstudiesandreflectedinrepeatabilityassessments(e.g.incubationtimes,reactiontemperatures,bufferpH/ionicstrength,reagentdilutions,sampleconditionand/orpreparation,etc.).測(cè)試一種試驗(yàn)?zāi)軌虮３植皇苄〉淖兓蛟谠囼?yàn)條件下模仿預(yù)期的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室操作產(chǎn)生的變化、優(yōu)化研究部分內(nèi)容產(chǎn)生的變化、重復(fù)性評(píng)估（如孵育時(shí)間，反應(yīng)溫度，緩沖液pH/離子強(qiáng)度，試劑稀釋，樣本條件和/或制劑等反映的影響）中產(chǎn)生的變化的影響的能力。RuggednessAmeasureofanassay’scapacitytoremainunaffectedbysubstantialchangesorsubstitutionsintestconditionsanticipatedinmulti-laboratoryutilization,partoffitnessstudiesandreproducibilityassessments(shippingconditions,technologytransfer,reagentsbatches,equipment,testingplatformand/orenvironments).一種試驗(yàn)?zāi)軌蛟诙鄠€(gè)實(shí)驗(yàn)室間使用、部分適應(yīng)性研究、再現(xiàn)性評(píng)估（運(yùn)輸條件，技術(shù)轉(zhuǎn)移，試劑批次，設(shè)備，測(cè)試平臺(tái)和/或環(huán)境）等預(yù)期的試驗(yàn)條件下維持其不受較大變化或替代影響的能力。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)再現(xiàn)性的驗(yàn)證對(duì)再現(xiàn)性的評(píng)估最少需在標(biāo)委會(huì)的三個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或3名實(shí)驗(yàn)員）進(jìn)行，應(yīng)對(duì)相同的樣品組使用相同的方法進(jìn)行檢測(cè)。理想狀態(tài)下，這些樣品應(yīng)該是來(lái)自于目標(biāo)動(dòng)物群的獨(dú)立樣品，代表群體中的目標(biāo)檢測(cè)物的活性范圍。如果這樣的樣品不可獲得，那么對(duì)已知陽(yáng)性樣品進(jìn)行系列稀釋以達(dá)到需要的活性范圍也是可以接受的。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)再現(xiàn)性的驗(yàn)證驗(yàn)證再現(xiàn)性所用的樣品，應(yīng)逐個(gè)進(jìn)行分裝、編碼、分發(fā)、運(yùn)輸?shù)絽⒓訉?shí)驗(yàn)室或分發(fā)給實(shí)驗(yàn)員，在相同的條件下儲(chǔ)存。對(duì)參加實(shí)驗(yàn)室（或?qū)嶒?yàn)員）的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、評(píng)估。這些數(shù)據(jù)包括：實(shí)驗(yàn)室（或?qū)嶒?yàn)員）間平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、每個(gè)樣品和對(duì)照的變化范圍。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)再現(xiàn)性的驗(yàn)證進(jìn)行再現(xiàn)性評(píng)估時(shí)，建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或每個(gè)實(shí)驗(yàn)員）將每個(gè)樣品做兩個(gè)或三個(gè)重復(fù)，以進(jìn)一步評(píng)估方法在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的重復(fù)性。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)再現(xiàn)性的驗(yàn)證將兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或?qū)嶒?yàn)員）的平均值進(jìn)行比較，如果

=重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差=再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差認(rèn)為兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的平均值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有顯著差異。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng)方法的應(yīng)用只有那些表現(xiàn)出能夠適應(yīng)檢測(cè)目的的方法才可以被應(yīng)用到實(shí)際檢測(cè)工作中。在應(yīng)用過(guò)程中得到行業(yè)、國(guó)家、地區(qū)或國(guó)際認(rèn)可的方法才能夠上升為標(biāo)準(zhǔn)。方法有效性的控制內(nèi)部質(zhì)量控制、外部質(zhì)量控制方法/標(biāo)準(zhǔn)的文件化

提交驗(yàn)證材料

驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)束后，須整理好相應(yīng)的試驗(yàn)記錄、試