動物檢疫專業(yè)方法標(biāo)準(zhǔn)驗證-檢驗檢疫標(biāo)準(zhǔn)管理信息系統(tǒng)課件

動物檢疫專業(yè)方法標(biāo)準(zhǔn)驗證

馬貴平2013年6月內(nèi)容動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗證方案動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序內(nèi)容動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗證方案

1選定試行驗證的標(biāo)準(zhǔn)2標(biāo)準(zhǔn)驗證工作要求3驗證時間4備選標(biāo)準(zhǔn)的驗證

內(nèi)容動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序

1適用范圍2術(shù)語和定義3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動4標(biāo)委會的驗證或/和審定活動動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗證方案1選定試行驗證的標(biāo)準(zhǔn)云南檢驗檢疫局負(fù)責(zé)起草制定的“猴T淋巴細(xì)胞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范”（2011B018）中國檢科院負(fù)責(zé)起草制定的“牛及其產(chǎn)品中特定轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測方法”（2012B398）。前者涉及的技術(shù)方法有ELISA和PCR，后者涉及的技術(shù)方法是PCR。

動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗證方案1選定試行驗證的標(biāo)準(zhǔn)備選了2個正在起草制定的標(biāo)準(zhǔn)：天津檢驗檢疫局承擔(dān)的“口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢疫技術(shù)規(guī)范”（2012B031）福建檢驗檢疫局承擔(dān)的“牛病毒性腹瀉/粘膜病檢疫規(guī)范”（2011B464r）。備選驗證標(biāo)準(zhǔn)按照被選定驗證標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行驗證準(zhǔn)備。

2標(biāo)準(zhǔn)驗證工作要求標(biāo)準(zhǔn)起草人按照“動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序”對起草制定的標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行驗證。驗證方法敏感性和特異性的陽性樣品、陰性樣品量根據(jù)被驗證標(biāo)準(zhǔn)能達(dá)到的參數(shù)而定。

注：假定方法標(biāo)準(zhǔn)DSe為98%、DSp為95%，置信區(qū)間為95%，DSe和DSp的錯估率為5%。陽性樣品不應(yīng)少于30份，陰性樣品不應(yīng)少于73份。標(biāo)準(zhǔn)起草人完成驗證試驗并取得滿意的結(jié)果后，向動檢標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委秘書處提交標(biāo)準(zhǔn)送審稿及標(biāo)準(zhǔn)驗證文字材料。特定置信區(qū)間下不同的DSe和DSp要求的已知樣品的理論數(shù)量來自O(shè)IE《ManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerrestrialAnimals2012》：CHAPTER1.1.5PRINCIPLESANDMETHODSOFVALIDATIONOFDIAGNOSTICASSAYSFORINFECTIOUSDISEASES2標(biāo)準(zhǔn)驗證工作要求動檢標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委秘書處收到標(biāo)準(zhǔn)送審稿及其驗證材料后，指派2名專家對有關(guān)材料進(jìn)行審查。審查合格的，秘書處指定3個獨立實驗室進(jìn)行驗證。標(biāo)準(zhǔn)起草人向獨立實驗室提供驗證所需的樣品，獨立實驗室也可以用自己擁有的經(jīng)確認(rèn)的已知樣品。審查不合格的，要求標(biāo)準(zhǔn)起草人繼續(xù)完善相關(guān)材料。獨立實驗室按照“動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序”對指定的標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行驗證。并將驗證結(jié)果及相關(guān)驗證記錄提交給秘書處。2標(biāo)準(zhǔn)驗證工作要求秘書處指定至少3名專家與標(biāo)準(zhǔn)起草人對獨立實驗室的驗證結(jié)果進(jìn)行分析、判定。驗證結(jié)果符合“動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序”相關(guān)要求及被驗證標(biāo)準(zhǔn)適用目的的，推薦進(jìn)行會議審定。驗證結(jié)果不符合“動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序”相關(guān)要求及被驗證標(biāo)準(zhǔn)不適用目的的，不推薦進(jìn)行會議審定，要求標(biāo)準(zhǔn)起草人繼續(xù)完善后再驗證。2標(biāo)準(zhǔn)驗證工作要求負(fù)責(zé)“猴T淋巴細(xì)胞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范”驗證工作的三個獨立實驗室：

廣西檢驗檢疫局動檢實驗室廣東檢驗檢疫局動檢實驗室上海檢驗檢疫局動檢實驗室負(fù)責(zé)“牛及其產(chǎn)品中特定轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測方法”驗證工作的三個獨立實驗室：

珠海檢驗檢疫局動檢實驗室山東檢驗檢疫局動檢實驗室福建檢驗檢疫局動檢實驗室2標(biāo)準(zhǔn)驗證工作要求本次標(biāo)準(zhǔn)驗證工作總負(fù)責(zé)人為孫穎杰責(zé)任人為馬貴平驗證工作組專家為鄭騰、薄清如、林志雄、岳志芹。責(zé)任人和專家負(fù)責(zé)本次標(biāo)準(zhǔn)驗證試驗材料的審核。3驗證時間起草制定標(biāo)準(zhǔn)的實驗室須于2013年8月底完成驗證工作。指定的獨立實驗室須于2013年9月底完成驗證工作。4備選標(biāo)準(zhǔn)的驗證指定北京檢驗檢疫局、中國檢科院、遼寧檢驗檢疫局、深圳檢驗檢疫局動檢實驗室驗證天津檢驗檢疫局起草制定的“口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢疫技術(shù)規(guī)范”（2012B031）、福建檢驗檢疫局承擔(dān)的“牛病毒性腹瀉/粘膜病檢疫規(guī)范”（2011B464r）。標(biāo)準(zhǔn)制定實驗室和獨立實驗室進(jìn)行的驗證工作要求與本方案第2條的要求相同。內(nèi)容動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序

1適用范圍2術(shù)語和定義3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動4標(biāo)委會的驗證或/和審定活動動物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗證程序1適用范圍本程序規(guī)定了動物檢疫方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂過程中的驗證要求及程序。本程序適用于出入境動物檢疫方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂過程中的驗證活動。2術(shù)語和定義

方法標(biāo)準(zhǔn)(standard)：為實現(xiàn)特定檢測目的，對所采取的途徑、步驟和手段的規(guī)定要求所做的統(tǒng)一認(rèn)定。它以科學(xué)、技術(shù)和實踐經(jīng)驗的綜合成果為基礎(chǔ)，經(jīng)有關(guān)方面協(xié)商一致，由主管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，以特定形式發(fā)布，作為共同遵守的準(zhǔn)則和依據(jù)。驗證（Verification）：通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定。確認(rèn)(Validation)：通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。2術(shù)語和定義

樣品（Sample）：取自某一整體的一個或多個部分，旨在提供該整體的相關(guān)信息，通常作為判斷該整體的基礎(chǔ)。臨界值（Cut-offvalue）：區(qū)分陰性和陽性結(jié)果的試驗數(shù)值，是連續(xù)的檢測結(jié)果中間的一個值。重復(fù)性（Repeatability）：是指在相同的檢測條件下，對同一樣品的同一目標(biāo)分析值進(jìn)行連續(xù)多次測量，所得結(jié)果之間的一致性。敏感性（Sensitivity）：指檢出的陽性樣本占被檢陽性樣品總數(shù)的百分比。也就是指診斷/檢測疾病時不漏診/不漏檢（假陰性）的機(jī)會有多大（?。?。2術(shù)語和定義

特異性（Specificity）：指檢出的陰性樣本占被檢陰性樣品總數(shù)的百分比。也就是指診斷/檢測疾病時不誤診（假陽性）的機(jī)會有多大（?。?。線性范圍（Linearrange）：檢測結(jié)果或檢測結(jié)果的轉(zhuǎn)換值和目標(biāo)檢測物的濃度呈線性關(guān)系的數(shù)值范圍。在線性范圍內(nèi)，檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好,結(jié)論可信度高。再現(xiàn)性（Reproducibility）：就是當(dāng)一個方法被不同實驗室應(yīng)用于同一樣品的不同重復(fù)的檢測時，能夠給出相同結(jié)果的能力。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動驗證時應(yīng)考慮所有影響方法標(biāo)準(zhǔn)和檢測結(jié)果的因素。如果所制修訂的方法標(biāo)準(zhǔn)等同采用了知名的技術(shù)組織或刊物認(rèn)可或發(fā)布的方法，或者是國際標(biāo)準(zhǔn)方法，在被證實適用于規(guī)定的檢測/診斷目的之前，都應(yīng)進(jìn)行驗證。

如果所制修訂的方法標(biāo)準(zhǔn)采用的是非標(biāo)準(zhǔn)方法、實驗室設(shè)計（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法，在被證實適用于預(yù)期的檢測/診斷目的之前，應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。

3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動應(yīng)記錄驗證活動所用的方法及獲得的結(jié)果。選擇樣品時，應(yīng)注意的因素：質(zhì)量和數(shù)量。選擇試劑時，應(yīng)注意的因素：標(biāo)準(zhǔn)化，保質(zhì)方法標(biāo)準(zhǔn)的敏感性的驗證：篩查方法要求敏感性必須高。

3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動方法標(biāo)準(zhǔn)特異性的驗證：1如果是用于確診的，方法標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)具有足夠的特異性，以將檢測中產(chǎn)生的交叉反應(yīng)降到最低。

2樣品應(yīng)包括含有目標(biāo)分析物的樣品和含有目標(biāo)分析物的相似物的樣品。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動重復(fù)性的驗證重復(fù)性所選擇的樣品應(yīng)該是在方法的線性范圍內(nèi)具有代表性的樣品。所用樣品數(shù)量與前述敏感性和特異性驗證試驗所用數(shù)量相同。設(shè)定相同的程序、相同的操作人員、在相同的條件下使用相同的儀器、相同的地點在3個不同的日期進(jìn)行，以保證所有的檢測是獨立的。重復(fù)性的變異不能超過30%。如果超過30%，就需要進(jìn)行更多的初步研究，以證明該方法是足夠穩(wěn)定的。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動線性范圍臨界值（cut-off值）方法標(biāo)準(zhǔn)間的比較和協(xié)調(diào)方法標(biāo)準(zhǔn)間比較是為了證明新方法是現(xiàn)有技術(shù)的提高；方法標(biāo)準(zhǔn)間比較包括對方法的工作特性（如敏感性和特異性）或?qū)Ψ椒ǖ牟僮魈匦裕ㄈ绯杀?、所需環(huán)境、時間周期、檢測量等）進(jìn)行比較。

Robustness、RuggednessRobustnessmeasureofatest'scapacitytoremainunaffectedbysmallchangesorvariationintroducedintestconditionstomimicanticipatedroutinelaboratoryoperation,partofoptimizationstudiesandreflectedinrepeatabilityassessments(e.g.incubationtimes,reactiontemperatures,bufferpH/ionicstrength,reagentdilutions,sampleconditionand/orpreparation,etc.).測試一種試驗?zāi)軌虮３植皇苄〉淖兓蛟谠囼灄l件下模仿預(yù)期的常規(guī)實驗室操作產(chǎn)生的變化、優(yōu)化研究部分內(nèi)容產(chǎn)生的變化、重復(fù)性評估（如孵育時間，反應(yīng)溫度，緩沖液pH/離子強(qiáng)度，試劑稀釋，樣本條件和/或制劑等反映的影響）中產(chǎn)生的變化的影響的能力。RuggednessAmeasureofanassay’scapacitytoremainunaffectedbysubstantialchangesorsubstitutionsintestconditionsanticipatedinmulti-laboratoryutilization,partoffitnessstudiesandreproducibilityassessments(shippingconditions,technologytransfer,reagentsbatches,equipment,testingplatformand/orenvironments).一種試驗?zāi)軌蛟诙鄠€實驗室間使用、部分適應(yīng)性研究、再現(xiàn)性評估（運輸條件，技術(shù)轉(zhuǎn)移，試劑批次，設(shè)備，測試平臺和/或環(huán)境）等預(yù)期的試驗條件下維持其不受較大變化或替代影響的能力。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動再現(xiàn)性的驗證對再現(xiàn)性的評估最少需在標(biāo)委會的三個實驗室（或3名實驗員）進(jìn)行，應(yīng)對相同的樣品組使用相同的方法進(jìn)行檢測。理想狀態(tài)下，這些樣品應(yīng)該是來自于目標(biāo)動物群的獨立樣品，代表群體中的目標(biāo)檢測物的活性范圍。如果這樣的樣品不可獲得，那么對已知陽性樣品進(jìn)行系列稀釋以達(dá)到需要的活性范圍也是可以接受的。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動再現(xiàn)性的驗證驗證再現(xiàn)性所用的樣品，應(yīng)逐個進(jìn)行分裝、編碼、分發(fā)、運輸?shù)絽⒓訉嶒炇一蚍职l(fā)給實驗員，在相同的條件下儲存。對參加實驗室（或?qū)嶒瀱T）的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、評估。這些數(shù)據(jù)包括：實驗室（或?qū)嶒瀱T）間平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、每個樣品和對照的變化范圍。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動再現(xiàn)性的驗證進(jìn)行再現(xiàn)性評估時，建議每個實驗室（或每個實驗員）將每個樣品做兩個或三個重復(fù)，以進(jìn)一步評估方法在實驗室內(nèi)部的重復(fù)性。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動再現(xiàn)性的驗證將兩個實驗室（或?qū)嶒瀱T）的平均值進(jìn)行比較，如果

=重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差=再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差認(rèn)為兩個實驗室檢測結(jié)果的平均值在統(tǒng)計學(xué)上沒有顯著差異。3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗證活動方法的應(yīng)用只有那些表現(xiàn)出能夠適應(yīng)檢測目的的方法才可以被應(yīng)用到實際檢測工作中。在應(yīng)用過程中得到行業(yè)、國家、地區(qū)或國際認(rèn)可的方法才能夠上升為標(biāo)準(zhǔn)。方法有效性的控制內(nèi)部質(zhì)量控制、外部質(zhì)量控制方法/標(biāo)準(zhǔn)的文件化

提交驗證材料

驗證試驗結(jié)束后，須整理好相應(yīng)的試驗記錄、試