體內(nèi)藥物分析課件

體內(nèi)藥物分析匯報(bào)人：某某某匯報(bào)時(shí)間：2023.X.X第一章

緒論第一節(jié)體內(nèi)藥物分析的意義、性質(zhì)、對(duì)象和任務(wù)臨床藥學(xué)的概念以病人為對(duì)象研究藥物及其劑型與機(jī)體相互作用和應(yīng)用規(guī)律的綜合性學(xué)科，旨在用客觀科學(xué)指標(biāo)來(lái)研究具體病人的合理用藥。其核心問(wèn)題是最大限度地發(fā)揮藥物的臨床療效，確保病人的用藥安全與合理。－－李煥德、程澤能主編臨床藥學(xué)

臨床藥學(xué)的研究范圍主要研究藥物的劑型及其合理使用，具體范圍包括：1.劑型的設(shè)計(jì)包括研制和開(kāi)發(fā)新的藥物制劑以適合不同病人的需要。提供針對(duì)性和科學(xué)性強(qiáng)的劑型和制劑。臨床藥學(xué)的研究范圍2.劑型中藥物（及賦形劑）的作用機(jī)制及其安全性和危害性包括介紹新藥、新劑型的作用機(jī)制、劑量、藥物相互作用、禁忌證、藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)、不良反應(yīng)、血藥濃度監(jiān)測(cè)方法等新藥信息、研究藥物在體內(nèi)和體外相互作用機(jī)制、研究藥物臨床劑量的代謝機(jī)制、藥物不良反應(yīng)監(jiān)察、藥物過(guò)量情況下的代謝機(jī)制以及處理方法等。臨床藥學(xué)的研究范圍3.用藥對(duì)象及其遺傳、生理病理?xiàng)l件和要求包括針對(duì)病人的劑量個(gè)體化、血藥濃度監(jiān)測(cè)、特殊病人的治療方案、藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)、藥學(xué)監(jiān)護(hù)等方面的研究。臨床藥學(xué)的研究?jī)?nèi)容臨床藥動(dòng)學(xué)、臨床藥效學(xué)研究藥物利用度評(píng)價(jià)藥物相互作用研究藥物過(guò)后代謝機(jī)制和處理方法研究藥物不良反應(yīng)監(jiān)察藥學(xué)監(jiān)護(hù)以及新制劑的開(kāi)發(fā)和評(píng)價(jià)、藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)研究、藥物情報(bào)信息研究等。臨床藥學(xué)的主要任務(wù)參與合理用藥治療藥物監(jiān)測(cè)藥物不良反應(yīng)監(jiān)察藥物信息的收集與咨詢服務(wù)藥物相互作用研究和配伍研究藥代動(dòng)力學(xué)與生物利用度研究新制劑及新劑型研究藥物的個(gè)體差異不同病人對(duì)同一種藥物的反應(yīng)存在著量與質(zhì)的差別，即使病人的年齡、性別和生活條件完全相同，對(duì)于同一劑量的同一種藥也可有不同反應(yīng)，這種個(gè)體與個(gè)體間的差異，稱藥物的個(gè)體差異。個(gè)體差異在臨床上的表現(xiàn)形式特異性：有些人對(duì)某種藥物的反應(yīng)超出該藥物正常的藥理反應(yīng)。如：器官移植抗排斥藥物－新山地明或賽斯平

高敏性：有些人對(duì)某些藥物的作用比一般人敏感，使用少量就能產(chǎn)生明顯的療效，用量稍大，就會(huì)出現(xiàn)中毒反應(yīng)。耐受性個(gè)體差異的存在造成藥物在使用過(guò)程中出現(xiàn)“化學(xué)上等價(jià)而生物學(xué)上不等價(jià)”的現(xiàn)象。了解藥物在體內(nèi)質(zhì)和量的變化規(guī)律－真正確保藥物應(yīng)用的安全和有效一、體內(nèi)藥物分析的意義二十世紀(jì)六十年代以來(lái)，在藥學(xué)領(lǐng)域中發(fā)展了兩門(mén)與臨床實(shí)踐直接有關(guān)的學(xué)科：臨床藥理學(xué)（ClinicalPharmacology）和生物藥劑學(xué)（Biopharmaceutics；Biopharmacy）。臨床藥理學(xué)（ClinicalPharmacology）的研究?jī)?nèi)容主要是：新藥療效與毒性的評(píng)價(jià)、藥物臨床試驗(yàn)的研究、藥物相互作用和作用機(jī)理的研究；生物藥劑學(xué)（Biopharmaceutics；Biopharmacy）研究的主要內(nèi)容：藥物與制劑在體內(nèi)的吸收、分布、代謝與排泄過(guò)程，闡明藥物劑型、工藝－藥物濃度－藥效之間的關(guān)系，生物利用度及生物等效性的研究。二、體內(nèi)藥物分析的性質(zhì)體內(nèi)藥物分析是通過(guò)現(xiàn)代分析手段來(lái)了解藥物在生物體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，以獲得藥物代謝動(dòng)力學(xué)的各種參數(shù)、代謝方式、代謝途徑及代謝產(chǎn)物等信息，從而為藥物的研制生產(chǎn)、藥物臨床試驗(yàn)、藥物作用機(jī)理的探討、藥物質(zhì)量的評(píng)價(jià)以及藥物的改進(jìn)與發(fā)展等工作做出貢獻(xiàn)。三、體內(nèi)藥物分析的對(duì)象3．從樣品的來(lái)源分1．從分析物分母體藥物代謝物內(nèi)源性物質(zhì)：多巴胺等內(nèi)源激素2．從生物樣品種類分均勻樣品：血液、尿液等體液非均勻樣品：肝、腎等器官、組織人體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)藥物分析的任務(wù)（一）方法學(xué)的研究－主要任務(wù)1.探討各種方法應(yīng)用于體內(nèi)藥物分析的規(guī)律性問(wèn)題2.估計(jì)、評(píng)定各種分析方法能達(dá)到的靈敏、專屬、準(zhǔn)確程度3.提供合理的、最佳的分析條件（二）為藥物體內(nèi)研究提供數(shù)據(jù)1．新藥研制：提供藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)、生物利用度及血漿蛋白結(jié)合率等基本數(shù)據(jù)。2．已經(jīng)應(yīng)用于臨床的藥物，仍有必要進(jìn)行深入的體內(nèi)研究。體內(nèi)藥物分析的任務(wù)（三）開(kāi)展各種生物樣品的常規(guī)測(cè)定

主要是對(duì)生物體液（血液、尿液等）、臟器組織、頭發(fā)等生物材料中的藥物進(jìn)行測(cè)定。如臨床藥理研究：需了解血藥濃度與藥物效應(yīng)之間的關(guān)系。如臨床藥學(xué)研究：為實(shí)行給藥方案?jìng)€(gè)體化提供準(zhǔn)確的血藥濃度測(cè)定值。體內(nèi)藥物分析的任務(wù)（四）藥物代謝產(chǎn)物的研究與測(cè)定1.藥物設(shè)計(jì)、開(kāi)發(fā)

依那普利－依那普利拉2.評(píng)價(jià)臨床用藥的安全性及合理性體內(nèi)藥物分析的任務(wù)（五）內(nèi)源性物質(zhì)測(cè)定內(nèi)源性物質(zhì)（EndogenousSubstances）是指機(jī)體內(nèi)的正常生化成分，如激素、乙酰膽堿、尿酸等。在正常生理?xiàng)l件下這些物質(zhì)均處在一定濃度范圍內(nèi)。內(nèi)源性物質(zhì)在體內(nèi)的含量便會(huì)發(fā)生變化或出現(xiàn)異常，提示機(jī)體發(fā)生了病變。體內(nèi)藥物分析的任務(wù)（六）濫用藥物的檢測(cè)1.法醫(yī)檢驗(yàn)的毒物分析2.吸毒者體內(nèi)的毒物檢測(cè)3.運(yùn)動(dòng)員體內(nèi)的興奮劑（禁藥）檢查

體內(nèi)藥物分析的任務(wù)第二節(jié)

體內(nèi)藥物分析學(xué)習(xí)方法

一、與藥物分析的聯(lián)系和區(qū)別

1.聯(lián)系：是藥物分析的一個(gè)分支學(xué)科，藥物分析中所研究的各類藥物的理化性質(zhì)，結(jié)構(gòu)及根據(jù)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)導(dǎo)出的各種分析方法都是設(shè)計(jì)體內(nèi)藥物分析方法的參考依據(jù)。2.區(qū)別:

（1）目的、性質(zhì)不同：前者以評(píng)價(jià)藥物的真?zhèn)蝺?yōu)劣，即外在質(zhì)量為目的，以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為規(guī)范，由藥檢、質(zhì)檢執(zhí)行，結(jié)果有一定的法律效力；后者評(píng)價(jià)藥物在體內(nèi)的內(nèi)在質(zhì)量，測(cè)定體內(nèi)微量藥物、代謝物及內(nèi)源性物質(zhì)，具有研究和探索性質(zhì)。（2）方法的不同：

前者屬常量分析，多用經(jīng)典方法，部分用儀器分析，方法為各種標(biāo)準(zhǔn)所收載；

后者屬微量、痕量分析，只能用具有高分離能力、高靈敏度的現(xiàn)代化儀器分析方法，而且方法學(xué)的研究仍在發(fā)展中。

（3）對(duì)象不同：前者結(jié)果主要用于決定被檢藥物及其制劑的質(zhì)量；后者測(cè)定體內(nèi)藥物、代謝物或內(nèi)源性物質(zhì)的濃度，研究藥物的動(dòng)態(tài)過(guò)程、求出藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，為臨床安全合理用藥提供數(shù)據(jù)和信息；用于調(diào)整、制定給藥方案；也為新藥研究申報(bào)提供資料。

二、學(xué)習(xí)方法

1.在學(xué)習(xí)分析、藥化、藥理、藥分及文獻(xiàn)查閱等課程的基礎(chǔ)上，綜合運(yùn)用以往所學(xué)知識(shí)，學(xué)習(xí)和設(shè)計(jì)體液中常用藥物分析方法。

2.要善于經(jīng)常查閱文獻(xiàn)資料、積累綜合信息，運(yùn)用綜合結(jié)果；

3.要重視實(shí)驗(yàn)技巧的訓(xùn)練和培養(yǎng)獨(dú)立思考、獨(dú)立解決問(wèn)題的能力。第三節(jié)體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)與要求體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)1.樣品中干擾物多。方法的分離能力、專屬性要強(qiáng)。

2.樣品量少。方法要可靠準(zhǔn)確，細(xì)致熟練。

3.濃度很低，方法有高靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度，穩(wěn)定而較高的回收率。體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)4.數(shù)據(jù)結(jié)果重現(xiàn)性一般較差；5.由于新技術(shù)新方法層出不窮，因此就方法而言，具有研究和探索的性質(zhì)，并在不斷充實(shí)和完善之中。6.工作量較大，測(cè)定數(shù)據(jù)的處理和結(jié)果的闡明較復(fù)雜。體內(nèi)藥物分析的新要求高靈敏度檢測(cè)方法的運(yùn)用高選擇性、高專屬性的分離方法的建立分析方法應(yīng)達(dá)到所要求的精密度和準(zhǔn)確度，具有穩(wěn)定、較高的回收率求解出具有實(shí)驗(yàn)和臨床意義的參數(shù)、模型第四節(jié)體內(nèi)藥物分析的發(fā)展概況及學(xué)科熱點(diǎn)問(wèn)題體內(nèi)藥物分析的發(fā)展1．國(guó)外發(fā)展概況60年代初 發(fā)現(xiàn)藥效與血藥濃度關(guān)系70年代 體內(nèi)藥物分析方法建立80年代 發(fā)展迅猛，新儀器不斷涌現(xiàn)90年代成為一門(mén)綜合性很強(qiáng)的應(yīng)用學(xué)科

2．國(guó)內(nèi)情況

我國(guó)學(xué)者對(duì)體內(nèi)藥物分析的關(guān)注始于二十世紀(jì)七十年代末。1981年，南京藥學(xué)院吳如金教授在“中國(guó)藥學(xué)會(huì)藥物分析第一次學(xué)術(shù)會(huì)議”上首次作了“體內(nèi)藥物分析謅議”的學(xué)術(shù)報(bào)告，引起了與會(huì)者的關(guān)注和興趣。隨后，在全國(guó)各地相繼舉辦了多期培訓(xùn)班，對(duì)體內(nèi)藥物分析的意義、任務(wù)、方法技術(shù)及應(yīng)用情況進(jìn)行了介紹與推廣體內(nèi)藥物分析的發(fā)展80年代初，藥物分析工作者倡導(dǎo)，1980年版《藥物分析》教材中納入部分內(nèi)容，第二、三版增加體內(nèi)藥物分析一章。第四版、第五版取消，各學(xué)校開(kāi)設(shè)體內(nèi)藥物分析課程。80年代開(kāi)始在醫(yī)院進(jìn)行臨床藥學(xué)工作，主要測(cè)定藥物濃度。體內(nèi)藥物分析的發(fā)展學(xué)科前沿游離藥物濃度測(cè)定代謝物的檢測(cè)與研究對(duì)映體分析的監(jiān)測(cè)與研究F/T，S/P及它們之間的相關(guān)性研究藥物（－）（+）氯胺酮引起CNS興奮麻醉作用強(qiáng)噴他佐辛較強(qiáng)的止痛與呼吸抑制作用引起主觀焦慮感覺(jué)戊巴比妥鎮(zhèn)靜作用強(qiáng)引起CNS興奮普萘洛爾

-阻斷作用強(qiáng)

-阻斷作用弱維拉帕米對(duì)房室傳導(dǎo)起負(fù)性傳導(dǎo)作用心血管作用弱學(xué)科前沿體內(nèi)微量元素的測(cè)定與研究新技術(shù)、新方法的聯(lián)用研究分析方法的質(zhì)量控制研究直接進(jìn)樣方法研究第二章

體內(nèi)藥物分析相關(guān)的基礎(chǔ)

理論概述內(nèi)容提要第一節(jié)藥物的體內(nèi)過(guò)程第二節(jié)血藥濃度與臨床療效的關(guān)系第三節(jié)血藥濃度與合理用藥第四節(jié)治療藥物監(jiān)測(cè)第五節(jié)血藥濃度測(cè)定種類第一節(jié)藥物的體內(nèi)過(guò)程一、藥物的吸收二、藥物的分布三、藥物的代謝四、藥物的排泄藥物體內(nèi)過(guò)程示意圖游離藥物結(jié)合藥物生物轉(zhuǎn)化血液循環(huán)系統(tǒng)排泄作用部位受體結(jié)合藥物游離藥物蛋白組織游離藥物結(jié)合藥物蛋白吸收蛋白分布一、藥物的吸收（Absorption）藥物由給藥部位未經(jīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)變化而進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的過(guò)程。給藥途徑：血管內(nèi)給藥（無(wú)吸收過(guò)程）血管外給藥（入血前經(jīng)歷吸收過(guò)程）藥物的吸收部位胃腸道吸收；注射部位的吸收；粘膜與皮膚吸收；其他部位的吸收。（一）胃腸道吸收1.從胃吸收吸收的快慢與程度與藥物的離解度及藥物的脂溶性密切相關(guān)胃液呈酸性（pH0.9-1.5）：有機(jī)弱酸性藥物易吸收在pKa相近的情況下，分子狀態(tài)藥物中脂溶性大者，其吸收也快但停留時(shí)間短，吸收量有限。2.從小腸吸收（主要部位）腸液呈弱堿性：有機(jī)弱堿性藥物易吸收。停留時(shí)間長(zhǎng)，吸收面積大，為胃腸道吸收的主要部位。（1）劑型及理化特性溶液劑的吸收較片劑快分散片的吸收速度和程度＞普通片＞緩釋片微乳化的環(huán)孢霉素A＞普通膠囊制劑3.影響胃腸道吸收的因素（2）食物－一般認(rèn)為食物會(huì)延緩藥物的吸收減慢藥物自胃內(nèi)排出，延遲小腸的吸收食物吸收水分，延遲固體制劑的崩解和藥物的溶出內(nèi)容物粘度增大，阻礙藥物向管壁擴(kuò)散，使吸收減慢食物中含有較多脂肪時(shí)，可促進(jìn)難溶性藥物的吸收，如灰黃霉素食物與藥物之間也存在著相互作用。長(zhǎng)期飲酒可使肝藥酶的活性發(fā)生變化，進(jìn)而影響某些藥物的代謝。茶中的咖啡因和茶堿可使中樞抑制藥的作用下降，其中的鞣酸能與多種金屬離子、苷類和生物堿等結(jié)合產(chǎn)生沉淀而影響它們的吸收。

（3）胃腸道的功能狀態(tài)：胃腸道血流量胃腸道黏膜分泌物的容量組分和粘度的改變胃排空的速率（4）藥物的首過(guò)效應(yīng)（FirstPassEffect）:藥物經(jīng)胃腸粘膜吸收后都要經(jīng)過(guò)肝臟，某些藥物可被腸液或腸壁上的腸菌酶破壞代謝，或在肝內(nèi)受到微粒體混合功能氧化酶等藥酶代謝的影響，使進(jìn)入體循環(huán)的藥量減少。如普萘洛爾等，與食物同服可提高生物利用度。（5）藥物相互作用：藥物配伍使用時(shí)可影響其中某一藥的胃腸道吸收：含二價(jià)或三價(jià)金屬離子（鈣、鎂、鐵、鉍、鋁）藥物若與四環(huán)素類、喹諾酮類抗生素等同服，胃腸道內(nèi)形成難溶性絡(luò)合物，吸收減少同時(shí)服用氫氧化鋁凝膠或牛奶對(duì)去甲金霉素血藥濃度的影響（6）吸煙對(duì)藥物吸收的影響：煙草中多環(huán)芳烴類化合物能增強(qiáng)肝藥酶活性，加速一些主要經(jīng)肝臟代謝藥物的代謝，使其血藥濃度及療效降低。被注射藥物必須兼具一定程度的水溶性和脂溶性注射部位（二）注射部位的吸收（三）黏膜與皮膚吸收1.黏膜吸收吸收較少，主要發(fā)揮局部藥理作用。對(duì)首過(guò)效應(yīng)明顯的藥物如異丙腎上腺素片，硝酸甘油片吸收迅速，臨床應(yīng)用廣。

2.皮膚吸收脂溶性藥物易自皮膚吸收（四）其他部位的吸收1.直腸內(nèi)給藥吸收機(jī)制與胃腸道相似，但吸收表面積小，不如口服迅速而規(guī)則

2.肺部藥物的吸收揮發(fā)性或氣體藥物以被動(dòng)擴(kuò)散方式由肺吸收。吸收速度與藥物濃度成正比，顆粒越小，吸收越快。二、藥物的分布（Distribution）藥物從給藥部位吸收進(jìn)入血液后，再由血液透過(guò)各種生理屏障向機(jī)體各部位可逆轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程稱為分布。藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)；血流量與膜通透性；體內(nèi)特殊屏障；藥物與血漿蛋白的結(jié)合。影響藥物分布的主要因素：藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定其理化性質(zhì)：藥物的酸堿性藥物理化性質(zhì)（離解度、親脂性）藥物與血漿蛋白或組織蛋白結(jié)合的能力

（一）藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)細(xì)胞內(nèi)pH7.0pH7.4細(xì)胞外液弱酸性藥物在細(xì)胞外液的濃度＞細(xì)胞內(nèi)液弱堿性藥物在細(xì)胞內(nèi)液的濃度＞細(xì)胞外液（二）血流量與膜通透性藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到各組織的分布速度取決于：血流量與膜通透性。1.血流量灌注速率：每單位組織容積中，每分鐘通過(guò)組織的血液毫升數(shù)。2.膜通透性細(xì)胞膜由極性和非極性兩類氨基酸組成藥物體內(nèi)過(guò)程示意圖游離藥物結(jié)合藥物生物轉(zhuǎn)化血液循環(huán)系統(tǒng)排泄作用部位受體結(jié)合藥物游離藥物蛋白組織游離藥物結(jié)合藥物蛋白吸收蛋白分布藥物穿過(guò)細(xì)胞膜有被動(dòng)擴(kuò)散和載體媒介的轉(zhuǎn)運(yùn)兩種主要方式（1）被動(dòng)擴(kuò)散：藥物由濃度高的一側(cè)向膜對(duì)側(cè)的擴(kuò)散。屬一級(jí)動(dòng)力學(xué)（血藥濃度與給藥劑量呈劑量依賴關(guān)系）。

轉(zhuǎn)運(yùn)速率取決于：生物膜的通透性；膜兩側(cè)的濃度梯度；藥物的脂/水分布系數(shù)。（2）主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)（載體媒介的轉(zhuǎn)運(yùn)）：需借助于轉(zhuǎn)運(yùn)載體或轉(zhuǎn)運(yùn)酶（如某些膜蛋白），具有高度選擇性，可為同類物質(zhì)所競(jìng)爭(zhēng)，有飽和現(xiàn)象，需消耗能量，并能逆電化學(xué)梯度和濃度梯度而轉(zhuǎn)運(yùn)。圖2－2載體媒介的轉(zhuǎn)運(yùn)示意圖（三）體內(nèi)特殊屏障1.血腦屏障：腦組織中毛細(xì)管壁與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞所形成的屏障。其藥物轉(zhuǎn)運(yùn)以被動(dòng)擴(kuò)散為主。高解離度的、非脂溶性和蛋白結(jié)合率高的藥物難以通過(guò)。2.胎盤(pán)屏障：藥物穿透胎盤(pán)主要通過(guò)被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。脂溶性的非離子化的藥物易通過(guò)。（四）藥物與血漿蛋白的結(jié)合藥物進(jìn)入體內(nèi)后，大多數(shù)能與生物大分子，特別是血漿蛋白存在不同程度結(jié)合。由于只有游離型藥物才能透過(guò)細(xì)胞膜屏障，所以與血漿蛋白的結(jié)合直接影響藥物在體內(nèi)的分布。三、藥物的代謝（Metabolism）藥物的代謝是指藥物經(jīng)過(guò)體內(nèi)吸收、分布之后，在藥酶的作用下經(jīng)歷化學(xué)結(jié)構(gòu)變化的過(guò)程，機(jī)體通過(guò)生物轉(zhuǎn)化將親脂性的藥物變成極性較強(qiáng)、更易于由腎臟排泄的產(chǎn)物－代謝物。（一）藥物代謝的反應(yīng)類型及過(guò)程1.藥物代謝的化學(xué)途徑及部位藥物代謝主要在肝內(nèi)進(jìn)行，也發(fā)生在血漿、胃腸道、肺、皮膚、腎臟或其他組織細(xì)胞，絕大多數(shù)藥物代謝均是細(xì)胞內(nèi)特異的酶催化反應(yīng)。2.藥物代謝的反應(yīng)類型及特性I相代謝反應(yīng)（phaseIreactions）：在藥物結(jié)構(gòu)中引入羥基、羧基極性基團(tuán)，增加水溶性，以利于藥物經(jīng)泌尿和消化系統(tǒng)排泄。I相代謝反應(yīng)包括：氧化－碳原子氧化（甲苯磺丁脲）；羥基化（苯妥英）；脫烷基氧化（丙咪嗪）；N-和S-氧化（氯丙嗪）還原－華法林的酮基被還原成醇基水解－普魯卡因水解生成對(duì)氨基苯甲酸甲苯磺丁脲氧化代謝途徑占使用劑量的30％占使用劑量的60％苯妥英羥基化代謝為對(duì)羥基苯妥英丙咪嗪經(jīng)氧化脫甲基生成去甲丙咪嗪氯丙嗪氧化為氯丙嗪亞砜華法林酮基被還原為醇基普魯卡因在體內(nèi)水解生成對(duì)氨基苯甲酸II相代謝反應(yīng)（phaseIIreactions）：I相代謝產(chǎn)物再與體內(nèi)的一些內(nèi)源性化合物結(jié)合，生成極性更大的新的代謝物從尿液中排出體外。II相反應(yīng)－結(jié)合反應(yīng)（Conjugation）II相代謝反應(yīng)包括：（1）葡萄糖醛酸（2）硫酸（3）甘氨酸（4）谷胱甘肽（5）S－腺苷甲硫氨酸（6）乙酰化－異煙肼非那西丁在體內(nèi)的I相代謝和II相代謝反應(yīng)異煙肼在乙?；D(zhuǎn)移酶的作用下被代謝為乙酰異煙肼（二）藥物代謝產(chǎn)物的藥理活性藥物通過(guò)生物轉(zhuǎn)化可產(chǎn)生的藥理結(jié)果有：1.有藥理活性的藥物轉(zhuǎn)化成無(wú)活性物質(zhì)2.前體藥物在體外無(wú)藥理活性經(jīng)體內(nèi)過(guò)程使藥物轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘拇x物（環(huán)磷酰胺－磷酰胺氮芥）3.代謝轉(zhuǎn)化使代謝物的藥理活性改變（非那西丁－對(duì)乙酰氨基酚）。（三）影響藥物代謝的因素1.藥物代謝的個(gè)體差異性2.年齡和性別對(duì)藥物代謝的影響3.藥物相互作用對(duì)藥物代謝的影響4.疾病對(duì)藥物代謝的影響1.藥物代謝的個(gè)體差異性個(gè)體差異不同種族或同種族中不同個(gè)體間的體內(nèi)藥物代謝存在先天差異：遺傳學(xué)差異、非遺傳學(xué)差異（年齡、性別、肝功能、藥物代謝的“時(shí)間周期節(jié)律”和環(huán)境因素）代謝分型：快代謝型（extensivemetabolizer,EM）慢代謝型（poormetabolizer,PM）呈代謝多態(tài)性的代謝類型：乙?；土u化代謝重要原因：遺傳學(xué)因素導(dǎo)致酶活性差異。口服相同劑量（25mg）后平均血漿中乙基嗎啡濃度PM組比EM組明顯偏高。單劑量口服乙基嗎啡25mg后，快代謝組（EM）和慢代謝組（PM）血漿中乙基嗎啡的濃度變化2.年齡和性別對(duì)藥物代謝的影響

年齡：未成年人和老年病人對(duì)藥物的藥理作用及毒性的敏感性均較一般成年人明顯增強(qiáng)（酶活性低、內(nèi)源性輔助因子少、肝血流量少，而引起藥物的代謝速率減慢）?？诜嗤瑒┝浚?0mg）的胃酸抑制藥奧美拉唑后，老年人組的血藥濃度顯著高于年輕人組。性別：雄性大鼠的藥物代謝速率較成年雌性大鼠要快得多－雄性激素婦女妊娠期間生理上的變化，影響藥代動(dòng)力學(xué)的各個(gè)環(huán)節(jié)。3.藥物相互作用對(duì)藥物代謝的影響藥物相互作用對(duì)藥物代謝的影響主要表現(xiàn)在對(duì)肝藥酶（細(xì)胞色素P-450及細(xì)胞色素P-448）的酶促和酶抑作用藥物代謝的增強(qiáng)：促進(jìn)酶的合成速率或抑制酶的降解速率，其結(jié)果加快了藥物代謝。

如：環(huán)孢霉素與利福平合用，環(huán)孢霉素的血藥濃度顯著降低?？诜h(huán)孢菌素10mg/kg后（a）與靜注3mg/kg后（b）的藥－時(shí)曲線未合并用利福平合并用利福平藥物代謝的抑制：抑制微粒體藥酶活性，其結(jié)果降低了藥物的代謝。

如：氯霉素與苯妥英合用，增強(qiáng)了苯妥英的作用。4.疾病對(duì)藥物代謝的影響肝臟疾?。x；心臟?。ㄒ鸶窝髯兓x；呼吸系統(tǒng)疾?。x；甲狀腺功能疾?。x（低下－代謝慢、亢進(jìn)－代謝快）四、藥物的排泄（Excretion,

Elimination）定義；藥物及其代謝物從體內(nèi)被清除的過(guò)程。

排泄器官：腎、肝、膽、腸、肺及外分泌腺等

腎排泄和膽汁排泄是兩個(gè)主要途徑。（一）腎排泄腎臟：人體排泄藥物及代謝物的重要器官。

藥物從腎臟的排泄取決于：1.藥物本身的理化性質(zhì)2.藥物與血漿蛋白結(jié)合的程度3.腎臟的生理狀況藥物的腎排泄率＝腎小球?yàn)V過(guò)率＋腎小管分泌率－腎小管重吸收率（二）膽汁排泄藥物消除的另一重要途徑藥物原型物隨膽汁直接排出（次要途徑）藥物代謝物隨膽汁排出（重要途徑）

C血漿＝C膽汁——

被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)C血漿＜C膽汁——

主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)肝腸循環(huán)（entero-hepaticcycle）：藥物通過(guò)胃腸道吸收，膽汁分泌泄入小腸，而后再被小腸重吸收的過(guò)程；藥物在肝內(nèi)生物轉(zhuǎn)化為代謝物，代謝物被分泌入膽汁，然后在小腸又轉(zhuǎn)化為藥物而被吸收的過(guò)程。造成藥物的延遲排泄，在藥代動(dòng)力學(xué)曲線上表現(xiàn)為雙吸收峰特征。如苯巴比妥、洋地黃毒苷等。（三）其他排泄途徑經(jīng)呼吸道排泄（揮發(fā)性或醇類）經(jīng)外分泌腺排泄（乳汁）第二節(jié)

血藥濃度與臨床療效的關(guān)系一、藥物臨床效應(yīng)的個(gè)體差異性（一）藥效學(xué)及其與血藥濃度的關(guān)系藥效學(xué)：研究藥物對(duì)機(jī)體作用的性質(zhì)、強(qiáng)度與起效作用時(shí)間及藥物作用“量”的規(guī)律的科學(xué)。藥物療效→受體周圍藥物的“量”（強(qiáng)度、作用時(shí)間）→藥物體內(nèi)血藥濃度1.時(shí)效曲線單劑量給藥后，于不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定藥物的臨床效應(yīng)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，藥物效應(yīng)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖，即得時(shí)效曲線。單劑量給藥后的時(shí)－效曲線2.血藥濃度－時(shí)間曲線單劑量給藥后，于不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定藥物的血藥濃度，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，血藥濃度為縱坐標(biāo)作圖，即得血藥濃度－時(shí)間曲線。3.療效－時(shí)間曲線與血藥濃度－時(shí)間曲線的關(guān)系療效－時(shí)間曲線多數(shù)情況下可反映藥物效應(yīng)隨時(shí)間的變化趨勢(shì)；血藥濃度－時(shí)間曲線可反映血中藥物濃度隨時(shí)間的變化趨勢(shì)藥時(shí)曲線和時(shí)效曲線可互相參考，但不能相互替代，在制度臨床給藥方案時(shí)需綜合評(píng)價(jià)。4.藥物蓄積、作用蓄積和中毒反應(yīng)藥物蓄積：在前次給藥的體內(nèi)藥物尚未完全消除時(shí)第二次給藥；作用蓄積：在前次給藥的“作用殘留時(shí)間”內(nèi)第二次給藥；中毒反應(yīng)：體內(nèi)蓄積達(dá)到過(guò)量的程度就可產(chǎn)生蓄積中毒反應(yīng)。制定連續(xù)給藥方案，應(yīng)考慮連續(xù)用藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。（二）造成藥物臨床效應(yīng)個(gè)體差異因素凡影響藥物體內(nèi)過(guò)程（血藥濃度變化）的因素均直接影響藥物臨床效應(yīng)，主要三方面因素：1.藥物方面的因素：藥物的劑量、劑型、制劑工藝、復(fù)方制劑2.機(jī)體方面的因素：年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、精神因素、疾病狀態(tài)（疾病對(duì)藥物體內(nèi)過(guò)程的影響；疾病影響機(jī)體對(duì)藥物的反應(yīng)性）和遺傳因素3.環(huán)境條件方面的因素：給藥途徑、時(shí)辰藥理學(xué)、連續(xù)用藥產(chǎn)生耐藥性、聯(lián)合用藥的藥物相互作用、吸煙、嗜酒與環(huán)境污染。二、游離型藥物濃度與藥效的關(guān)系藥效作用強(qiáng)弱≌受體部位的藥物濃度≌血液中藥物濃度。因此，血藥濃度可作為間接反映受體部位藥物濃度的指標(biāo)。但此處血液中藥物濃度指的是未與蛋白結(jié)合的游離型藥物濃度，因?yàn)橹挥杏坞x型藥物才能跨模轉(zhuǎn)運(yùn)到達(dá)受體部位，所以游離藥物濃度才真正與藥物的藥理效應(yīng)乃至毒副反應(yīng)關(guān)系密切。目前血藥濃度監(jiān)測(cè)測(cè)定的大都是藥物的總濃度（包括游離藥物濃度和結(jié)合藥物濃度）。一般藥物總濃度能反映出藥理作用的強(qiáng)弱及持續(xù)時(shí)間的長(zhǎng)短，但在下列特殊情況下，總濃度的變化與游離藥物的變化不平行：1.與血漿蛋白具有高度親和力的藥物；2.疾?。文I疾病時(shí)血漿蛋白濃度降低，而使藥物與血漿蛋白結(jié)合率降低，游離藥物濃度增加；3.血漿蛋白結(jié)合率存在個(gè)體差異藥物如奎尼丁血漿蛋白結(jié)合率范圍為50～90％，測(cè)得藥物總濃度相同，由于血漿蛋白結(jié)合率差異大，使蛋白結(jié)合率高的療效不明顯，蛋白結(jié)合率低的卻引起中毒反應(yīng)。

在上述因素下監(jiān)測(cè)血中游離藥物濃度比總藥物濃度更能真實(shí)反映與藥理效應(yīng)的相關(guān)性。三、活性代謝物與藥效的關(guān)系活性代謝物：藥物在體內(nèi)形成具有藥理活性的代謝物如：心得舒口服生物利用度高（在吸收過(guò)程中形成4－羥基心得舒）測(cè)定活性代謝物的濃度有助于解釋臨床觀察結(jié)果和闡明藥理效應(yīng)的變異性。四、有效血藥濃度范圍多數(shù)藥物的血藥濃度與藥理效應(yīng)甚至毒副反應(yīng)具有良好的相關(guān)性，如苯妥英鈉：

＜10ug/ml－無(wú)藥理效應(yīng)10～20ug/ml－具有抗癲癇與抗心率失常作用20～30ug/ml－出現(xiàn)眼球震顫30～40ug/ml－出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失常＞40ug/ml－出現(xiàn)精神異常臨床上提出“有效血藥濃度范圍”的概念：最低有效濃度與最低毒性濃度之間的血藥濃度。第三節(jié)

血藥濃度與合理用藥一、血藥濃度的臨床意義（一）血藥濃度與藥理作用強(qiáng)度

近代藥理學(xué)研究證明，大多數(shù)藥物藥理作用是體內(nèi)藥物與特異性受體相互作用的結(jié)果。R+D→RD→E

R：藥物受體RD：藥物－受體復(fù)合物D：藥物E：藥理作用影響RD形成的因素：1.藥物在受體部位的濃度2.單位容積內(nèi)受體的數(shù)量3.藥物與受體間親和力的強(qiáng)弱血藥濃度可間接反映藥物在受體部位的濃度，根據(jù)血藥濃度可以間接推測(cè)藥物的藥理作用強(qiáng)度。例：保泰松的抗炎有效劑量在兔和人中分別為300mg/kg和10mg/kg（相差30倍），但有效血藥濃度都在10～20ug/ml之間。（二）血藥濃度研究的應(yīng)用

生物利用度（Bio-availability）：研究生物體對(duì)藥物的利益程度

藥物代謝動(dòng)力學(xué)（Pharmacokinetics）：研究藥物體內(nèi)過(guò)程對(duì)藥理作用強(qiáng)度的影響

治療藥物監(jiān)測(cè)（TherapeuticDrugMonitoring,TDM）：關(guān)注血藥濃度與臨床療效和安全性的關(guān)系

藥效動(dòng)力學(xué)（Pharmacodynamics）：研究受體對(duì)藥理作用強(qiáng)度的影響（三）與血藥濃度相關(guān)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)1.藥－時(shí)曲線（Drugconcentration-timecurve）以時(shí)間為橫坐標(biāo)，藥物的一些特征數(shù)量（如體內(nèi)藥量、血藥濃度、尿藥排泄速度、累計(jì)尿藥量等）為縱坐標(biāo)繪制的曲線。2.藥－時(shí)曲線下面積（Areaunderconcentration-timecurve,AUC）代表單次給藥后機(jī)體對(duì)藥物的吸收總量，反映藥物的吸收程度?？赏ㄟ^(guò)統(tǒng)計(jì)矩積分法（梯形法）或藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)公式法求算；試驗(yàn)藥品AUC值與參比藥品的AUC值相比可求出試驗(yàn)藥品的生物利用度。3.峰值血藥濃度（Maximumofdrugconcentration,Cmax）血管外給藥后血漿最高藥物濃度，闡述血藥濃度與毒性反應(yīng)之間的關(guān)系。4.達(dá)峰時(shí)間（Timeofdrugconcentration,Tmax）血管外給藥時(shí)，達(dá)到最大血藥濃度時(shí)的時(shí)間，判斷血管外給藥后機(jī)體對(duì)藥物吸收的快慢。5.生物利用度（Bioavalilability）藥物吸收速度與程度的一種量度：不同藥物制劑或相同的藥物制劑通過(guò)比較兩種制劑的藥－時(shí)曲線，并對(duì)其AUC、Cmax和Tmax進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，判斷兩種制劑是否生物等效。6.表觀分布容積（Apparentvolumeofdistribution,Vd）是T時(shí)體內(nèi)藥物總量與血藥濃度的比值Vd=Dt/Ct推測(cè)藥物在體液中分布的廣泛程度和組織對(duì)藥物的攝取量。7.半衰期（Half-life,t1/2）藥物在體內(nèi)消除一半所需的時(shí)間。t1/2=0.693/kt1/2是判斷藥物在體內(nèi)殘留量的重要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。當(dāng)體內(nèi)藥物經(jīng)過(guò)3.32、6.64和9.96個(gè)生物半衰期時(shí)，藥物在體內(nèi)消除分別為總量的90％、99％和99.9％。8.穩(wěn)態(tài)血藥濃度（Steady-stateplasma-concentration,Css）以一定的時(shí)間間隔，用相同的劑量多次給藥，當(dāng)藥物的吸收速率與消除速率達(dá)到平衡時(shí)，血藥濃度可維持在一定水平內(nèi)上下波動(dòng)，該波動(dòng)范圍定義為穩(wěn)態(tài)血藥濃度。穩(wěn)態(tài)血藥濃度常用于判斷治療藥物監(jiān)測(cè)的采血時(shí)間以及毒副反應(yīng)和療效。圖2-10多劑量給藥達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度時(shí)的藥－時(shí)曲線靜脈注射口服二、血藥濃度的臨床應(yīng)用1.根據(jù)血藥濃度選擇適當(dāng)?shù)乃幬?.根據(jù)血藥濃度選擇適當(dāng)?shù)慕o藥途徑3.根據(jù)血藥濃度指導(dǎo)選擇藥物劑量4.根據(jù)血藥濃度的半衰期確定給藥次數(shù)。第四節(jié)

治療藥物監(jiān)測(cè)

治療藥物監(jiān)測(cè)（TDM）

是近20年來(lái)在臨床藥理學(xué)和治療學(xué)領(lǐng)域內(nèi)興起的一門(mén)新的邊緣學(xué)科。它是在藥代動(dòng)力學(xué)原理指導(dǎo)下，應(yīng)用先進(jìn)的分析技術(shù)，通過(guò)測(cè)定血液或其它體液中的藥物濃度，從而用于指導(dǎo)臨床合理用藥，達(dá)到提高療效，避免或減少不良反應(yīng)的目的。同時(shí)，它也為藥物過(guò)量中毒的診斷以及病人是否遵醫(yī)囑用藥提供重要依據(jù)。近年來(lái)，國(guó)外又將治療藥物監(jiān)測(cè)稱為臨床藥代動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)（clinicalpharmacokineticmonitoring,CPM）。治療藥物監(jiān)測(cè)的目的：1.核心目的是實(shí)現(xiàn)合理的給藥方案?jìng)€(gè)體化2.協(xié)助診斷和處理藥物過(guò)量中毒及進(jìn)行臨床藥理學(xué)研究3.了解患者是否遵醫(yī)囑用藥，提高用藥依從性。

臨床給藥方案?jìng)€(gè)體化：根據(jù)不同患者的生理、病理狀況，調(diào)整適合劑量及給藥間隔使臨床用藥更安全、有效、合理。結(jié)合血藥濃度監(jiān)測(cè)、臨床藥效學(xué)、毒副作用等來(lái)制定。1.藥學(xué)指標(biāo)：華法林－臨床測(cè)定凝血酶原時(shí)間；水楊酸－臨床出現(xiàn)耳鳴、惡心；降壓藥－臨床測(cè)定血壓；降血糖藥－臨床測(cè)定血糖2.血藥濃度：地高辛－腎毒性治療藥物監(jiān)測(cè)的特點(diǎn)：一般只監(jiān)測(cè)一次血藥濃度，不測(cè)藥物經(jīng)時(shí)變化濃度；監(jiān)測(cè)方法要求快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，以適應(yīng)臨床需求。治療藥物監(jiān)測(cè)的原則：1.藥物有效血藥濃度范圍狹窄（地高辛、奎尼?。?；2.藥物劑量小、毒性大（利多卡因、地高辛等）；3.藥物體內(nèi)過(guò)程個(gè)體差異大，具有非線性藥代動(dòng)力學(xué)特性，難以通過(guò)劑量控制估計(jì)血藥濃度（苯妥英鈉、茶堿、水楊酸等）。4.處于某些疾病狀態(tài)下服藥（胃、肝、腎）5.合并用藥有互相作用而影響療效或有中毒時(shí)；6.某些藥物的毒副作用表現(xiàn)與某些疾病本身的癥狀相似（如高地辛、速尿等）；7.長(zhǎng)期用藥的患者，依從性差或產(chǎn)生耐藥性；8.常規(guī)劑量下出現(xiàn)嚴(yán)重毒性反應(yīng)：診斷和處理藥物過(guò)量中毒；為藥物引起的醫(yī)療事故提供法律依據(jù)。需進(jìn)行臨床藥物監(jiān)測(cè)的藥物包括1.治療指數(shù)低、安全范圍窄、毒付作用強(qiáng)的藥物。如：地高辛（安全有效血清濃度范圍0.8~2.0ng/ml）2.非線性代謝，消除速率與劑量有關(guān)的藥物。如：苯妥英鈉（安全有效血清濃度范圍10~20mg/L）3.心、肝、腎、腸道疾病引起ADME顯著變化者。如：肝、腎功能損傷者，器官移植受者等。4.長(zhǎng)期用藥產(chǎn)生耐藥性及血藥濃度可能發(fā)生異常變化者如：丙戊酸（安全有效血清濃度范圍50~100mg/L）5.合并用藥量，因藥物相互作用引起ADME改變者。如：合用肝藥酶誘導(dǎo)/抑制劑（魯米那/氯霉素）6.常規(guī)劑量下出現(xiàn)嚴(yán)重毒性反應(yīng)；診斷和處理藥物過(guò)量中毒；為藥物引起的醫(yī)療事故提供依據(jù)時(shí)，需要監(jiān)測(cè)血藥濃度。1.建立TDM實(shí)驗(yàn)室（人員、儀器、試劑等）2.建立體液濃度分析方法學(xué)（FPIA、HPLC、MEIA、GC等）3.建立TDM內(nèi)部和外部質(zhì)控（雙盲等）4.建立TDM報(bào)告系統(tǒng)（結(jié)果的解釋等）5.TDM工作的臨床應(yīng)用（參加臨床會(huì)診及用藥討論等）如何開(kāi)展治療藥物監(jiān)測(cè)

如何通過(guò)血藥濃度監(jiān)測(cè)實(shí)現(xiàn)給藥方案?jìng)€(gè)體化1)方法的特異性，靈敏度和準(zhǔn)確度要達(dá)到規(guī)定的水平2)及時(shí)出報(bào)告,使有關(guān)血藥濃度信息具有最大利用價(jià)值;3)掌握正確的采樣時(shí)間和采樣方法:多劑服藥達(dá)穩(wěn)態(tài)(超過(guò)5個(gè)半衰期以上)后采血口服給藥消除相取樣,血漿濃度可反映作用部位藥物濃度評(píng)價(jià)療效測(cè)谷值血藥濃度評(píng)價(jià)毒性測(cè)峰值血藥濃度

①為什么要達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度后取樣？當(dāng)藥物的吸收速率與消除速率達(dá)到平衡時(shí)（既達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度），觀察血藥濃度是否落在治療窗范圍內(nèi)才有臨床指導(dǎo)意義（過(guò)早增加或減少劑量都會(huì)造成不良影響）。②為什么達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度后還需間隔一定時(shí)間取樣？峰值：觀察波動(dòng)范圍是否超過(guò)TC；谷值：觀察波動(dòng)范圍是否低于MEC（更能反映治療效果）.③為什么要給予負(fù)荷劑量后測(cè)定峰值？負(fù)荷劑量的給予可使?jié)舛缺M快落入治療窗（適合于急癥），測(cè)定峰值是防止?jié)舛冗^(guò)高。治療藥物監(jiān)測(cè)的發(fā)展與展望分析方法更加靈敏、簡(jiǎn)便、快速、可靠藥物活性代謝物的監(jiān)測(cè)游離藥物濃度的監(jiān)測(cè)手性藥物血藥濃度監(jiān)測(cè)群體藥代動(dòng)力學(xué)的研究進(jìn)展（聯(lián)合用藥）第五節(jié)血藥濃度測(cè)定種類一、游離型和結(jié)合型藥物總濃度的測(cè)定二、游離型藥物濃度的測(cè)定三、藥物活性代謝物的測(cè)定四、對(duì)映體藥物的測(cè)定五、內(nèi)源性活性化合物的測(cè)定一、游離型和結(jié)合型藥物總濃度的測(cè)定血藥濃度－血清或血漿中原型藥物濃度（游離型＋結(jié)合型）TDM的首要工作是測(cè)定血液、唾液、尿液或其它體液中的原型藥物濃度二、游離型藥物濃度的測(cè)定游離型血藥濃度與藥理作用強(qiáng)度直接相關(guān)。游離型血藥濃度測(cè)定方法：1.平衡透析法（equilibriumdialysis）2.超濾法（ultrafiltration）1.平衡透析法（equilibriumdialysis）測(cè)定法：（1）將含藥血漿與透析液分置半透膜的兩側(cè)，半透膜具有一定的分子截留量，能阻擋血漿蛋白以及與之結(jié)合的藥物；（2）在一定時(shí)間后，血中游離藥物通過(guò)半透膜并達(dá)到平衡；（3）選擇適當(dāng)?shù)姆治龇椒y(cè)定透析液中及血漿中的藥物濃度。特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、可測(cè)定處于平衡狀態(tài)下游離血藥濃度；

缺點(diǎn)：測(cè)得的游離血藥濃度受稀釋作用的影響（透析液中水分透過(guò)半透膜使血漿稀釋）；透析時(shí)間長(zhǎng)（十幾至幾十小時(shí)）。應(yīng)用：不適于游離血藥濃度常規(guī)監(jiān)測(cè)，而常用于藥物的血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定。2.超濾法（ultrafiltration）測(cè)定法（半透膜原理）（1）將含藥血漿加入具有半透膜的樣品管放于專用離心機(jī)，調(diào)節(jié)離心力的大小與離心時(shí)間，使游離藥物隨血漿中的水分及其它小分子物質(zhì)按比例通過(guò)半透膜，而血漿蛋白及與之結(jié)合的藥物被截留；（2）選擇適當(dāng)?shù)姆治龇椒y(cè)定超濾液中及血漿中的藥物濃度。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單，離心時(shí)間短、收集濾液多；缺點(diǎn)：在非平衡狀態(tài)下測(cè)定游離血藥濃度，與體內(nèi)真實(shí)的游離藥物濃度的吻合度常常受到影響應(yīng)用：色譜法直接進(jìn)樣測(cè)定，是切實(shí)可行的常規(guī)監(jiān)測(cè)手段。三、藥物活性代謝物的測(cè)定1.一般原型藥物的活性代謝產(chǎn)物濃度較低，其臨床療效顯得并不重要。當(dāng)活性代謝物濃度較高，活性較強(qiáng)或腎功能有障礙時(shí)，對(duì)其監(jiān)測(cè)應(yīng)引起足夠的重視。2.監(jiān)測(cè)活性代謝物的臨床意義：有利于深入指導(dǎo)臨床合理用藥；有助于解釋原型藥物血藥濃度與藥效間的不平行現(xiàn)象；解釋藥物預(yù)防、治療期間出現(xiàn)的非原型藥物所具有的不良反應(yīng)。3.選擇測(cè)定活性代謝物方法時(shí)要充分考慮原型藥物和活性代謝物同時(shí)存在的專屬性。四、對(duì)映體藥物的測(cè)定立體異構(gòu)體藥物的藥代動(dòng)力學(xué)特性和藥效學(xué)存在差異，因此未來(lái)體內(nèi)藥物分析的研究對(duì)象將側(cè)重于對(duì)映體藥物的測(cè)定。（一）對(duì)映體藥物體內(nèi)過(guò)程的立體選擇性立體異構(gòu)體藥物在體內(nèi)的吸收、分布、生物轉(zhuǎn)化和排泄都存在立體選擇性1.吸收過(guò)程－主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程存在立體選擇性，對(duì)映體在吸收特性上存在顯著差異：抗腫瘤藥物甲胺喋呤在小腸對(duì)L-甲胺喋呤的吸收為主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，而對(duì)D-甲胺喋呤卻是被打擴(kuò)散過(guò)程。2.分布過(guò)程－對(duì)映體藥物與蛋白的結(jié)合存在立體選擇性：苯巴比妥的對(duì)映體在血中游離濃度的比率（S-對(duì)映體：R－對(duì)映體）為26.5：36.6。3.代謝與排泄過(guò)程－對(duì)映體藥物II相代謝產(chǎn)物和腎清除存在立體選擇性－如沙丁胺醇II相反應(yīng)為磺酸結(jié)合代謝，有活性的（－）－沙丁胺醇與無(wú)藥理活性的（＋）－沙丁胺醇在體內(nèi)的清除率相差11倍之多；老年病人體內(nèi)酮洛芬葡萄糖醛酸結(jié)合物中R－異構(gòu)體的排泄優(yōu)于S－異構(gòu)體（二）對(duì)映體藥物監(jiān)測(cè)的測(cè)定方法1.HPLC－化學(xué)鍵合手性固定相，流動(dòng)相中含手性復(fù)合試劑、手性試劑衍生化，目前應(yīng)用最廣，技術(shù)也最成熟2.放射免疫測(cè)定法－采用化學(xué)立體選擇性的抗血清和高度光學(xué)純的放射性配體組成試劑盒3.毛細(xì)管電泳（HPCE）－發(fā)展中的新技術(shù)，目前已有用該法研究氯胺酮對(duì)映體血藥濃度測(cè)定的報(bào)道。五、內(nèi)源性活性化合物的測(cè)定內(nèi)源性活性化合物往往參與機(jī)體重要的生理活動(dòng)，其濃度的異常變化也與某些疾病的發(fā)病機(jī)理密切相關(guān)－為疾病的診斷和治療提供依據(jù)。葉酸、B12－貧血血清多胺－II型糖尿病5－羥多胺－抑郁癥1.色譜法－特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、具有分離和定量雙重功能2.LC-MS、GC-MS聯(lián)用－特異性強(qiáng)、靈敏度高3.免疫分析法－特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速，適宜批量自動(dòng)化檢測(cè)本章小結(jié)

掌握與本學(xué)科相關(guān)的基礎(chǔ)理論知識(shí)1.藥物的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程（吸收、分布、代謝、排泄）及其影響因素，代謝的反應(yīng)類型2.藥物在體內(nèi)的不同形式（游離型、結(jié)合型、代謝物）與藥效的關(guān)系3.血藥濃度測(cè)定的臨床意義及測(cè)定的種類（游離型、游離型和結(jié)合型藥物總濃度、活性代謝物、對(duì)映體藥物、內(nèi)源性物質(zhì)）4.與血藥濃度相關(guān)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)5.治療藥物監(jiān)測(cè)第三章

生物樣品與樣品制備內(nèi)容提要第一節(jié)生物樣品的種類、采集、制備與貯存第二節(jié)生物樣品的預(yù)處理與制備第一節(jié)

生物樣品的種類、采集、

制備與貯存一、生物樣品的種類、采集和制備血液（血漿、血清）－體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關(guān)系，為最常用的生物樣本尿液－用于藥物劑量回收、尿清除率、生物利用度、內(nèi)源性活性物質(zhì)、藥物代謝分型及代謝物等研究測(cè)定唾液－用于某些S/P較為恒定的藥物的測(cè)定。毛發(fā)－可用于藥物濫用監(jiān)測(cè)及微量元素測(cè)定肝、胃、腎、肺、腦等臟器組織－動(dòng)物試驗(yàn)研究藥物吸收、分布狀態(tài)及服藥過(guò)量中毒死亡。（一）血液（blood）血液的基本組成和血量

組成：血漿+血細(xì)胞

血量（bloodvolume）：人體內(nèi)血漿和血細(xì)胞的總和，約占人體重量的7~8%。例：體重為60kg的人，血量約5L。循環(huán)血量（circulationgblood）：

大部分在心血管中迅速流動(dòng)。

貯備血量（reservoirblood）：

“滯留”肝、肺、腹腔靜脈及皮下動(dòng)脈，流動(dòng)較慢。血漿的化學(xué)成分

基本成分:晶體物質(zhì)溶液（多種電解質(zhì)、小分子有機(jī)物、氣體），易透過(guò)毛細(xì)血管與組織液交換，含量與組織液基本相同。

血漿蛋白：血漿中各種蛋白質(zhì)的總稱，不能透過(guò)毛細(xì)血管，用鹽析法可分為三類：白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原。

血漿與組織液的區(qū)別：主要是蛋白質(zhì)含量不同（一）血液（blood）因血液中藥物濃度可以較好地體現(xiàn)藥物濃度和治療作用之間的關(guān)系，是最為常用的生物樣品－分為全血、血漿和血清。1．血樣的采集一般用注射器直接采集靜脈血，每次1～5ml，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，采血量不宜超過(guò)動(dòng)物總血量的十分之一。2．血樣的制備測(cè)定血中藥物的濃度，通常是指測(cè)定血漿或血清中的藥物濃度，尤其是血漿，并非指全血。

血樣的應(yīng)用：藥物動(dòng)力學(xué)；生物利用度；臨床治療藥物濃度監(jiān)測(cè)

血漿的制備：采集后的靜脈血液置含有抗凝劑的試管中，混合后，在2500～3000rpm離心5～10min使與血球分離，所得淡黃色上清液即為血漿（plasma），量約為全血的一半。

抗凝劑：最常用的是肝素（heparin），其它抗凝劑EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽等。

血清的制備：采集的靜脈血液置試管中，于37℃或室溫放置30min～1h。血液凝固后，用細(xì)竹棒或玻璃棒輕輕剝?nèi)ピ嚬鼙谏系难?，再?500～3000rpm離心5～10min，上層淡黃色液體即為血清（serum）

血漿與血清的區(qū)別：血清比血漿只是少了一種纖維蛋白原，其濃度一致，血漿比血清的分離快，而且制取量約為全血的50％～60％（血清為全血的20％～40％），多數(shù)用血漿進(jìn)行分析。若血漿中含有的抗凝劑對(duì)藥物濃度測(cè)定有影響時(shí)，則應(yīng)使用血清樣品。血漿與血清的比較不同之處：1.制備方法2.制取量3.纖維蛋白4.分離速度相同之處：1.C血漿＝C血清2.分析方法相同3.測(cè)得的都是總濃度

全血的制備：將采集的血液置含有抗凝劑的試管中，但不經(jīng)離心操作，保持血漿和血細(xì)胞均相狀態(tài)，即為“全血”（wholeblood）。全血除含有血漿外還有一些有形物質(zhì)（紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板），凈化較血漿和血清麻煩。血漿濃度低血漿和紅細(xì)胞中分配比不是常數(shù)。如三環(huán)類降壓藥在個(gè)別病人體內(nèi)血漿和紅血球中的分配比不是一個(gè)常數(shù)，故宜采用全血樣品進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)的研究。血樣的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：較好地體現(xiàn)藥物濃度與治療作用之間的關(guān)系缺點(diǎn)：屬于損傷性取樣方式取樣量有限抽血需要專業(yè)人士（二）唾液（saliva）來(lái)源：三對(duì)唾液腺（腮腺、頜下腺、舌下腺）2.性質(zhì)、成分：

中性、無(wú)色、無(wú)味

水分：99%

有機(jī)物：粘蛋白、球蛋白、淀粉酶、溶菌酶

pH范圍為6.2～7.4采集在漱口后15min，安靜狀態(tài)下采集口腔內(nèi)自然流出的唾液；也可在刺激下快速采樣（需注意干擾）

物理法：口嚼石蠟片，聚四氟乙烯塊或紗布球。

化學(xué)法：將檸檬酸或維生素C等置于舌尖，棄取初始部分后采集。化學(xué)法的優(yōu)點(diǎn)：縮短采樣時(shí)間減少唾液pH波動(dòng)（pH≈7.0）S/P個(gè)體差異小。

維生素C刺激法采集唾液測(cè)不到安定。一些藥物的唾液藥物濃度（S）與血漿游離藥物濃度（P）密切相關(guān)，可使用唾液樣品。唾液樣品的應(yīng)用：STDM－如苯妥英鈉的CS/CP比值恒定、個(gè)體差異小，可用于癲癇病人的TDM；藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定－用GC-MS分析測(cè)定可卡因，血漿或唾液中的t1/2分別為3.8h和7.9h。唾液特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：非傷害性方法采集，病人易接受；采集不受時(shí)間、地點(diǎn)限制，易收集；CS/CP比值較恒定時(shí)，可代替血樣進(jìn)行TDM及藥代動(dòng)力學(xué)研究缺點(diǎn)：適用藥物較少取樣量變化較大（三）尿液（urine）尿液用于藥物劑量回收、藥物尿清除率、生物利用度的研究，預(yù)測(cè)藥物代謝過(guò)程、類型。體內(nèi)藥物清除主要是通過(guò)尿液排出，藥物以原形、I相及II相代謝物等多種形式排出性狀－淡黃色或黃褐色，相對(duì)密度1.105~1.020,pH4.8~8.0成分－水、含氮化合物、鹽類等微生物－防腐劑尿液的采集樣本來(lái)源：自然排尿，成人一日排尿量為1～5L（隨時(shí)尿、晨尿、白天尿、夜間尿及時(shí)間尿）。

樣本采集：一般采集時(shí)間尿（規(guī)定時(shí)間內(nèi)采集尿液體積和排入尿中的藥物總量）尿樣的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：屬于非損傷性取樣方式藥物濃度高收集方便缺點(diǎn)：濃度變化大，與血藥濃度相關(guān)性差不易采集完全及保存腎功能不良者及嬰兒不宜采用（四）器官組織（tissue）用于動(dòng)物試驗(yàn)藥物動(dòng)力學(xué)研究及臨床服用藥物引起中毒死亡。器官組織均勻化處理的一般方法有：1．勻漿化法加入一定量的水和緩沖液，在刀片式勻漿機(jī)中勻漿，使被測(cè)藥物溶解，取上清液供萃取用。特點(diǎn)－方法簡(jiǎn)單、但回收率低。2．沉淀蛋白法在組織勻漿中加入蛋白沉淀劑，沉淀蛋白質(zhì)后取上清液供萃取用，操作簡(jiǎn)單、但回收率低，較為常用。3．酸水解或堿水解組織勻漿中加入適量的酸或堿，置水浴上加熱，待組織液化后，過(guò)濾或離心，取上清液供萃取用。適用于對(duì)熱穩(wěn)定的藥物，應(yīng)用較少。4.酶水解法組織勻漿中加入適量的酶和緩沖液，置水浴上水解一定時(shí)間，待組織液化后，過(guò)濾或離心，取上清液供萃取用最常用的酶－枯草菌溶酶（一種細(xì)菌性堿性蛋白分解酶，可在pH7.0～11.0較寬的范圍內(nèi)使蛋白的肽鍵降解，在50～60℃具有最大活力）優(yōu)點(diǎn)：酶解法操作簡(jiǎn)便；避免藥物在酸及高溫下降解；對(duì)與蛋白結(jié)合緊密的藥物，可顯著改善回收率；可用有機(jī)溶劑直接萃取酶解液而無(wú)乳化現(xiàn)象生成缺點(diǎn)：不適用于在堿性條件下易水解的藥物。（五）頭發(fā)（hair）應(yīng)用－體內(nèi)微量元素含量測(cè)定－用于用藥史的估計(jì)－臨床用藥和藥物非法濫用的區(qū)別、毒性藥物檢測(cè)。頭發(fā)檢測(cè)的性質(zhì)：廣譜性（代謝產(chǎn)物及微量元素的排泄器官）積累性（長(zhǎng)期富集各代謝產(chǎn)物）穩(wěn)定性（水分含量少）依時(shí)性（反映某時(shí)期藥物的積累）相關(guān)性（與人體內(nèi)部器官相關(guān)）指紋性（環(huán)境、飲食等）頭發(fā)的采集與洗滌

采集：代表性和同一性;采集枕部發(fā)樣（微量元素在前額部位的頭發(fā)中含量最低，枕部含量最高）。

洗滌：除去外源性污染物。毛發(fā)樣品的制備1．毛發(fā)中藥物的常用提取方法直接用甲醇提取；酸水解（0.1mol/l）堿水解（1mol/l氫氧化鈉）；酶水解（β-葡糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶）。2．有機(jī)破壞法優(yōu)點(diǎn)：取樣方便、可重復(fù)取樣；通過(guò)測(cè)定某些特定的代謝物將藥物濫用和臨床用藥相區(qū)別；能獲數(shù)月至數(shù)年的長(zhǎng)期用藥信息。缺點(diǎn)：預(yù)處理繁雜、干擾多；分析對(duì)象的含量低、需精密儀器。1.屬于非均勻生物樣品的是（）A.肝B.血液C.唾液D.尿液E.頭發(fā)2.體內(nèi)藥物分析最常采用的樣本是什么（）A.血清B.血漿C.尿液D.唾液E.全血3.關(guān)于血漿與血清，下面說(shuō)法正確的有（）A.血清比血漿少了纖維蛋白原B.血漿比血清少了纖維蛋白原C.血清制取量為全血的50％～60％D.濃度不同E.血漿中含有抗凝劑4.關(guān)于全血，下面說(shuō)法正確的有（）A.凈化較血漿與血清麻煩B.不經(jīng)離心操作C.加了抗凝劑D.血漿藥物濃度低時(shí)宜采用全血E.藥物在血漿和紅血球中的分配比不是一個(gè)常數(shù)時(shí)宜采用全血5.尿液按時(shí)間可劃分為下列幾種，進(jìn)行尿藥濃度測(cè)定時(shí)，采用哪種作為樣品（）A.隨時(shí)尿B.晨尿C.白天尿D.夜間尿E.時(shí)間尿6.在什么情況下，可以使用唾液樣品進(jìn)行臨床藥物監(jiān)測(cè)（）A.唾液藥物濃度（S）與血漿游離藥物濃度（P）密切相關(guān)的藥物，B.蛋白結(jié)合率較高的藥物C.蛋白結(jié)合率較低的藥物D.離解度隨pH變化的藥物E.癲癇病人7.器官組織均勻化處理的一般方法有：（）A.勻漿化法B.沉淀蛋白法C.酸水解或堿水解D.酶水解法E.有機(jī)破壞法8.頭發(fā)檢測(cè)具有哪些性質(zhì)（）A.廣譜性B.積累性C.穩(wěn)定性D.依時(shí)性E.相關(guān)性和指紋性二、生物樣品的貯存與處理冷藏：冰箱（4℃）中短期保存（1～2d）冷凍：冷柜（-20℃）或低溫冷柜（-80℃）中長(zhǎng)期保存。冷藏或冷凍時(shí)限經(jīng)穩(wěn)定性考察后確定。生物樣品的儲(chǔ)存血樣采集后及時(shí)分離血漿和血清（＜2h）分離后，置硬質(zhì)玻璃試管中完全密塞后保存。若不預(yù)先分離，血凝后冰凍保存，則因冰凍有時(shí)易引起細(xì)胞溶解，會(huì)阻礙血漿或血清的分離。尿樣采集后立即測(cè)定，若不能立即測(cè)定，加入防腐劑后保存。常用防腐劑：甲苯、二甲苯、氯仿、醋酸、濃鹽酸等。甲苯在尿液表面形成薄膜，醋酸改變尿液酸堿性抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。保存時(shí)間為24～36h（4℃）或長(zhǎng)期（-20℃）唾液為阻止酶催化生成粘蛋白，應(yīng)在4℃以下保存；保存過(guò)程中放出二氧化碳而使pH升高，測(cè)定唾液pH時(shí)應(yīng)在取樣的當(dāng)時(shí)為好；冷凍保存唾液時(shí)，解凍后有必要將容器內(nèi)唾液充分?jǐn)噭蚝笤儆茫駝t測(cè)定結(jié)果會(huì)產(chǎn)生誤差。注意事項(xiàng)：1.冷凍的樣品測(cè)定時(shí)，需臨時(shí)解凍。解凍后的樣品應(yīng)一次性測(cè)定完畢，不應(yīng)反復(fù)凍融。2.如果采集的樣品不能一次性測(cè)定，則應(yīng)以小體積分裝貯存，每次按計(jì)劃取一定數(shù)量進(jìn)行測(cè)定。第二節(jié)

生物樣品的預(yù)處理與制備

樣品預(yù)處理技術(shù)：分離、純化、富集或化學(xué)衍生化等，為藥物的最終測(cè)定創(chuàng)造良好的條件。

樣品的預(yù)處理是體內(nèi)藥物分析中極為重要的環(huán)節(jié)；也是分析中最困難、最繁雜的工作。

對(duì)于生物樣品的預(yù)處理很難規(guī)定固定的程序和方式，必須結(jié)合測(cè)定實(shí)際和要求，采取適當(dāng)?shù)姆椒ê图夹g(shù)。一、生物樣品預(yù)處理的目的（一）使藥物從綴合物及結(jié)合物中釋放－測(cè)定藥物的總濃度藥物在體內(nèi)存在形式：游離型藥物代謝物藥物或代謝物與蛋白結(jié)合物藥物或代謝物與內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合的綴合物預(yù)處理使藥物或代謝物從“結(jié)合物”或“綴合物”中釋放，測(cè)定藥物或代謝物的總濃度。（二）生物樣品介質(zhì)組成復(fù)雜、干擾多，而藥物組分是微量的，預(yù)處理可使之純化、富集如：

血清：高分子的蛋白質(zhì)、低分子的糖、脂肪、尿素等有機(jī)物，鈉鹽、鉀鹽、氯離子等無(wú)機(jī)物；

尿液：尿素、肌酸、尿囊素、氨、鈉鹽、鉀鹽、氯離子等；藥物含量低，一般為μg或ng水平。（三）提高檢測(cè)靈敏度－適應(yīng)和符合測(cè)定方法要求的靈敏度預(yù)處理的目的：降低背景噪音；提高靈敏度特異性強(qiáng)、靈敏度高的分析方法－預(yù)處理簡(jiǎn)單不具備分離功能的方法（光譜法）－預(yù)處理十分重要。

（四）防止分析儀器的污染和劣化－提高分析儀器的耐受程度，改善分析結(jié)果。

生物樣品基質(zhì)中脂肪、蛋白質(zhì)、不溶性顆粒污染分析儀器；根據(jù)分析儀器的耐受程度，選擇不同的預(yù)處理方法。例：高效液相色譜法預(yù)處理－改善分析結(jié)果的準(zhǔn)確度與精密度－延長(zhǎng)色譜柱的壽命（除去固體雜質(zhì)）－改善選擇性（排除生物基質(zhì)的干擾）－改善組分可測(cè)定性（被測(cè)組分的富集）－改善組分色譜行為（化學(xué)衍生化）二、樣品制備時(shí)應(yīng)考慮的問(wèn)題1．被測(cè)組分的理化性質(zhì)、存在形式、濃度范圍2．測(cè)定目的3．生物樣品種類和基質(zhì)的干擾類型4．樣品的化學(xué)組成5．藥物的蛋白結(jié)合率6．被測(cè)組分在預(yù)處理過(guò)程中的穩(wěn)定性7．樣品在收集、儲(chǔ)存和預(yù)處理中容器的污染8．保證必要的專屬性、靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度的前提下預(yù)處理過(guò)程盡量簡(jiǎn)單1.藥物的理化性質(zhì)和存在形式酸堿性（pKa）溶解性－提取性質(zhì)揮發(fā)性－揮發(fā)損失及氣相色譜法的應(yīng)用光譜特性－分析儀器的選擇官能團(tuán)性質(zhì)－化學(xué)衍生化和檢測(cè)器的應(yīng)用化學(xué)穩(wěn)定性－處理?xiàng)l件的選擇存在形式及血漿蛋白結(jié)合率－預(yù)處理方法2.待測(cè)藥物的濃度范圍不同藥物在體內(nèi)的濃度相差極為懸殊如：地高辛治療血藥濃度為1～2ng/ml水楊酸鹽治療血藥濃度為20～100ug/ml

濃度大－預(yù)處理要求稍低濃度低－樣品制備要求高3.藥物測(cè)定的目的目的不同，樣品預(yù)處理要求就不同：例如：

急性中毒病例：要求快速鑒定所懷疑的藥物，對(duì)樣品預(yù)處理的要求可以粗放些。

測(cè)定藥物及代謝物：要求使代謝物從綴合物中釋放出來(lái)并在不同pH介質(zhì)中分離獲得酸性、中性或堿性代謝物，對(duì)樣品預(yù)處理的要求全面、細(xì)致。4.選用的生物樣品類型樣品類型決定預(yù)處理方法：

血漿、血清－除去蛋白質(zhì)

唾液－離心沉淀除去粘蛋白

尿液－采用酸或酶法使綴合物水解

頭發(fā)－有機(jī)破壞后測(cè)定微量元素5.樣品預(yù)處理與分析技術(shù)的關(guān)系（1）分析方法特點(diǎn)（是否專屬、是否具有分離能力）（2）檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)雜質(zhì)污染的耐受程度決定樣品預(yù)處理和需要凈化的程度。三、生物樣品的預(yù)處理與制備技術(shù)生物樣品的預(yù)處理大致可分為以下5類：1.有機(jī)破壞法2.去除蛋白法3.溶劑萃取法4.綴合物的水解5.化學(xué)衍生化法（一）有機(jī)破壞法應(yīng)用：微量元素測(cè)定方法：1.濕法破壞2.干法破壞3.氧瓶燃燒法1.濕法破壞常用試劑：硝酸或硝酸-高氯酸特點(diǎn)：破壞能力強(qiáng)，反應(yīng)激烈，無(wú)機(jī)金屬離子為高價(jià)態(tài)應(yīng)用：適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞缺點(diǎn)：含氮雜環(huán)藥物的破壞不夠完全注意：切勿蒸干、以免爆炸樣品用量：金屬元素量10～100ug，血樣10～15ml、尿樣50ml2.干法破壞高溫爐高溫破壞

應(yīng)用：適合人發(fā)樣品的破壞3.氧瓶燃燒（Oxygenflaskcombustion）特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、快速、設(shè)備簡(jiǎn)單，應(yīng)用：血漿、人發(fā)中鹵素、硫、硒等取樣方法：血漿：血漿1ml分次點(diǎn)在無(wú)灰濾紙上→60℃烘干→按規(guī)定折疊后固定人發(fā)：洗凈、干燥（60～80℃）→剪碎→稱取0.1～0.3g置無(wú)灰濾紙中心→按規(guī)定折疊后固定（二）去除蛋白質(zhì)1.可使結(jié)合型藥物釋放2.預(yù)防提取時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)泡，減少乳化的形成3.可以保護(hù)儀器性能，延長(zhǎng)使用期限去除蛋白質(zhì)的方法：1.加入與水相混溶的有機(jī)溶劑2.加入中性鹽3.加入強(qiáng)酸4.加入重金屬鹽5.超濾法6.酶水解法7.加熱法1.加入與水相混溶的有機(jī)溶劑原理：使蛋白質(zhì)的分子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而使蛋白質(zhì)凝聚。常用有機(jī)溶劑：乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃試劑用量：血樣與溶劑體積比為1︰1～3操作：有機(jī)溶劑與血漿或血清按一定比例混合后離心分離，取上清液作為樣品。注意采用超速離心（12000rpm）分離1～2min2.加入中性鹽原理：中性鹽使蛋白質(zhì)脫水而沉淀常用中性鹽：飽和硫酸銨、硫酸鈉、鎂鹽、磷酸鹽及枸櫞酸鹽等試劑用量：血清與飽和硫酸銨比例為1︰2操作：血清與中性鹽按一定比例混合后超速離心（10000rpm）分離1～2min，取上清液作為樣品。上清液pH7.0～7.7。3.加入強(qiáng)酸原理：強(qiáng)酸與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽而沉淀。常用：10％三氯醋酸、6％高氯酸、5％偏磷酸等。操作：血清與強(qiáng)酸的比例為1：0.6混合，離心（10000rpm）1～2min，即可。上清液pH0～4，不適于酸性下分解的藥物。過(guò)量酸的排除：過(guò)量三氯醋酸可通過(guò)煮沸或乙醚提取除去；高氯酸、偏磷酸等可用碳酸鉀、醋酸鉀或氫氧化鈉等中和后加乙醇使產(chǎn)生高氯酸鉀（鈉）沉淀被除去。4.加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑原理：當(dāng)溶液pH高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子中帶陰電荷的羧基與金屬陽(yáng)離子形成不溶性鹽沉淀。常用沉淀劑：CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH血清與沉淀劑比例：1︰1～30分離：高速（10000rpm）離心5.超濾法性質(zhì)：以多孔性半透膜（超濾膜）作為分離介質(zhì)的一種膜分離技術(shù)。特點(diǎn)：無(wú)需加熱；無(wú)需添加化學(xué)試劑；無(wú)相變化；無(wú)破壞性；樣品量少；簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果穩(wěn)定可靠應(yīng)用：游離藥物首選方法，尤其適合TDM操作：分子量截留值在5萬(wàn)左右的超濾膜過(guò)濾可將分子量大的血漿蛋白以及結(jié)合了藥物的血漿蛋白分離。6.酶水解法加入適量的酶和緩沖液，置水浴上水解一段時(shí)間，過(guò)濾或離心，取上清液供萃取用。優(yōu)點(diǎn)：①平衡條件下進(jìn)行，可避免反應(yīng)和降解②可改善對(duì)蛋白結(jié)合率強(qiáng)的藥物的回收率③不產(chǎn)生乳化7.加熱法測(cè)定對(duì)熱穩(wěn)定性好的組分時(shí)，可采用加熱的方法將一些熱變性蛋白沉淀，加熱溫度視欲測(cè)組分的熱穩(wěn)定性而定，通?？杉訜岬?0℃；蛋白沉淀后可用離心或過(guò)濾除去。優(yōu)點(diǎn)：方法最簡(jiǎn)單；缺點(diǎn)：只能除去熱變性蛋白。（三）分離、純化與濃集在生物樣品的制備過(guò)程中，進(jìn)行選擇性分離、純化與濃集

分離－消除內(nèi)源性物質(zhì)、代謝物或其它共存藥物的干擾；

純化與濃集－提高被測(cè)藥物的靈敏度樣品經(jīng)分離、純化與濃集與測(cè)定方法相結(jié)合，達(dá)到專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性好。生物樣品的分離、純化方法液－液萃取法（傳統(tǒng)的方法）固相萃取法（液－固萃取法）自動(dòng)化固相萃取技術(shù)固相微萃取膜萃取技術(shù)微透析技術(shù)超臨界流體萃取法1.液－液萃取法（Liquid-liquidextraction,LLE）大多數(shù)藥物為脂溶性，在有機(jī)溶劑中溶解度大于水中，大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極性的水溶性物質(zhì)，采用有機(jī)溶劑萃取法。

溶劑的極性：根據(jù)相似相溶原理選擇，實(shí)際萃取時(shí)通常會(huì)加入第二種溶劑（醇類）調(diào)整極性，提高選擇性。

溶劑的沸點(diǎn)：沸點(diǎn)低、易揮散，濃集；

溶劑的毒性：乙酸乙酯為最理想的溶劑

溶劑與水的互溶性：乙醚（1.2％水，用無(wú)水硫酸鈉脫水）（1）溶劑選擇（2）有機(jī)溶劑萃取次數(shù)：通常為1次，必要時(shí)2～3次；（3）有機(jī)溶劑用量：與水體積比通常為1︰1或2︰1