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文檔簡介
熒光定量PCR
realtime-PCR熒光定量PCR原理及操作步驟定量PCR反應(yīng)體系
①actin③achi⑤aly⑦vlg⑨stat②actin④achi⑥aly⑧vlg⑩stat模板cDNA4ulTagmixture10ul引物10.5ul引物20.5ulH205ul1♀模板2♂模板①③⑤⑦⑨443.45ng/ul686.75ng/ul②④⑥⑧⑩17.738ng/ul26.47ng/ul熒光定量PCR原理及操作步驟定量與常規(guī)PCR的差別常規(guī)PCR技術(shù)：對PCR擴增反應(yīng)的終產(chǎn)物進行定量及定性分析定量PCR技術(shù)：通過對PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測從而實現(xiàn)對起始模板定量及定性的分析三個關(guān)鍵詞：實時，定量，熒光熒光定量PCR原理及操作步驟PCR分四個階段熒光定量PCR原理及操作步驟如何定量？Ct值的概念Ct值的定義是PCR擴增過程中，熒光信號開始由本底進入指數(shù)增長階段的閾值所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。熒光定量PCR原理及操作步驟定量原理
確定初始模板的濃度初始DNA量越多,熒光達到某一值（域值）時所需要的循環(huán)數(shù)越少Log濃度與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，根據(jù)樣品擴增達到域值的循環(huán)數(shù)就可計算出樣品中所含的模板量熒光定量PCR原理及操作步驟熒光定量PCR原理及操作步驟起點定量與終點定量熒光定量PCR原理及操作步驟熒光化學(xué)SYBRGreen1
TaqMan熒光定量PCR原理及操作步驟TaqMan熒光定量PCR原理及操作步驟SYBRGreenI工作原理
。SYBRGreen1結(jié)合到雙鏈DNA的小溝部位SYBRGreen1染料只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光GTTTGGCCCCCCCAAAGGGACTTGATAGCATCGTAAGTTTTTTGGGGCCCCCCCCAAAAATACCGGGGTTACGAACGGTAAT未結(jié)合SYBRGreen1dye變性:無熒光信號熒光定量PCR原理及操作步驟SYBRGreenI應(yīng)用范圍起始模板濃度定量融解曲線分析---可區(qū)分單一產(chǎn)物、變異產(chǎn)物、多種產(chǎn)物和（或）引物二聚體基因型分析熒光定量PCR原理及操作步驟SYBRGreenI優(yōu)點SYBRGreenI缺點熒光定量PCR原理及操作步驟熒光定量PCR原理及操作步驟PCR程序指南熒光定量PCR原理及操作步驟UNG酶使用原理熒光定量PCR原理及操作步驟金牌Tag酶活性熒光定量PCR原理及操作步驟參比熒光：管家熒光ROX熒光定量PCR原理及操作步驟ROX校正效果熒光定量PCR原理及操作步驟96孔板設(shè)置舉例熒光定量PCR原
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