細胞內(nèi)表達海洋來源的紫海膽、鱸魚凝集素基因抗腫瘤的機制研究的開題報告

細胞內(nèi)表達海洋來源的紫海膽、鱸魚凝集素基因抗腫瘤的機制研究的開題報告一、研究背景與意義近年來，基因治療已成為治療腫瘤的重要手段之一。而注射表達抗腫瘤蛋白的細胞進入體內(nèi)，可有效地抑制腫瘤細胞的生長和擴散，成為目前最新的治療技術(shù)之一。同時，海洋生物中含有大量生物活性物質(zhì)，其中不乏可能具有抗腫瘤活性的物質(zhì)。因而，研究海洋生物中具有抗腫瘤活性的生物活性物質(zhì)及其抗腫瘤機制研究，具有重要的意義。紫海膽和鱸魚凝集素是兩個來自海洋的蛋白，并已被證實具有潛在的抗腫瘤活性。然而，它們的抗腫瘤分子機制還不清楚。因此，本研究旨在通過表達紫海膽和鱸魚凝集素基因，探討其抗腫瘤機制及其對人體的作用。二、研究內(nèi)容1.構(gòu)建表達紫海膽和鱸魚凝集素的載體以表達型載體pcDNA3.1為基礎(chǔ)，將紫海膽和鱸魚凝集素的基因序列進行克隆，并構(gòu)建表達載體。2.表達紫海膽和鱸魚凝集素轉(zhuǎn)染表達載體進入腫瘤細胞株，利用Westernblot和ELISA進行蛋白表達和檢測，確定表達效果。3.研究紫海膽和鱸魚凝集素的抗腫瘤機制通過MTT法、流式細胞術(shù)和顯微鏡技術(shù)等研究，探討紫海膽和鱸魚凝集素的抗腫瘤機制。三、研究預(yù)期結(jié)果1.成功構(gòu)建表達紫海膽和鱸魚凝集素的載體。2.成功表達出紫海膽和鱸魚凝集素。3.發(fā)現(xiàn)紫海膽和鱸魚凝集素具有抑制腫瘤細胞生長的能力。4.初步探討紫海膽和鱸魚凝集素的抗腫瘤分子機制，為后續(xù)研究提供依據(jù)。四、研究方案1.提取紫海膽和鱸魚的總RNA。2.根據(jù)已知序列和已有文獻設(shè)計紫海膽和鱸魚凝集素的引物，進行PCR。3.將PCR產(chǎn)物將intopcDNA3.1載體中。4.將載體構(gòu)建進行限制性酶切和測序確認。5.將載體轉(zhuǎn)染入人體腫瘤細胞株中。6.利用Westernblot和ELISA分別進行蛋白表達效果測定。7.利用MTT法檢測細胞的增殖情況。8.利用流式細胞術(shù)并結(jié)合分子生物學(xué)手段和細胞生物學(xué)方法研究質(zhì)粒對細胞的作用及相應(yīng)細胞信號通路的改變，探究抗腫瘤的分子機制。五、研究進度計劃第一周：實驗組建、相關(guān)文獻調(diào)研第二周：提取相關(guān)RNA第三周：PCR反應(yīng)、構(gòu)造載體第四周：轉(zhuǎn)染細胞株、篩選轉(zhuǎn)染菌株第五周：Westernblot和ELISA進行表達結(jié)果的測定第六周：細胞增殖情況的檢測第七周：細胞信號通路的研究第八周：結(jié)果分析和總結(jié)六、研究經(jīng)費本研究經(jīng)費共計10萬元。其中，實驗材料費用占70％，人工經(jīng)費占20％，設(shè)備維護費占10％。七、研究成果本研究成果將發(fā)表在國內(nèi)外重要的