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文檔簡(jiǎn)介

ICS

CCS

B

DB1308

技術(shù)規(guī)程2023-02-25

發(fā)布2023-03-01

實(shí)施承德市市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)

??本文件按照

第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位:承德市蔬菜技術(shù)推廣站、圍場(chǎng)滿(mǎn)族蒙古族自治縣蔬菜環(huán)保站、興隆縣工商業(yè)聯(lián)合I

培養(yǎng)用水符合

中規(guī)定的三級(jí)水,除非另有規(guī)定,在培養(yǎng)過(guò)程中僅使用分析純?cè)噭?,?/p>

萘乙酸;

g)還原型谷胱甘肽,純度≥99%;L-谷氨酰胺,純度≥99%; L-絲氨酸,純度≥99%;一水嗎啉乙磺酸,純度>99%; 乙醇溶液,75%; 次氯酸鈉溶液,5%;m)

硝酸鈣溶液,25%;秋水仙堿溶液,0.3%;o)

g、煙酸

g、維生素

g、維生素

g、葉酸

D-生物素

g)

流式細(xì)胞儀。

大燒杯:1L;

g)

mm;

B5

g

g

L,

B5

g

L,將培養(yǎng)基

g

L,將培養(yǎng)基

μm

μm

試管、研缽、古式漏

mm~3

mm

先將沖洗干凈的花蕾用乙醇表面消毒

s,期間搖動(dòng)燒杯,燒杯間不要碰撞。然后使用次氯酸鈉深度消毒

使用無(wú)菌水清洗

min,期間搖動(dòng)燒杯,充分清洗,此步驟重復(fù)操作3次,燒杯間不要碰撞,完成清洗

將消毒過(guò)的花蕾放于研缽中,倒入B5液體培養(yǎng)基,液面高出花蕾即可,輕敲研缽,使所有花蕾破裂,花粉釋放出即可,加入B5液體培養(yǎng)基定容到

將研磨好的

花蕾液倒入古式漏斗,經(jīng)400目紗網(wǎng)過(guò)濾后,移至

離心管,使用離心機(jī)

min,倒掉上清液,倒入

B5液體培養(yǎng)基,將沉淀?yè)u起,定容到10

ml,經(jīng)3次反復(fù)

在純凈的花粉母細(xì)胞液中加入

改良1/2NLN培養(yǎng)基,將沉淀?yè)u起垂懸,定容到

mm

改良1/2NLN培養(yǎng)基稀釋?zhuān)⑻砑踊钚蕴繎腋∫?/p>

在超凈工作臺(tái)環(huán)境下,用眼科鑷子將子葉型胚接種至B5固體培養(yǎng)基上。接種后在25℃自然光下培

在超凈工作臺(tái)環(huán)境下,取出幼苗,手術(shù)刀去除葉片和根區(qū),長(zhǎng)柄鑷子將剩余組織接種到新的B5固

cm,萌發(fā)

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