主題(一)　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與單克隆抗體制備

專(zhuān)題二十五

動(dòng)物細(xì)胞工程主題(一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與單克隆抗體制備[概念理解·微點(diǎn)判斷]1.判斷下列對(duì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件與過(guò)程敘述的正誤(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基中的成分不同。

()(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)過(guò)程中都要用到胰蛋白酶。

()(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用是刺激細(xì)胞呼吸。

()√××(4)通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得細(xì)胞株或細(xì)胞系，表明了動(dòng)物體細(xì)胞具有全能性。

()(5)細(xì)胞株一般沒(méi)有恒定的染色體組型，遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變。

()(6)細(xì)胞系在連續(xù)傳代過(guò)程中遺傳性狀始終保持均一。

()×××2.判斷下列對(duì)單克隆抗體的制備敘述的正誤(1)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能無(wú)限繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一的抗體。

()(2)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，誘導(dǎo)融合的方法也完全相同。

()(3)骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體。

()(4)人—鼠雜交細(xì)胞通常會(huì)丟失人的染色體，因此可以進(jìn)行鼠類(lèi)的基因定位。

()√×××(5)誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后，發(fā)生融合的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞。

()(6)單克隆抗體制備過(guò)程中，在完成細(xì)胞融合后，第一次篩選的目的是篩選出針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體為陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞。

()××3.判斷有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞核移植與動(dòng)物克隆敘述的正誤(1)胚胎干細(xì)胞核移植難度明顯高于體細(xì)胞核移植。

()(2)核移植形成的重組卵細(xì)胞在初次分裂時(shí)核基因不轉(zhuǎn)錄。

()(3)核移植時(shí)，提供細(xì)胞核和去核卵母細(xì)胞的動(dòng)物都應(yīng)為雌性。()(4)多莉羊克隆的成功證明了高度分化的細(xì)胞經(jīng)過(guò)一定處理可以表現(xiàn)出動(dòng)物細(xì)胞具有全能性。

()(5)進(jìn)行核移植前，核供體細(xì)胞一般需要進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)，其原因是促使細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞分化。

()√××××[要點(diǎn)整合·強(qiáng)化認(rèn)知]1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件與過(guò)程(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程

2.單克隆抗體的制備流程(1)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是__________________________________，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是_________________________________________________________。(2)第一次篩選：利用特定的___________篩選，獲得__________；第二次篩選：進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。(3)體內(nèi)培養(yǎng)：從小鼠腹水中提取單克隆抗體；體外培養(yǎng)：從細(xì)胞培養(yǎng)液中提取單克隆抗體。既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無(wú)限增殖純度高，可大量制備，在應(yīng)用時(shí)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)選擇培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞3.克隆動(dòng)物的培育過(guò)程分析

(1)①～③過(guò)程的名稱(chēng)為①______________；②將供體細(xì)胞核注入去核卵母細(xì)胞、通過(guò)___________使細(xì)胞融合；③激活重構(gòu)胚并進(jìn)行__________。(2)體細(xì)胞核移植技術(shù)的原理是________________________。(3)D新個(gè)體的性別與___相同,D新個(gè)體的絕大多數(shù)性狀與___相同。(顯微操作)去核電脈沖融合胚胎移植動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性BB[科學(xué)思維·規(guī)范表達(dá)]1.在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是___________________________________________________。2.在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，除營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH、滲透壓、氣體環(huán)境等要符合條件外，培養(yǎng)液中還應(yīng)添加一定量的抗生素，其目的是__________________________________________。清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)生的有毒物質(zhì)危害細(xì)胞抑制細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)，從而預(yù)防污染有利于3.要想獲得大量的單一抗體，不能通過(guò)直接培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)，原因是__________________________________________。4.單克隆抗體與抗癌藥物結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，可明顯減少用藥量，原因是__________________________________________________________________________________________________。5.研究發(fā)現(xiàn)，選擇卵母細(xì)胞作為核受體的成功率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他細(xì)胞，分析其原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________。在體外培養(yǎng)條件下，B淋巴細(xì)胞不能無(wú)限增殖

利用癌細(xì)胞抗原制備的抗體可以特異性結(jié)合癌細(xì)胞，具有導(dǎo)向功能，可以攜帶抗癌藥物準(zhǔn)確地作用于癌細(xì)胞

卵母細(xì)胞體積大，易于操作，可為重組細(xì)胞早期發(fā)育提供較充足的營(yíng)養(yǎng)；卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中存在激發(fā)動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)考法(一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作

1.(2023·寧波期中)如圖所示為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞增殖情況，下列有關(guān)說(shuō)法正確的是

(

)A.OA段包含了原代培養(yǎng)過(guò)程，AB段可能發(fā)生了接觸抑制現(xiàn)象B.BC段的培養(yǎng)為傳代培養(yǎng)，C點(diǎn)細(xì)胞發(fā)生了癌變C.在細(xì)胞的傳代培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞的基因型一定不會(huì)發(fā)生改變D.為了得到既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，最好選取圖中CD段的細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合答案：A

解析：原代培養(yǎng)指細(xì)胞離開(kāi)有機(jī)體后的首次培養(yǎng)，因此圖中OA段包含了原代培養(yǎng)過(guò)程，AB段可能發(fā)生了接觸抑制現(xiàn)象，細(xì)胞增殖幾乎停止，A正確；BC段的培養(yǎng)為傳代培養(yǎng)，CD段細(xì)胞增殖代數(shù)幾乎不再上升，沒(méi)有癌細(xì)胞無(wú)限增殖的特點(diǎn)，不能說(shuō)明C點(diǎn)細(xì)胞發(fā)生了癌變，B錯(cuò)誤；在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞進(jìn)行的是有絲分裂，所以培養(yǎng)出來(lái)的多數(shù)細(xì)胞基因型相同，有少數(shù)細(xì)胞可能在培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生遺傳物質(zhì)改變，因此基因型可能會(huì)改變，C錯(cuò)誤；CD段細(xì)胞增殖緩慢，以至于完全停止，為了得到既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，最好選取圖中D點(diǎn)后的細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，D錯(cuò)誤。2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程如圖甲所示。細(xì)胞系(原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體)的形成過(guò)程如圖乙所示。下列敘述正確的是

(

)A.a中培養(yǎng)的一般是幼齡動(dòng)物的器官或組織，原因是其細(xì)胞分化程度低B.在細(xì)胞系的形成過(guò)程中，傳代期細(xì)胞傳代培養(yǎng)一次，細(xì)胞增加一倍C.原代培養(yǎng)前需將組織用胰蛋白酶等處理，制成細(xì)胞懸液D.為保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，c、d培養(yǎng)過(guò)程必須采用封閉式培養(yǎng)答案：C

解析：a中培養(yǎng)的一般是幼齡動(dòng)物的器官或組織，原因是其細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，A錯(cuò)誤；分析圖乙可知，傳代期細(xì)胞傳代培養(yǎng)一次，細(xì)胞數(shù)并沒(méi)有成倍數(shù)增加，B錯(cuò)誤；原代培養(yǎng)前需將組織分散成單個(gè)細(xì)胞，此時(shí)需要用胰蛋白酶等處理，制成細(xì)胞懸液，C正確；c、d培養(yǎng)過(guò)程需要在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行，提供一定的氣體環(huán)境，不能封閉式培養(yǎng)，D錯(cuò)誤。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的兩個(gè)注意點(diǎn)(1)并不是所有的動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中都表現(xiàn)出接觸抑制的特點(diǎn)，惡性細(xì)胞系在培養(yǎng)過(guò)程中失去了接觸抑制的特點(diǎn)，具有異體致瘤性。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要進(jìn)行傳代，主要原因是原培養(yǎng)瓶中發(fā)生接觸抑制或培養(yǎng)空間的限制及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗枯竭，細(xì)胞的生長(zhǎng)逐漸減慢，甚至停止并死亡。|深|化|提|能|考法(二)單克隆抗體制備與應(yīng)用3.(2023·麗水、湖州、衢州三地質(zhì)檢)某研究小組欲制備單克隆抗體A，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：抗原A刺激小鼠后分離B淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選獲得雜交瘤細(xì)胞后進(jìn)行體外培養(yǎng)，獲得單克隆抗體A。下列敘述正確的是

(

)A.從免疫小鼠的肝臟中分離得到B淋巴細(xì)胞B.可用仙臺(tái)病毒或70%的乙醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合C.雜交瘤細(xì)胞的克隆培養(yǎng)不能在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行D.篩選得到的雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中可能發(fā)生染色體丟失現(xiàn)象答案：D

解析：制備單克隆抗體所用的B淋巴細(xì)胞是從免疫小鼠的脾臟中分離得到的，A錯(cuò)誤；可用仙臺(tái)病毒或聚乙二醇等誘導(dǎo)細(xì)胞融合，不能用70%的乙醇誘導(dǎo)，B錯(cuò)誤；雜交瘤細(xì)胞的克隆培養(yǎng)可在動(dòng)物體內(nèi)或體外進(jìn)行，C錯(cuò)誤；雜交瘤細(xì)胞是不同細(xì)胞融合獲得的，篩選得到的雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中可能會(huì)發(fā)生染色體丟失現(xiàn)象，D正確。4.(2023·杭州二中等四校期中聯(lián)考)在治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中，需要表達(dá)M蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對(duì)M蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力，具體制備流程如圖。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是

(

)A.圖中細(xì)胞融合時(shí)，細(xì)胞膜會(huì)發(fā)生一定程度的損傷B.圖中篩選2所利用的方法是克隆化培養(yǎng)，篩選后可獲得單克隆雜交瘤細(xì)胞株C.利用M蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成抗體—藥物偶聯(lián)物，可實(shí)現(xiàn)特異性治療D.圖中獲得的單克隆雜交瘤細(xì)胞株是具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系答案：B

解析：圖中細(xì)胞融合時(shí)，常采用電融合、PEG、滅活病毒誘導(dǎo)等方法，會(huì)對(duì)細(xì)胞膜造成一定程度的損傷，A正確；篩選2為克隆化培養(yǎng)和專(zhuān)一抗體檢測(cè)，可獲得產(chǎn)生專(zhuān)一抗體的雜交瘤細(xì)胞株，B錯(cuò)誤；利用M蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，利用單克隆抗體的特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)制成的抗體—藥物偶聯(lián)物，可實(shí)現(xiàn)特異性治療，C正確；圖中所獲得的單克隆雜交瘤細(xì)胞株可無(wú)限增殖，因此是具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞系，D正確。|深|化|提|能|1.單克隆抗體制備中的兩次篩選目的及兩種獲取抗體的方法(1)兩次篩選的目的：第一次篩選的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選的目的是獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。(2)兩種獲取抗體方法：若在培養(yǎng)基中進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)，則從培養(yǎng)液中提取；若在小鼠或其他動(dòng)物腹腔中培養(yǎng)，則從腹水中提取。2.單克隆抗體與常規(guī)抗體比較項(xiàng)目制備原理分泌細(xì)胞特點(diǎn)產(chǎn)量單克隆抗體免疫原理、細(xì)胞融合技術(shù)及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)雜交瘤細(xì)胞特異性強(qiáng)、靈敏度高產(chǎn)量高，易純化分離常規(guī)抗體免疫原理效應(yīng)B細(xì)胞(漿細(xì)胞)特異性差、靈敏度低產(chǎn)量低，分離困難考法(三)核移植與動(dòng)物克隆5.(2023·杭嘉湖金四縣月考)中國(guó)科學(xué)家利用體細(xì)胞核移植技術(shù)成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”。培育過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是

(

)A.“中中”和“華華”的培育涉及核移植和胚胎體外培養(yǎng)B.①過(guò)程需借助精密的顯微操作儀和高效率的細(xì)胞融合法C.③過(guò)程應(yīng)包含了動(dòng)物胚胎體外培養(yǎng)、胚胎移植等多個(gè)過(guò)程D.與鼠相比，克隆猴更適合作為人類(lèi)疾病治療和藥物實(shí)驗(yàn)的模型動(dòng)物答案：C

解析：“中中”和“華華”的培育涉及核移植、胚胎體外培養(yǎng)和胚胎移植等，A正確；①過(guò)程將纖維細(xì)胞注射到去核卵母細(xì)胞中，需要借助精密的顯微操作儀和高效率的細(xì)胞融合法，B正確；②過(guò)程為動(dòng)物胚胎體外培養(yǎng)，③過(guò)程應(yīng)包含了胚胎質(zhì)量檢查、胚胎移植等多個(gè)過(guò)程，C錯(cuò)誤；與鼠相比，猴與人在進(jìn)化上親緣關(guān)系較近，克隆猴更適合作為人類(lèi)疾病治療和藥物實(shí)驗(yàn)的模型動(dòng)物，D正確。6.(2023·鎮(zhèn)海中學(xué)期末)如圖表示利用某些現(xiàn)代生物技術(shù)培育猴