實驗二物質鑒定

[實驗二]生物組織中還原糖、蛋白質、脂肪、淀粉的鑒定P18基本原理：某些化學試劑能夠與生物組織中的有關有機物產生特定的顏色反應，或被染色。

加熱

還原糖＋斐林試劑磚紅色沉淀

橘黃色

脂肪

紅色

蛋白質紫色淀粉＋碘液

藍色蘇丹Ⅲ染液蘇丹Ⅳ染液雙縮脲試劑每100g實驗材料部分成分含量分析表材料還原糖含量脂肪含量蛋白質含量淀粉含量梨13.0g0.5g0.4g4.0g西瓜13.5g0.1g0.4g5.0g豆?jié){1.5g1.8g4.5g1.1g牛奶5.0g4.0g3.5g0.0g花生

6.0g25.4g

2.0g13.0g馬鈴薯0.0g0.9g2.0g20.0g選擇該實驗材料時我們應該注意以下兩點：1、選擇生物組織中該種化合物含量高。2、本實驗為顯色實驗，考慮無關變量的干擾（顏色），選擇顏色淺的實驗材料。因此在本實驗中：還原糖的鑒定材料：梨勻漿脂肪的鑒定材料：花生種子蛋白質的鑒定材料：豆?jié){

淀粉的鑒定材料：馬鈴薯（淀粉）還原性糖：有還原性基團——游離醛基或酮基的糖；如葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖。非還原性糖：淀粉、纖維素、蔗糖等。斐林試劑

甲液：質量濃度為0.1g/mLNaOH溶液

乙液：質量濃度為0.05g/mLCuSO4溶液做可溶性還原性糖鑒定實驗，應選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。一、可溶性還原糖的鑒定１．原理：可溶性還原糖和斐林試劑的反應式：

CU2++OH-CU(OH)2

CU(OH)2

+還原糖CU2O

+H2O

（藍色）（磚紅色）一、可溶性還原糖的鑒定2.步驟試管1：2ml梨組織液；試管2：0.5ml斐林試劑甲

＋0.5ml斐林試劑乙，12（現(xiàn)配現(xiàn)用，等量混合）水浴加熱2分鐘搖勻試管夾水浴鍋1.原理在堿性環(huán)境中，雙縮脲能與Cu2+作用，形成紫色絡合物。把這種可鑒定雙縮脲的試劑稱為雙縮脲試劑。雙縮脲試劑A（0.1g/mlNaOH）雙縮脲試劑B

（0.01g/mlCuSO4）蛋白質有許多與雙縮脲結構相似的化學鍵，所以可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應。二、蛋白質的鑒定2.步驟：蛋白質＋雙縮脲試劑→紫色反應試管：2ml豆?jié){滴管3-4滴雙縮脲試劑B搖勻搖勻滴管1ml雙縮脲試劑A三、脂肪的鑒定原理：脂肪＋蘇丹Ⅲ染液橘黃色步驟：1、切片；

2、制片并觀察；載玻片2～3滴蘇丹Ⅲ（染色2～

3分鐘）花生子葉薄片吸去周圍染液1～2滴50﹪酒精（洗去浮色）吸去酒精

滴1滴蒸餾水蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察（4倍鏡）注意：所選的材料一定要脂肪含量高，并有一定大小才能做徒手切片?；ㄉN子符合條件?；ㄉN子用前要浸泡3～4小時，使其變軟，有利于切成薄片；但浸泡時間不能太長，否則組織太軟，薄片容易變形。

2.為什么還原糖鑒定實驗中，斐林試劑必須混合后再加，而雙縮脲試劑則先加試劑A再加試劑B？

1.為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用？還原糖與斐林試劑中Cu(OH)2發(fā)生反應。蛋白質只有在堿性環(huán)境中才能與CuSO４發(fā)生紫色