硝酸還原酶活性的測定

硝酸還原酶活性的測定小組成員：麻弘媛張翠敏穆昕陽蘇鑫李金婷發(fā)言人：蘇鑫前方圖文并茂請注意！一、實(shí)驗(yàn)原理與過程實(shí)驗(yàn)原理123實(shí)驗(yàn)流程標(biāo)準(zhǔn)曲線制作試劑12345亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液ml0.20.40.60.81蒸餾水ml0.80.60.40.201%對氨基苯磺酸ml4.04.04.04.04.00.2%ɑ-萘胺ml4.04.04.04.04.0亞硝酸納含量μg12345酶反應(yīng)和酶活性的測定取油菜葉洗干擦干用打孔機(jī)打孔分成三份/1g分別放入50ml三角瓶加入試劑用針管進(jìn)行抽氣30℃暗室保溫30min終止反應(yīng)分別取1ml上清加入對2ml氨基苯磺酸和2mlɑ-萘胺室溫顯色20min540nm波長下測定OD值結(jié)果分析二、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象與結(jié)果現(xiàn)象：用打孔器處理葉片后得到大小均一的葉片，葉片暗反應(yīng)后看到1號對照瓶內(nèi)葉片邊緣發(fā)黃，而2和3號瓶內(nèi)相對較綠;測吸光值時(shí)可以看到實(shí)驗(yàn)組比標(biāo)準(zhǔn)曲線組顏色淺的多。此圖為標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：540nm下的OD值:用2、3號管溶液OD平均值減去1號管溶液的OD值，得到的值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的NaNO2含量（μg）。結(jié)果與計(jì)算把在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的NaNO2含量代入下式，計(jì)算硝酸還原酶活性：將上述結(jié)果帶入公式測得硝酸還原酶活性為2.60856。三、查閱文獻(xiàn)與結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)存在較大誤差，其原因總結(jié)如下：1.可能培養(yǎng)方式為水培，氮吸收與土培可能不同，一般來說，氮吸收量越多，說明酶活力越強(qiáng)。2.材料不新鮮，導(dǎo)致酶活力降低。3.實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)所致。4.抽真空時(shí)間不夠，反應(yīng)不充分。5.抽真空后沒馬上進(jìn)行暗反應(yīng)。6.OD值讀數(shù)誤差。四、試驗(yàn)操作技能1.在加液研磨實(shí)驗(yàn)材料時(shí)分次的添加沖洗研缽和研磨棒。2.經(jīng)離心后的樣品上清須轉(zhuǎn)移至試管中再進(jìn)行吸取。3.在測定樣品OD值時(shí)所采用的對照試劑不同，標(biāo)準(zhǔn)曲線與Y軸的交點(diǎn)也不同。4.稱量紙折疊至四邊上翹，以防藥品腐蝕天平。5.試管夾夾在試管中上部，從試管底部套入、取出，拇指不要按在試管夾的短柄上。6.在滴定時(shí)加液要慢，邊加邊震蕩使之充分反應(yīng)。五、操作中存在的不足1.待測樣品研磨不充分導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。2.操作人員不同導(dǎo)致加入藥品量的細(xì)微不同導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。3.不同人員對于顏色的辨別度不同導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。4.藥品配制后放置時(shí)間過長部分變質(zhì)導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。5.水浴加熱時(shí)間不準(zhǔn)確導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。六、提高準(zhǔn)確度的方法1.將樣品剪碎充分研磨，尤其是葉片部分。2.由同一人加入同系列藥品。3.讓對顏色敏感的人辨別顏色的變化。4.易變質(zhì)藥品現(xiàn)用現(xiàn)配，其他藥品用完后蓋好蓋子。5.水浴加熱時(shí)利用秒表定好時(shí)間。七、小組團(tuán)隊(duì)合作分工