心理應(yīng)激與卵巢儲備功能下降的相關(guān)性研究

心理應(yīng)激與卵巢儲備功能下降的相關(guān)性研究

卵備功能是指卵內(nèi)殘留的卵數(shù)和質(zhì)量，能夠反映女性的繁殖潛力和生殖功能。卵巢儲備功能下降(decreasingovarianstore,DOS)指卵巢產(chǎn)生卵子的能力減弱,卵泡數(shù)量、質(zhì)量下降,從而導(dǎo)致女性生育能力減弱及性激素缺乏,表現(xiàn)為不孕、月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)等,進(jìn)一步可發(fā)展為卵巢早衰(premature-ovarianfailure,POF)。近年來,隨著社會經(jīng)濟、文化、生活環(huán)境、工作節(jié)奏等的改變,女性承受著越來越大的壓力,導(dǎo)致長期處于心理不良應(yīng)激狀態(tài),DOS發(fā)病率呈逐年上升趨勢,嚴(yán)重影響著女性的生殖健康和生活質(zhì)量?，F(xiàn)在研究表明,抗苗勒管激素(anti-Müllerianhormone,AMH)是反映卵巢儲備功能最好的指標(biāo)。為此,本研究通過建立動物的應(yīng)激模型,利用AMH為檢測指標(biāo),對心理應(yīng)激與卵巢儲備功能下降的相關(guān)性作一探討。1材料和方法1.1分組及飼養(yǎng)選取剛剛性成熟的健康雌性昆明小鼠(南昌大學(xué)實驗動物中心提供)40只,體質(zhì)量22g左右,適應(yīng)喂養(yǎng)3d后,按隨機數(shù)字表法分為:正常對照組、應(yīng)激1周組、應(yīng)激2周組和應(yīng)激4周組,每組10只。喂飼普通飼料,自由飲水。動物房溫度控制在(24±1)℃,濕度為40%~70%,光:暗周期為12h∶12h。1.2離心管安裝參照文獻(xiàn)方法,以束縛為應(yīng)激原建立心理應(yīng)激動物模型。如圖1所示,使用50mL離心管,在離心管管壁前端扎數(shù)個孔,保證空氣通暢,在離心管蓋子上鉆孔,待小鼠鉆入離心管后,蓋上離心管蓋子,將小鼠尾部暴露在外面,封閉后的離心管固定于水平桌面上。每天上午9∶00開始,下午3∶00解除。1.3皮質(zhì)醇的測定在應(yīng)激刺激第1、2、4周結(jié)束時,于小鼠眼眶取血分離血漿,用皮質(zhì)醇放射免疫分析測定盒檢測樣品中的皮質(zhì)醇含量;分別取應(yīng)激處理組和相應(yīng)對照組的血液,離心制成血清標(biāo)本,用ELISA法測定各組的血清AMH水平,以此檢測卵巢儲備功能。1.4血清皮質(zhì)醇與血清抗苗勒管激素的相關(guān)性應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析,各時間點心理應(yīng)激組與對照組之間比較采用成組t檢驗;心理應(yīng)激組之間兩兩比較采用SNK-q檢驗,結(jié)果以表示;血清皮質(zhì)醇與血清抗苗勒管激素變化的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1組皮質(zhì)醇水平比較心理應(yīng)激1周時小鼠皮質(zhì)醇水平明顯高于對照組(P<0.05);心理應(yīng)激2周時皮質(zhì)醇水平回落至對照組水平;至心理應(yīng)激4周時,皮質(zhì)醇水平又有所上升,高于對照組(P<0.05),雖升高幅度無心理應(yīng)激1周時大,但差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。2.2周時amh水平心理應(yīng)激1周時小鼠AMH水平明顯低于對照組(P<0.05);心理應(yīng)激2周時AMH水平回升至對照組水平;至心理應(yīng)激4周時,AMH水平有所下降,仍然低于對照組(P<0.05),雖下降幅度無心理應(yīng)激1周時大,但差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。2.3血清醇與血清pmh水平的相關(guān)分析相關(guān)分析表明:血清皮質(zhì)醇的變化水平與血清AMH的變化水平呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.990,P<0.01)。3心理應(yīng)激與卵巢功能AMH是由二硫鍵連接而成的糖蛋白二聚物,屬于β2轉(zhuǎn)化生長超家族的成員,僅表達(dá)于性腺,雌性物種中AMH由卵巢表達(dá)。AMH可調(diào)控起始募集(卵泡從靜止?fàn)顟B(tài)被募集進(jìn)入生長池)和循環(huán)募集(生長卵泡被選擇繼續(xù)生長直到排卵前階段),抑制原始卵泡池過快消耗及優(yōu)勢卵泡形成。I.B.Carlsson等體外培養(yǎng)人卵巢組織與重組鼠AMH時發(fā)現(xiàn),一定濃度的AMH可抑制原始卵泡的消耗。A.L.Durlinger等通過對AMH先天缺失的小鼠和野生型小鼠在不同發(fā)育階段(25d、4個月、13個月)的對比研究發(fā)現(xiàn),AMH先天缺失小鼠較野生型小鼠含有更多竇前卵泡和小竇卵泡,且AMH先天缺失小鼠在4個月和13個月齡時,始基卵泡明顯減少甚至消失,該結(jié)果表明AMH缺失可使更多始基卵泡被募集進(jìn)入生長階段,加快原始卵泡耗竭。在循環(huán)募集階段,A.L.Durlinger等通過體外培養(yǎng)鼠竇前卵泡表明,AMH可通過降低卵泡對卵泡刺激素(FSH)的敏感性來抑制FSH誘導(dǎo)的卵泡生長,從而抑制顆粒細(xì)胞的增殖速率,減小卵泡直徑。在女性一生中,原始卵泡庫內(nèi)的卵泡持續(xù)分批進(jìn)入募集周期,始終處于周期性生長發(fā)育與閉鎖的動態(tài)變化中。女性生育潛能與卵巢內(nèi)剩余的原始卵泡數(shù)量和質(zhì)量相關(guān)。隨著年齡增長,卵巢內(nèi)存留的可募集原始卵泡數(shù)目逐漸減少,卵子質(zhì)量下降,導(dǎo)致生育能力下降,卵巢功能逐漸衰退,稱為卵巢老化。目前在臨床上無法直接測量原始卵泡庫存的大小,但竇卵泡數(shù)與原始卵泡池的大小相關(guān),可通過測量竇卵泡的數(shù)目間接反映一個周期中可募集的原始卵泡情況。研究表明,AMH是由生長卵泡產(chǎn)生的,血清AMH水平與竇卵泡數(shù)量呈正相關(guān),測量AMH水平可相對真實地反映原始卵泡庫存情況,而且避免了B超下竇卵泡計數(shù)的麻煩和人為誤差,檢測結(jié)果更加客觀、準(zhǔn)確。I.A.vanRooij等研究發(fā)現(xiàn),AMH隨年齡增長呈持續(xù)下降趨勢,與其他評估卵巢功能的指標(biāo),如年齡、FSH、卵巢抑制素B(INHB)等相比,預(yù)測準(zhǔn)確性最高,可用于評估卵巢儲備功能。因此,本實驗以AMH為檢測指標(biāo),觀察心理應(yīng)激與卵巢功能下降的相關(guān)性。結(jié)果顯示:心理應(yīng)激1周時小鼠AMH水平明顯低于對照組(P<0.05);心理應(yīng)激2周時AMH水平回升至對照組水平;至心理應(yīng)激4周時,AMH水平有所下降,仍然低于對照組(P<0.05),且相較于心理應(yīng)激1周時,下降沒有那么明顯。另外,本實驗發(fā)現(xiàn)上述AMH的變化與血清皮質(zhì)醇的變化呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.990,P<0.01)。心理應(yīng)激1周時小鼠皮質(zhì)醇水平明顯高于對照組(P<0.05);在心理應(yīng)激2周時皮質(zhì)醇水平回落至對照組水平;至心理應(yīng)激4周時,皮質(zhì)醇水平又有所上升,高于對照組(P<0.05),但沒有心理應(yīng)激1周時那么明顯。至于AMH在不同心理應(yīng)激時間點的變化,可能的機制是:心理應(yīng)激1周時小鼠處于急性應(yīng)激狀態(tài),即應(yīng)激反應(yīng)階段的警戒期,應(yīng)激激素大量釋放,血清皮質(zhì)醇水平明顯升高,產(chǎn)生的氧自由基,引起卵巢卵泡細(xì)胞的損傷,生長卵泡大量喪失,從而導(dǎo)致AMH水平的下降。心理應(yīng)激2周時,相當(dāng)于應(yīng)激反應(yīng)階段的阻抗期,動物已經(jīng)漸漸適應(yīng),產(chǎn)生耐受,血清皮質(zhì)醇水平回落至對照組水平;此時AMH水平回升的可能的機制是:一方面與產(chǎn)生應(yīng)激耐受有關(guān),再者是前期在急性應(yīng)激反應(yīng)階段導(dǎo)致了AMH的下降,因AMH可調(diào)控起始募集(卵泡從靜止?fàn)顟B(tài)被募集進(jìn)入生長池),AMH對原始卵泡啟動的抑