DB14-T 1619-2018 轉(zhuǎn)基因棉花耐鹽性鑒定技術(shù)規(guī)范

65.020.01B

05

DB14山 西 省地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB

14/

T

1619—2018轉(zhuǎn)基因棉花耐鹽鑒定技術(shù)規(guī)范 山西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)

布.DB14/

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1619—2018 前言

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II1

范圍

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12

規(guī)范性引用文件

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13

術(shù)語和定義

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14

耐鹽性鑒定

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15

耐鹽性判定規(guī)則

....................................................................

4IDB14/

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1619—2018 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T

本標(biāo)準(zhǔn)由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心、山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳慎杰、張換樣、李靜、秦麗霞、李盛。IIDB14/

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1619—20181 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因棉花耐鹽性鑒定方法及判定規(guī)則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因棉花的耐鹽性檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T

農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程發(fā)芽試驗(yàn)3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1對(duì)照品種轉(zhuǎn)基因材料的受體材料。3.2耐鹽性僅指對(duì)

NaCl

4 耐鹽性鑒定4.1 種子萌發(fā)期耐鹽性鑒定4.1.1 樣品準(zhǔn)備分別取轉(zhuǎn)基因純合系和受體對(duì)照種子

300

粒，硫酸脫絨。4.1.2 紙床準(zhǔn)備養(yǎng)。4.1.3 脅迫溶液配制1DB14/

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1619—2018將

10gNaCl

溶解在

1

000

mL

去離子水中。4.1.4 脅迫培養(yǎng)

3543.4進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。4.1.5 去離子水培養(yǎng)100粒種子為一個(gè)重復(fù)，共三次重復(fù)，分別放入去離子水培養(yǎng)皿中，按GB/T

4.1.6 性狀調(diào)查

的一半以上為準(zhǔn)。4.1.7 種子萌發(fā)期耐鹽性評(píng)價(jià)方法調(diào)查統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率、相對(duì)發(fā)芽率、種子萌發(fā)期耐鹽指數(shù)。按下列公式進(jìn)行計(jì)算：發(fā)芽率（%）

發(fā)芽數(shù)100

100（1）%）

100（2）

100（3）4.2苗期鹽池耐鹽性鑒定4.2.1鹽池要求鹽池長(zhǎng)20

m，底厚0.20

m，保證鹽份不滲出，水份不處溢。4.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)將轉(zhuǎn)基因純合系和受體對(duì)照種植于鹽池中，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，三個(gè)小區(qū)重復(fù)，每個(gè)小區(qū)種4行，小區(qū)長(zhǎng)3

m,寬1.2

cm,株距15

4.2.3 播種管理棉苗長(zhǎng)至三葉期，定苗，然后進(jìn)行施鹽處理，使處理后的土壤鹽分濃度達(dá)到0.4%。4.2.4 施鹽方法水，至到鹽分完全溶解為止。撒施前進(jìn)行土壤中耕處理，防止水分流動(dòng)而造成的鹽分不均勻現(xiàn)象。4.2.5 耐鹽性評(píng)價(jià)方法4.2.5.1 耐鹽性直接觀察2DB14/

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1619—2018施鹽15

d后拍照記錄的轉(zhuǎn)化事件和受體對(duì)照的表型，初步了解該基因?qū)τ谑荏w材料耐鹽性的影響。4.2.5.2 相對(duì)成活苗率計(jì)算施鹽15

d后調(diào)查成活苗數(shù)，以生長(zhǎng)點(diǎn)的死活為成活標(biāo)準(zhǔn)，生長(zhǎng)點(diǎn)死的為死苗，生長(zhǎng)點(diǎn)活的為活苗，并計(jì)算成活苗率和相對(duì)成活苗率。依據(jù)以下公式計(jì)算：%）

100

（4）%）

100

（5）4.3 苗期耐鹽性快速鑒定將種子以較大的密度播種在疏松的基質(zhì)中（草炭、珍珠巖、蛭石等），正常管理，直到長(zhǎng)到3-5片100

mL的三角瓶盛40

mLNaCl溶液插入植株一個(gè)，每個(gè)轉(zhuǎn)基因事件和受體處理20株左右，觀察葉片萎蔫的速度，拍照記錄，萎蔫的慢抗鹽性強(qiáng)，此方法快速準(zhǔn)確。4.4 全生育期耐鹽性鑒定4.4.1 鹽池要求全生育期耐鹽性鑒定可在鹽池條件下進(jìn)行。鹽池頂部加裝防雨棚，鹽池長(zhǎng)20

m，寬2

m，底厚0.20

鹽量在0.1%以下。4.4.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)復(fù)，每個(gè)小區(qū)種4行，小區(qū)長(zhǎng)3

m,寬1.2

m,株距0.15

4.4.3 鹽池的水分調(diào)控水量盡量保持恒定。4.4.4 考察性狀小區(qū)籽棉產(chǎn)量。4.4.5 耐鹽性評(píng)價(jià)方法4.4.5.1 耐鹽性直接觀察通過直接觀察拍照記錄的轉(zhuǎn)化事件和受體對(duì)照的表型，初步了解該基因?qū)τ谑荏w材料抗旱性的影響。4.4.5.2 耐鹽指數(shù)的計(jì)算以耐鹽指數(shù)作為全生育期耐鹽性的評(píng)價(jià)指標(biāo)，按以下公式計(jì)算：3種子萌發(fā)期耐鹽指數(shù)%耐鹽性等級(jí)≥90.0高抗鹽75.0-89.9抗鹽50.0-74.9耐鹽＜50.0不耐鹽相對(duì)成活苗率%耐鹽性等級(jí)≥90.0高抗鹽75.0-89.9抗鹽50.0-74.9耐鹽＜50.0不耐鹽耐鹽指數(shù)耐鹽性等級(jí)＞1.0強(qiáng)0.6-1.0中＜0.6弱DB14/

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1619—2018%）

100

（6）

（7）5耐鹽性判定規(guī)則5.1種子萌發(fā)期耐鹽性判定以用種子萌發(fā)期耐鹽指數(shù)作為判定指標(biāo)，見