黃曲霉檢測(cè)方法研究進(jìn)展綜述

《科技論文寫作與實(shí)踐》課程論文黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展1黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展謝桂煥(福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院09生物信息學(xué)福州350002)摘要:黃曲霉毒素是劇毒性物質(zhì)，多在食品中發(fā)現(xiàn)，對(duì)人類危害極大。概述了黃曲霉毒素的理化性質(zhì)及危害，討論了黃曲霉毒素的各種檢測(cè)方法如薄層層析法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等，并對(duì)未來黃曲霉毒素的檢測(cè)方法進(jìn)行了展望。引言：食品安全是人們都極其關(guān)注的，尤其是綠色食品和有機(jī)食品概念的提出更加增加人們對(duì)食導(dǎo)致嚴(yán)重的食品安全問題M。白20世紀(jì)60年代以來，有關(guān)AF的危害被大量報(bào)道，以致AF已成為最受人們關(guān)注的一種真菌毒素。因此，尋求準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法4,對(duì)AF進(jìn)行高效的正文AFT在紫外線下發(fā)特定的熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為藍(lán)紫色熒光的B族和黃綠色熒光的G族兩大類及其衍生物I?。最具有代表性為AFB1、甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑。在中性溶液中較穩(wěn)定，在強(qiáng)酸性溶液中稍有分解，在pH9~10的強(qiáng)堿溶紫外線對(duì)低濃度AF有一定的破壞性。在自然條件下，食品中AF穩(wěn)定性很強(qiáng)。被AFB1污染的AF主要存在于霉變的花生、谷物、果仁和大米等食物中，食用了被AF污染的食物后，會(huì)對(duì)機(jī)體造成損害甚至危及生命。AF對(duì)人和動(dòng)物危害與AF抑制蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。研究表明l6n,AFB1具有很強(qiáng)的致畸、致癌、致突變的作用，其毒性因動(dòng)物的種類、年齡、性別、體況養(yǎng)狀況的不同存在差異，年幼動(dòng)物、雄性動(dòng)物較敏感，主要損害動(dòng)物的肝臟。經(jīng)常食用含有AF2飼料的奶牛，其產(chǎn)奶量明顯下降，同時(shí)奶中含有代謝物AFM1和AFM2等毒素。人食用了被AF用含有AF的食物來喂食小鼠，其先后出現(xiàn)肝癌、胃癌、腎小管腺癌等病變。AFB1與DNA的共形成。食用被AFT污染的食品，會(huì)出現(xiàn)急性中毒，臨床表現(xiàn)以黃疸為主，并有嘔吐、厭食和發(fā)燒AFG2分別顯示紫色、藍(lán)紫色、綠色和綠色熒光。并根據(jù)其在薄層上顯示的最低檢出量來確定其開和雙向展開法，其中雙向展開法能進(jìn)一步除去樣品中的雜質(zhì)，提高靈敏度，省略了柱層析等凈化、衍生，最后經(jīng)HTLC熒光檢測(cè)器檢測(cè)。早期試驗(yàn)研究中使用的正相色譜分離、紫外檢測(cè)器測(cè)定HPLC的方法已被現(xiàn)代的反相色譜分離和熒光檢測(cè)器測(cè)定的方法所取代，并得到普遍應(yīng)用和發(fā)展。與紫外檢測(cè)器相比較，熒光檢測(cè)器具有靈敏度高、選擇性好以及干擾峰少的優(yōu)點(diǎn)。由于AF的熒光強(qiáng)度較弱，直接測(cè)定會(huì)影響其靈敏度和準(zhǔn)確度。試驗(yàn)中可以對(duì)AF進(jìn)行衍生以增強(qiáng)其熒(3:7)為流動(dòng)相，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)365nm,發(fā)射波長(zhǎng)455nm效果比較好。馮建蕾3等[13對(duì)發(fā)酵玉米粉用甲醇一水(8:2,V/V)提取，經(jīng)免疫親柱(IAC)分離純化，在線光化學(xué)衍方法具有準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)限低、效率高等優(yōu)點(diǎn)。方法。大致采用兩種方法檢測(cè)AF:一種是用雙抗體夾心法；另一種是用競(jìng)爭(zhēng)法。免疫吸附法測(cè)定異性AFTM1抗體。為了使用方便，利用酶聯(lián)免疫原理研制出AF快速測(cè)試盒，能簡(jiǎn)便地定量測(cè)定AF含量。趙曉聯(lián)等115應(yīng)用這種快速測(cè)試盒測(cè)定AF含量，先用三氯甲烷提取樣品，過濾，收水浴揮干提取液，再用甲醇溶解，最后用專用AF試劑盒測(cè)定。關(guān)于運(yùn)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AFTB1出售，我國(guó)自20世紀(jì)90年代以來也有一些以ELISA檢測(cè)食品及飼料中AFTB1的研究報(bào)道。如陳檢測(cè)靈敏度達(dá)0.015Lg/kg,比薄層色譜提高了300~400倍，回收率大于89.2%,精密度高，測(cè)定時(shí)間短，只需4h。SFB是新發(fā)展起來的一種檢測(cè)AFT的方法，其設(shè)備輕便、自動(dòng)化時(shí)間短，廣泛應(yīng)用于檢測(cè)日常飼料中的AFT是否超標(biāo)。國(guó)外V-icam公司開發(fā)出的V2系列型熒出限分別是215Lg/kg和1Lg/kg,添加回收率在85%以上。2.4.2金標(biāo)免疫層析檢測(cè)技術(shù)(GIC時(shí)間內(nèi)測(cè)出AFB1的含量，并可以直接讀取結(jié)果，不需要分離純化樣品，真正做到了一步檢測(cè)，玻璃纖維上，AFB1偶聯(lián)抗原和二抗分別結(jié)合于硝酸纖維膜上，依次將樣本墊、膠金墊、硝酸纖維膜和吸水紙組裝切割成膠體金試紙條并裝入檢測(cè)卡中。結(jié)果表明：其靈敏度為5ng/mL,檢測(cè)4時(shí)間為10min,批內(nèi)和批間重復(fù)性100%。假陽性率和假陰性率均為0。對(duì)于AFT的毒性及在食品中的污染情況，世界各國(guó)相繼建立或正在建立新的檢測(cè)該毒素的方法，理想的分析方法應(yīng)該是簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、有效、靈敏、特異、經(jīng)濟(jì)等。TLC對(duì)樣品處理繁瑣，試驗(yàn)過程復(fù)雜、耗時(shí)、易受雜質(zhì)干擾、準(zhǔn)確性差，必須使用標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)試驗(yàn)人員危害大，且靈敏度差。HPLC是近幾年發(fā)展起來的檢測(cè)方法，此法快速而準(zhǔn)確，但所需儀器設(shè)備投資大、對(duì)操作技術(shù)要求高，未能廣泛使用。基于抗原抗體特異性反應(yīng)建立起來的ELISA分析法，具有特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短的特點(diǎn)，而其靈敏度與TLC或HPLC法相當(dāng)或更高，樣品前處理簡(jiǎn)單，提取后就可直接測(cè)定，不需要凈化過程，特異性強(qiáng)、靈敏度高、成本低，適于批量檢測(cè)。由于酶本身的不穩(wěn)定性，用此方法檢驗(yàn)AFT有可能帶來假陽、陰性結(jié)果。GICA法具有快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便、無需貴重儀器設(shè)備的特點(diǎn)，所以開發(fā)快速檢測(cè)試劑是將來一種新的發(fā)展方隨著待測(cè)食品種類的擴(kuò)大和食品基質(zhì)成分的復(fù)雜化，來自食品中非測(cè)定成分的干擾越來越多，因此，對(duì)檢測(cè)樣品純化、檢測(cè)手段的要求越來越高。發(fā)展廉價(jià)、靈敏、特異、快速的凈化手段和檢測(cè)方法是今后的研究方向。參考文獻(xiàn)[8]StrokaJ.Developmentofasimplifieddensitometerforthedeterminationofaflatoxinsbythilayerchroma-tography[J].JournalofChromatographyA,2000,904:263-268.[9]OttaKH,PappE,BagocsiB.Determchromatogra-phic[J].JournalofChromatographyA,2000,882: