【積雪草提取物的質(zhì)量實(shí)驗(yàn)研究8400字（論文）】

-19-積雪草提取物的質(zhì)量實(shí)驗(yàn)研究目錄3054第一章前言 -1-3112第二章材料 -4-8712.1材料與試液 -4-320892.2主要儀器 -4-23079第三章試驗(yàn)方法 -5-263053.1樣品處理 -5-38623.2試驗(yàn)方法 -5-179463.2.1對(duì)照品溶液的制備 -5-4333.2.2供試品溶液的制備 -5-69003.2.3積雪草總苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 -5-249003.2.4積雪草中積雪草苷的含量測(cè)定 -5-136923.2.5積雪草中積雪草苷的提取率計(jì)算 -5-274093.3單因素試驗(yàn) -6-318813.3.1乙醇濃度的單因素試驗(yàn) -6-58023.3.2料液比的單因素試驗(yàn) -6-279303.3.3超聲時(shí)間的單因素試驗(yàn) -6-25593.3.4提取次數(shù)的單因素試驗(yàn) -6-262753.4正交試驗(yàn) -6-15086第四章結(jié)果與分析 -7-130174.1積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)曲線 -7-47044.1.1精密度試驗(yàn) -7-278794.1.2重復(fù)性試驗(yàn) -7-177124.1.3穩(wěn)定性試驗(yàn) -7-192414.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 -8-310924.2.1乙醇濃度對(duì)積雪草苷提取率的影響 -8-102084.2.2超聲時(shí)間對(duì)積雪草苷提取率的影響 -8-171204.2.3料液比對(duì)積雪草苷提取率的影響 -8-185674.2.4提取次數(shù)對(duì)積雪草苷提取率的影響 -8-59694.3正交試驗(yàn)結(jié)果分析 -8-83544.4正交試驗(yàn)最佳工藝條件的驗(yàn)證試驗(yàn) -10-94264.5用超聲波-乙醇提取法提取積雪草苷與乙醇浸漬提取方法的作比較 -10-29766第五章討論與結(jié)論 -12-8110參考文獻(xiàn) -14-第一章前言積雪草為傘形科積雪草屬植物積雪草(CentellaasiaticaL.Urban)的干燥全草。根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版記載，主治功能有清熱利濕，解毒消腫。用于濕熱黃疸，中暑腹瀉，石淋血淋，癰腫瘡毒，跌撲損傷。查閱文獻(xiàn)得知積雪草的主要化學(xué)成分是三萜皂苷類(lèi)（積雪草皂苷、羥基積雪草苷）、多炔烯烴類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)；還含有大量的糖葉綠素、葡萄糖等成分。藥理作用：抗癌作用、抗抑郁作用、具有抗菌消炎、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用、增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能并能提高蟾蜍大腦認(rèn)知能力中積雪草苷和羥基積雪草苷為積雪草中的主要有效成分，其具有抗氧化、抗菌、抗抑郁、調(diào)節(jié)免疫等功能，用于治療頑固性創(chuàng)傷，皮膚結(jié)核等皮膚疾病。同時(shí)積雪草酸屬于五環(huán)三萜類(lèi)化合物，是中藥積雪草的重要成分，具有廣泛的生物活性，如治療皮膚創(chuàng)傷和慢性潰瘍、肝保護(hù)、抗抑郁、防治心腦血管疾病、抗阿爾茨海默病等。近年來(lái)根據(jù)積雪草的藥理作用及其特點(diǎn)，有研究出更多更好的制劑供臨床的使用。比如積雪草和蘆薈凝膠均能抑制成纖維細(xì)胞的增殖，將蘆薈凝膠和積雪草總苷作為復(fù)方，制備成復(fù)方積雪草凝膠膏劑。陳陽(yáng)等研究復(fù)方積雪草凝膠貼劑的透皮特性及其對(duì)增生性瘢痕的治療效果，發(fā)現(xiàn)制備的高、中劑量復(fù)方積雪草凝膠貼劑有較好的促瘢痕愈合的作用。蘆薈凝膠的加入促進(jìn)了瘢痕愈合。SaowaneeWannasarit等開(kāi)發(fā)了包含木糖苷積雪草提取物和Eudragit?EPO（GR-SD）固體分散體的液體筏形成制劑，增加了胃潰瘍的治療效果。所以對(duì)積雪草中有效成分提取工藝的研究是很有必要的。目前積雪草苷的提取方法主要有回流法、超聲波法、微波法、酶法等還有最新研究的無(wú)溶劑微波萃?。⊿FME）法，F(xiàn)arhanaNaziraIdris等通過(guò)田口方法優(yōu)化了影響積雪草積雪草苷SFME的工藝參數(shù)等。超聲波是頻率f>20kHz的聲波。超聲波對(duì)植物中藥材的提取技術(shù)，原理是通過(guò)對(duì)溶劑中藥材的空化作用，使空化氣泡在振動(dòng)中不斷膨脹，最后發(fā)生崩潰，然后液體就從氣泡破裂的某一側(cè)進(jìn)入藥材固體的表面，氣泡崩潰時(shí)產(chǎn)生的巨大的壓力導(dǎo)致藥材細(xì)胞壁的破碎，加快了溶劑進(jìn)入細(xì)胞速度，其次，超聲波的振動(dòng)作用進(jìn)一步增加了有效物質(zhì)的溶出和擴(kuò)散，大大的提高了提取效率；并且超聲波提取技術(shù)不對(duì)提取物的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響、活性也保持不變。超聲波提取較傳統(tǒng)提取方法具有提取速度快、提取率高、提取所需溫度低、提取的雜質(zhì)相對(duì)較少、溶劑使用量少、有效成分容易分離和純化、操作方法簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，各方面帶來(lái)的效益良多，常用于輔助傳統(tǒng)的提取技術(shù)，是現(xiàn)代的具備高效率、高速、操作簡(jiǎn)單、節(jié)能等特點(diǎn)的新技術(shù)之一，在超聲波輔助提取的繼續(xù)研究和開(kāi)發(fā)上具有廣闊的前景，在醫(yī)藥制造業(yè)、食品工業(yè)等工業(yè)化大生產(chǎn)方向應(yīng)用上都有很大的研究?jī)r(jià)值和意義。本文就是采用超聲波-乙醇提取法對(duì)積雪草中的積雪草苷進(jìn)行提取，即利用傳統(tǒng)乙醇溶劑提取法的優(yōu)勢(shì)也要發(fā)揮超聲波法的優(yōu)點(diǎn)，使二者聯(lián)合應(yīng)用提取積雪草苷；以積雪草苷代替積雪草總苷，積雪草苷的提取率為指標(biāo)，通過(guò)運(yùn)用單因素與正交試驗(yàn)的相結(jié)合的研究方法，找到一組提取效率高但是成本相對(duì)低的最佳工藝，提高積雪草的利用價(jià)值，為積雪草中積雪草苷提取的相關(guān)工藝研究及其優(yōu)化提供參考。由于積雪草具有獨(dú)特的藥理作用和潛在的藥理價(jià)值，近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)天然藥物的研究日益漸增，積雪草已經(jīng)成為研究中的熱點(diǎn)。劉明珠[2]等采用超聲波提取，選取甲醇溶液用超聲波清洗器超聲提取銀葉菊中的總黃酮。阮俊[3]等在正交試驗(yàn)法下，分別用乙醇和水提取野菊花總黃酮，經(jīng)過(guò)一系列的試驗(yàn)，得出的結(jié)果為用乙醇提取所得黃酮提取率高于用水提取所得黃酮提取率。裴凌鵬[4]等在超聲波方法的條件下，從葛根中提取總黃酮，再經(jīng)過(guò)一系列的試驗(yàn)，確定了超聲波方法提取總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度70%，超聲波提取25min，提取次數(shù)3次，溫度為25℃。程曉榮[5]等在微波的條件下結(jié)合單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)得到了最佳提取工藝，再通過(guò)大孔樹(shù)脂柱純化提取物，紫外光分光度法測(cè)定積雪草總黃酮的含量，最后得出積雪草總黃酮在自由基清除能力試驗(yàn)中表現(xiàn)出很好的清除效果。陳宗保[6]等采用微波輔助提取葛粉總黃酮，并用定量分析測(cè)定了提取物中的總黃酮的含量。陳凱云[7]等以吸附及解吸率為指標(biāo)考察4種型號(hào)的樹(shù)脂，確定純化大薊黃酮的最佳樹(shù)脂，并通過(guò)單因素分析考察該樹(shù)脂分離，純化大薊總黃酮的最佳工藝條件，經(jīng)過(guò)一系列的試驗(yàn)得出其具體工藝條件為控制上樣濃度為5.2mg/ml\流速0.5ml/min，上樣體積為3.5BV，洗脫劑濃度為80%，洗脫劑用量為108BV。從積雪草的發(fā)現(xiàn)到現(xiàn)在的研究，對(duì)于積雪草中黃酮的提取方法也是越來(lái)越多，熱水提取法、有機(jī)溶劑提取和系統(tǒng)溶劑提取法、堿性烯醇或堿性水提取等方法，假如用這些傳統(tǒng)的方法來(lái)提取的話，提取到植物黃酮的含量會(huì)達(dá)不到理想中的效果，因?yàn)檫@些傳統(tǒng)的方法大都有著提取等待時(shí)間較長(zhǎng)、提取濃度低、成本較高、所需的試驗(yàn)空間要求較高、得率低等缺點(diǎn)。由于我們時(shí)代的發(fā)展和科技的進(jìn)步，因此這些正在逐漸的被更先進(jìn)和更有效率的方法所替代，比如超聲波萃取法和微波輔助法等。微波提取的過(guò)程是通過(guò)微波能量產(chǎn)生的電磁波瞬間穿透萃取的物質(zhì)內(nèi)部，使細(xì)胞內(nèi)部的溫度急速上升，進(jìn)而使細(xì)胞壁膨脹，當(dāng)產(chǎn)生的壓強(qiáng)超過(guò)細(xì)胞壁所承受的范圍，就會(huì)達(dá)到細(xì)胞壁破裂的效果，其目的是使萃取成分能夠爆裂流出，溶解在適當(dāng)?shù)臏囟认碌妮腿∫褐?，再通過(guò)逐步過(guò)濾，抽濾和分離等一系列的提純方法，才得到目標(biāo)產(chǎn)物。紫外分光光度法是分光光度法的一種，在紫外光作光源的條件下，對(duì)有特征吸收的物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，不加顯色劑就能直接測(cè)定，靈敏度極高，操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高，重復(fù)度良好。在微波輔助法下用正交實(shí)驗(yàn)和紫外分光光度法提取積雪草中的黃酮類(lèi)化合物，可以對(duì)積雪草中的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)正交試驗(yàn)等一系列的試驗(yàn)確定了最佳提取工藝，選擇的最佳工藝對(duì)提取積雪草全草總黃酮為最佳，用槲皮素或山奈酚標(biāo)準(zhǔn)品作為對(duì)照品，并采用紫外分光光度法進(jìn)行定量分析，這種操作生產(chǎn)成本低，準(zhǔn)確度較高，靈敏度高，重復(fù)性好，是積雪草全草中總黃酮含量測(cè)定的一種實(shí)際的方法[8]。第二章材料2.1材料與試液積雪草藥材：購(gòu)買(mǎi)于廣西南寧某藥材店鋪采摘的新鮮野生積雪草。積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)品：成都埃法生物科技有限公司，純度≧98%。其余試劑均為化學(xué)分析純，均購(gòu)于天津歐博凱化工有限公司。2.2主要儀器電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海喆宣機(jī)械制造廠）。數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海力辰邦西儀器科技有限公司）。高速萬(wàn)能粉碎機(jī)FW-100型(北京永光明醫(yī)療儀器有限公司)。德森DSA50-JY2超聲波清洗機(jī)（德森精工有限公司）。德國(guó)賽多利斯BSA120型萬(wàn)分之一分析天平（深圳林濤儀器有限公司）。UV-721紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）。第三章試驗(yàn)方法3.1樣品處理將購(gòu)買(mǎi)的新鮮的積雪草藥材洗凈后，放入60℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥30分鐘，烘干后用萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目篩，得積雪草粗品備用。3.2試驗(yàn)方法3.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取積雪草苷對(duì)照品適量，加乙醇溶解并稀釋制成每1ml含0.2mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。3.2.2供試品溶液的制備精密量取積雪草粗品2.00g放入錐形瓶中，在一定濃度的乙醇溶液下，一定的料液比，一定的超聲時(shí)間條件下提取兩次，抽濾得濾液，將濾液合并，將濾液放置在恒溫水浴鍋濃縮濾液至20ml，放置100ml容量瓶中，加乙醇稀釋定容置刻度，即得供試品溶液。3.2.3積雪草總苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備參考陸興毅的積雪草總苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法，進(jìn)行稍加修改，試驗(yàn)步驟如下：精密量取上述對(duì)照品溶液（0.2mg/ml）0.02，0.04，0.06，0.08，0.10mL于10ml試管中，分別標(biāo)號(hào)為1，2，3，4，5，其中取試劑無(wú)水乙醇作為空白對(duì)照，將所有試管放置在恒溫水浴鍋中蒸發(fā)揮去溶劑，待溶液冷卻后，加入硫酸3ml，搖勻，然后放在85℃的水浴鍋中繼續(xù)加熱45min，待溶液冷卻后，放在冰浴冷卻后加入乙醇75ml，攪拌，把試管取出放置到室溫溫度，繼續(xù)加乙醇溶液稀釋定容至刻度，搖勻后取適量在紫外分光光度測(cè)定儀上檢測(cè)，在276nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，同時(shí)做空白試驗(yàn)。以吸光度為A縱坐標(biāo)，積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度c為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。3.2.4積雪草中積雪草苷的含量測(cè)定取適量供試品溶液，按照積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)曲線下的操作測(cè)定樣品吸光度A，并根據(jù)回歸方程計(jì)算積雪草苷的提取率。3.2.5積雪草中積雪草苷的提取率計(jì)算提取率= 積雪草苷提取液濃度×定容體積×稀釋倍數(shù) ×100%積雪草苷粗粉質(zhì)量 3.3單因素試驗(yàn)3.3.1乙醇濃度的單因素試驗(yàn)稱(chēng)取20mg積雪草粗粉，在料液比1:10mg/mL，超聲時(shí)間50min，提取溫度65℃的條件下進(jìn)行提取，計(jì)算當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為55%，60%，65%，70%，75%，80%，85%時(shí)的吸光度A值，并計(jì)算對(duì)積雪草中積雪草苷的提取率。3.3.2料液比的單因素試驗(yàn)稱(chēng)取20mg積雪草粗粉，在乙醇濃度為60%，超聲時(shí)間50min，提取溫度65℃的條件下進(jìn)行提取，計(jì)算當(dāng)料液比分別為1:5，1:10，1:15，1:20，1:30，1:35mg/mL時(shí)吸光度A值，并計(jì)算對(duì)積雪草中積雪草苷的提取率。3.3.3超聲時(shí)間的單因素試驗(yàn)稱(chēng)取20mg積雪草粗粉，在乙醇濃度為60%，料液比1:10，提取溫度65℃的條件下進(jìn)行提取，計(jì)算當(dāng)超聲時(shí)間分別為10，20，30，40，50，60，70min時(shí)吸光度A值，并計(jì)算對(duì)積雪草中積雪草苷的提取率。3.3.4提取次數(shù)的單因素試驗(yàn)稱(chēng)取20mg積雪草粗粉，在乙醇濃度為60%，料液比1：10，超聲時(shí)間50min的條件下進(jìn)行提取，計(jì)算當(dāng)提取次數(shù)分別為1，2，3，4，5次時(shí)吸光度A值，并計(jì)算對(duì)積雪草中積雪草苷的提取率。3.4正交試驗(yàn)根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以乙醇濃度A、料液比B、超聲時(shí)間C、提取次數(shù)D為影響因素，采用正交試驗(yàn)L9(34)法，考察4個(gè)因素對(duì)積雪草苷提取率的影響，選取最佳提取工藝條件。正交試驗(yàn)因素水平表見(jiàn)下表3-1。乙醇濃度（%）超聲時(shí)間（min)料液比(mg/ml）提取次數(shù)155301:101265501:152375701:203表3-1

第四章結(jié)果與分析4.1積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)曲線依照2.2.3下積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法，以吸光度為A縱坐標(biāo)，積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度c為橫坐標(biāo)所繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。積雪草苷相應(yīng)數(shù)據(jù)如表4-1。試驗(yàn)編號(hào)12345濃度（mg/ml）0.20.40.60.81吸光度0.1720.3260.4680.6170.772表4-1求得的回歸線方程為A=4.545C+0.0777，r2=0.9998。表明在濃度在0.02-0.1mg/ml范圍內(nèi)的積雪草苷與吸光度有良好的線性關(guān)系。4.1.1精密度試驗(yàn)精密量取同一份供試品溶液，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下同法操作6次，考察經(jīng)6次測(cè)定后吸光度結(jié)果之間的接近程度。結(jié)果，RSD=1.53%（n=6），表示儀器的精密度好。4.1.2重復(fù)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取2mg積雪草藥材備用品，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下制備供試品6份，分別進(jìn)行吸光度檢測(cè)。結(jié)果，RSD=1.72%，（n=6），說(shuō)明該方法的重復(fù)性好。4.1.3穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取同一份供試品溶液適量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下同法操作，測(cè)定供試品溶液在10min，20min，30min，40min，50min，60min的吸光度值。結(jié)果，RSD=1.63%（n=6），說(shuō)明該供試品溶液在1h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。3.1.4加樣回收試驗(yàn)取已知被測(cè)成分含量為0.10mg/ml的供試品6份，加入精密量取的對(duì)照品溶液0.05ml，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下同法操作。結(jié)果，積雪草苷的平均回收率為100.07%，RSD=1.34%（n=6），說(shuō)明該方法的回收率好。4.2單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析4.2.1乙醇濃度對(duì)積雪草苷提取率的影響由圖2可知，隨著乙醇濃度的提高，積雪草中積雪草苷的提取率也隨之增加，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到75%時(shí)，提取率最高，隨后隨著乙醇濃度的增高提取率反而呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。這可能是因?yàn)槠鸪蹼S乙醇濃度的增加，根據(jù)積雪草苷中含有大量羥基的性質(zhì)以及與乙醇溶液存在“相似相溶”的原理，使得積雪草苷從藥材中溶解出來(lái)，含量不斷增加；當(dāng)乙醇濃度≧75%時(shí)，提取液里可能有積雪草的苷元和除積雪草苷以外的其他物質(zhì)，從而影響了積雪草苷的提取。4.2.2超聲時(shí)間對(duì)積雪草苷提取率的影響當(dāng)超聲時(shí)間從10min增加到50min時(shí)，積雪草苷的提取率都呈現(xiàn)為明顯的上升趨勢(shì)，在超聲時(shí)間為50min時(shí)是提取率的最大值，隨著超聲取時(shí)間的繼續(xù)增加，提取率呈現(xiàn)平穩(wěn)的緩慢的略微的下降趨勢(shì)?？赡苁且?yàn)樵诔晻r(shí)間為50min時(shí)，提取物已經(jīng)達(dá)到了飽和，繼續(xù)超聲，可能會(huì)進(jìn)一步增加雜質(zhì)的溶出，從而使提取率下降。也可能是因?yàn)槌晻r(shí)間的增加而破壞了積雪草苷化學(xué)結(jié)構(gòu)，而導(dǎo)致提取率的下降，還需要進(jìn)一步進(jìn)行研究。4.2.3料液比對(duì)積雪草苷提取率的影響料液比從1:5增加到1:10，提取率上升，且當(dāng)料液比為1:10時(shí)，提取率已達(dá)到最大值，隨著料液比的繼續(xù)增大，提取率已經(jīng)呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì)。這可能是因?yàn)樗幉呐c溶劑的接觸表面積已經(jīng)達(dá)到最大，即使再增加增大溶劑用量也不會(huì)增加提取效果，反而會(huì)起到抑制作用，可能因?yàn)槿芤毫康脑黾佣瓜♂屃巳芤旱臐舛?，提取率就?huì)降低，也會(huì)造成溶劑不必要的浪費(fèi)。4.2.4提取次數(shù)對(duì)積雪草苷提取率的影響隨著提取次數(shù)的增加，積雪草苷的提取率表現(xiàn)為先上升后下降趨勢(shì)，當(dāng)提取次數(shù)達(dá)到3次時(shí)，提取率達(dá)到最高，繼續(xù)增加提取次數(shù)，沒(méi)有使提取率增加反而呈下降趨勢(shì)。提取次數(shù)的增加一方面可以提高藥材有效物質(zhì)的再次擴(kuò)散和溶出，但同時(shí)雜質(zhì)的溶出也會(huì)增加，而導(dǎo)致提取率的下降。4.3正交試驗(yàn)結(jié)果分析分別稱(chēng)取積雪草的粗粉10mg，一共9份，根據(jù)表1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表設(shè)計(jì)4因素3水平對(duì)積雪草苷提取條件進(jìn)行工藝優(yōu)化，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。A、B、C、D分別代表乙醇濃度、料液比、超聲時(shí)間、提取次數(shù)。正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析如表4-2。試驗(yàn)組/因素ABCD提取率111110.662212220.752313330.785421230.896522310.799623120.863731320.962832131.137933210.884K12.2032.522.6622.345K22.5582.6882.5322.577K32.9832.5322.5462.818K10.7340.840.8870.782K20.8220.8960.8440.839K30.9770.8440.8490.939R0.2430.0560.0430.157表4-2由表4-2數(shù)據(jù)對(duì)正交試驗(yàn)進(jìn)行極差分析，4個(gè)因素對(duì)積雪草苷提取率影響從大到小依次為：A>D>B>C，即乙醇濃度>提取次數(shù)>超聲時(shí)間>料液比，其中影響比較大的是乙醇溶劑的濃度和提取的次數(shù)，超聲時(shí)間和料液比影響相對(duì)較小。并且從結(jié)果中可以看出，提取的最佳水平組合為A3B2C1D3，即當(dāng)提取條件為乙醇濃度為75%，超聲時(shí)間為50min，料液比為1：10，提取次數(shù)為3次時(shí)，從積雪草中提取得到積雪草苷的提取率最高，A3B2C1D3組合也是正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)中的第8組，提取率也是達(dá)到了1.137%。通過(guò)對(duì)正交試驗(yàn)和單因素試驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比分析，最佳水平組合的結(jié)果一致，為了獲得最大的提取率，在提取過(guò)程中要嚴(yán)格掌控乙醇濃度和提取的次數(shù)。4.4正交試驗(yàn)最佳工藝條件的驗(yàn)證試驗(yàn)對(duì)正交實(shí)驗(yàn)獲得的最佳水平組合做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。取積雪草粗粉10mg，按A3B2C1D3組合條件進(jìn)行3次平行提取實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。計(jì)算得到積雪草中積雪草苷的平均提取率為1.249％，并且每一組的提取率都比正交試驗(yàn)得出的最優(yōu)水平組合的提取率高，說(shuō)明該最佳水平組合提取條件效果可行的，是最佳的工藝條件。正交實(shí)驗(yàn)的最佳水平組合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4-3。試驗(yàn)次數(shù)積雪草質(zhì)量(mg)積雪草苷提取率（%）平均提取率（%）1101.2331.2492101.2613101.252表4-34.5用超聲波-乙醇提取法提取積雪草苷與乙醇浸漬提取方法的作比較取10mg的積雪草粗粉，用超聲波-乙醇提取法和乙醇浸漬提取法(乙醇浸漬提取法參照賈廣韜的實(shí)驗(yàn)方法)，兩種實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)條件和結(jié)果如表4-4。提取方法/提取條件乙醇濃度（%）料液比粉碎粒度（目）提取時(shí)間(min)提取次數(shù)提取率（%）超聲波-乙醇法75%1:108070min31.262乙醇浸漬法70%1:1080120min30.897從表中我們可以看出，用超聲波-乙醇法比乙醇浸漬提取法得到積雪草苷提取率大，在料液比，提取次數(shù)一樣的情況下，乙醇浸漬提取法用的提取所用時(shí)間差不多是超聲波輔助乙醇提取法的兩倍，說(shuō)明超聲波輔助乙醇提取法，在超聲波的作用下加速了乙醇溶劑進(jìn)入藥材的速度，提高了藥材有效物質(zhì)的溶解和提取，而傳統(tǒng)的乙醇浸漬提取法，也有助于對(duì)藥材有效物質(zhì)的提取，但提取時(shí)間很長(zhǎng)，提取率為0.897％，提取效果沒(méi)有超聲輔助乙醇的提取效果好；而且提取的時(shí)間長(zhǎng)，消耗的的資源也相對(duì)增多。另外，我們也可以看出，相對(duì)高一點(diǎn)的乙醇濃度也有助于提高提取率，這可能是因?yàn)檩^高濃度的乙醇與藥材提取物細(xì)胞之前產(chǎn)生較大的濃度差，進(jìn)一步促進(jìn)了藥物有效物質(zhì)的溶出和提取。另外在侯文硯的實(shí)驗(yàn)研究中也表明用超聲波提取的積雪草苷提取率高于傳統(tǒng)的乙醇溶劑回流提取法提取的積雪草苷。綜上所述，超聲波輔助乙醇的提取效果比傳統(tǒng)的乙醇溶劑提取效果好。

第五章討論與結(jié)論積雪草生長(zhǎng)普遍，積雪草提取物在藥品、化妝品等上都有廣泛的應(yīng)用，如何利用現(xiàn)有的中藥提取技術(shù)高效地進(jìn)行藥材有效成分的提取成為現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)。積雪草中苷類(lèi)化合物：積雪草苷、羥基積雪草苷及它們的同系物積雪草苷B是發(fā)揮其藥理作用的主要有效成分[18]。目前，有以下幾種的苷類(lèi)化合物提取的方法：乙醇溶劑提取法、超聲波提取法、超濾提取法、微波提取法、酶法提取、閃式提取法、高壓提取法和超臨界CO2萃取法等。在本次使用超聲波-乙醇提取法中，從正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以看出乙醇濃度和提取次數(shù)成為了影響積雪草苷提取率比較大的影響因素。根據(jù)上圖積雪草苷的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，乙醇濃度成為影響較大的因素這可能是因?yàn)?，積雪草苷的結(jié)構(gòu)含有很多的羥基，極性大，根據(jù)“相似相溶”的原理，可以知道，當(dāng)乙醇濃度較低時(shí)，水溶性成分含量多，積雪草苷的提取率增加，而當(dāng)乙醇濃度過(guò)高時(shí)，溶劑的極性下降，積雪草的提取率反而下降。所以要注意觀察和控制好乙醇溶劑的濃度，才有利于提高提取的效果，否則，乙醇濃度過(guò)高將會(huì)對(duì)提取物的溶出產(chǎn)生很大的影響。提取次數(shù)成為影響較大的因素可能是因?yàn)椋S著提取的次數(shù)過(guò)多，提取出的雜質(zhì)也會(huì)隨著增加，提取率就會(huì)降低；提取次數(shù)多，耗費(fèi)的資源也多，所以要找到適合的提取次數(shù)，在能提取出基本所需的有效物質(zhì)的情況下，盡量使用較少的提取次數(shù)，達(dá)到節(jié)約資源和成本的要求。根據(jù)與傳統(tǒng)提取技術(shù)作了實(shí)驗(yàn)對(duì)比以及超聲波-乙醇法自身?yè)碛械目栈?yīng)、熱效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)等特點(diǎn)來(lái)增加有效物質(zhì)的溶出和提取。另外超聲波不需要高溫，一般在40攝氏度至50攝氏度水溫中進(jìn)行，有一定殺菌作用。超聲波在破壞細(xì)胞壁時(shí)，具有在加速有效成分溶出同時(shí)還不破壞成分活性的優(yōu)點(diǎn)，與傳統(tǒng)酶提法、水提法、傳統(tǒng)醇提取工藝相比，超聲波能更好地破壞積雪草的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，促進(jìn)羥基積雪草苷的流出，有較高的提取率；與索氏回流提取工藝相比，耗時(shí)短，耗能低，所用成本較低；與閃式提取法相比，提取效率較高。超聲波提取法和乙醇溶劑法聯(lián)合運(yùn)用于提取積雪草時(shí)，汲取了兩者的優(yōu)點(diǎn)，大大提高了積雪草有效成分的溶出和提取率。所以比其他提取方法更有它的優(yōu)勢(shì)，具有節(jié)約成本，縮短提取時(shí)間和高效率的優(yōu)點(diǎn)，在走向中藥現(xiàn)代化這一領(lǐng)域中，超聲波輔助乙醇技術(shù)是關(guān)鍵的技術(shù)之一，值得廣泛的推廣和使用。結(jié)論：本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)超聲輔助乙醇提取積雪草中積雪草苷條件進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化后的最佳提取條件為乙醇濃度為75%，超聲時(shí)間為50min，料液比為1：10，提取次數(shù)為3次，提取率也是達(dá)到了1.137%。

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