《水環(huán)境中3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺（MDMA）和3,4-亞甲基二氧基苯丙胺(MDA)含量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》

3水環(huán)境中3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和3,4-亞甲基二氧基苯丙胺(MDA)含量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水環(huán)境樣品中3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和3,4-亞甲基二氧基苯丙胺(MDA)的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水環(huán)境樣品中3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)和3,4-亞甲基二氧基苯丙胺(MDA)含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成文本必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T6041質(zhì)譜分析方法通則GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法HJ/T91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3定義3.1水環(huán)境waterenvironment水環(huán)境是指自然界中水的形成、分布和轉(zhuǎn)化所處空間的環(huán)境，是指圍繞人群空間及可直接或間接影響人類生活和發(fā)展的水體，其正常功能的各種自然因素和有關(guān)的社會因素的總體。本文件中的水環(huán)境指的是生活污水、工業(yè)廢水和自然水體（地表水和地下水）。4方法原理參見DB43/TXXXX-2021。5試劑和材料5.1試劑5.1.1通用要求除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑和實驗一級用水。本標(biāo)準(zhǔn)中所用試劑和溶液的配制，在未注明規(guī)格和配制方法時，均應(yīng)按GB/T603之規(guī)定。45.1.2MDMA和MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液(ρ=1mg/ml）：可用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制或直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.1.3MDMA和MDA混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(ρ=10mg/L將MDMA和MDA的標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。于0~4℃避光、密封保存，使用時應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。5.1.4MDMA和MDA氘代內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液(ρ=0.1mg/ml可用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制或直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶5.1.5MDMA和MDA混合氘代內(nèi)標(biāo)儲備溶液(ρ=1mg/L）：將MDMA和MDA的氘代內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為1mg/L的混合氘代內(nèi)標(biāo)儲備溶液，于0~4℃避光、密封保存，使用時應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。5.1.6MDMA和MDA混合氘代內(nèi)標(biāo)使用液①(ρ=40μg/L）將MDMA和MDA混合氘代內(nèi)標(biāo)儲備溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為40μg/L的混合氘代內(nèi)標(biāo)使用液，于0~4℃避光、密封保存，使用時應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。5.1.7MDMA和MDA混合氘代內(nèi)標(biāo)使用液②(ρ=400ng/L）：將MDMA和MDA混合氘代內(nèi)標(biāo)儲備溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為400ng/L的混合氘代內(nèi)標(biāo)使用液，于0~4℃避光、密封保存，使用時應(yīng)恢復(fù)至室溫，并搖勻。5.1.8甲醇：質(zhì)譜級5.1.9乙腈：質(zhì)譜級5.1.10濃鹽酸：優(yōu)級純5.1.11甲酸：質(zhì)譜級5.1.125%氨水甲醇溶液：將濃氨水與甲醇（5.1.8）以5:95的體積比混勻。5.1.1310%甲醇溶液：將甲醇（5.1.8）與水以1:9的體積比混勻。5.1.140.1%甲酸水溶液：將甲酸（5.1.11）和水以1:999的體積比混勻。5.1.15磷酸鹽緩沖溶液：稱取3.024g磷酸二氫鉀和4.053g磷酸氫二鉀，到20ml水中，混勻，0~4℃保存。5.1.165%甲醇溶液：將甲醇（5.1.8）與水以5:95的體積比混勻。5.1.17甲酸-甲醇溶液：將500ml甲醇（5.1.8）5.1.18異丙醇+乙腈（1+1）：將異丙醇和乙腈（5.1.9）以1:1的體積比混勻。5.1.19氮?dú)猓杭兌取?9.99%。5.2材料5.2.1色譜柱：C18反相高效液相色譜柱3.0mm×150mm,2.7μm或其他等效柱。5.2.2固相萃取柱：離線方法固相萃取柱參考型號為WatersMCX3cc/60mg，在線方法的參考型號為OasisHLBDirectConnectHP（2.1mmI.D.×30mmL.,20μm）。5.2.3水系濾膜：0.45μm或0.22μm。5.2.4有機(jī)系濾膜：0.22μm。6儀器和設(shè)備56.1真空抽濾裝置6.2固相萃取裝置6.3氮吹濃縮或者真空離心濃縮裝置6.4液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀7分析步驟7.1樣品前處理7.1.1離線固相萃取法將待測樣品恢復(fù)至室溫，充分混勻，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至小于2。使用水系濾膜過濾，移取濾液50ml，加入100μL混合氘代內(nèi)標(biāo)使用液①（5.1.6），混勻后進(jìn)行固相萃取，固相萃取參數(shù)見下表1，萃取完成后將洗脫液置于濃縮裝置中40℃濃縮至盡干，用10%甲醇溶液（5.1.13）200uL復(fù)溶，過0.22μm有機(jī)濾膜，待測。以實驗用水為空白樣品，空白樣品與樣品同時、同步驟處理。表1固相萃取條件參數(shù)序號步驟溶劑體積(ml)流速(ml/min)1活化432活化水433上樣/5014淋洗425洗脫5%氨水甲醇427.1.2在線固相萃取法將待測樣品恢復(fù)至室溫，充分混勻，加入濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至小于2。過水系濾膜，移取10ml過濾后水樣，加入0.5ml磷酸緩沖鹽（5.1.15），混勻，準(zhǔn)確移取0.9ml混勻水樣，加入400ng/L的混合氘代內(nèi)標(biāo)溶液（5.1.7）100μL，混勻后經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾，置于樣品瓶中，待測。以實驗用水為空白樣品，空白樣品與樣品同時、同步驟處理。7.2儀器檢測參考條件7.2.1離線固相萃取法儀器參考條件a)柱溫：40℃;b)流動相A相：0.1%甲酸水溶液；c)流動相B相：乙腈；d)流速：0.4ml/min；e)進(jìn)樣量：5μL；6f)洗脫：梯度洗脫，梯度洗脫條件見表2；g)掃描方式：正離子掃描；h)檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測；i)MDMA和MDA及其氘代內(nèi)標(biāo)的定性、定量離子對和碰撞能量條件見表3。表2離線固相萃取法梯度洗脫條件時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.0095.05.02.0095.05.03.0085.06.0045.055.07.0085.085.00.00.0表3MDMA和MDA及其氘代內(nèi)標(biāo)的定性、定量離子對和碰撞能量條件序號母離子（m/z）子離子（m/z）碰撞能(V)13,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺3423,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺-D53433,4-亞甲基二氧基苯丙胺253043,4-亞甲基二氧基苯丙胺-D52530注：對于不同的質(zhì)譜儀器，參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化至最佳。7.2.2在線固相萃取法儀器參考條件a)柱溫：40℃;b)流動相A相：0.1%甲酸水溶液；c)流動相B相：乙腈；d)流速：0.4ml/min；e)洗脫：梯度洗脫，梯度洗脫條件見表4；f)進(jìn)樣量：400μL；g)在線固相萃取條件，萃取液A：水；萃取液B：5%甲醇溶液；萃取液C：甲酸-甲醇溶液；萃取液D：異丙醇+乙腈（1+1）；在線固相萃取程序見表5；h)掃描方式：正離子掃描；i)檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測；7j)MDMA和MDA及其氘代內(nèi)標(biāo)的定性、定量離子對和碰撞能量條件見表2。表4在線固相萃取法梯度洗脫條件時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0.0095.05.05.0095.05.06.0085.09.0045.055.085.085.00.020.000.0表5在線固相萃取程序時間（min）萃取液A（%）萃取液B（%）萃取液C（%）萃取液D（%）流速（ml/min）0.010.00.00.03.02.800.00.00.03.02.840.00.00.03.02.850.00.00.02.05.000.00.00.02.05.010.00.00.02.00.00.00.02.00.00.00.02.00.00.00.02.00.00.00.00.520.000.00.00.00.57.2.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書在規(guī)定時間和頻次內(nèi)對液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行儀器質(zhì)量數(shù)和靈敏度校正，以確保儀器處于最佳測試條件。7.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線建立取與樣品等量的實驗用水，添加混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（5.1.3），使得MDMA和MDA的濃度為1ng/L、5ng/L、10ng/L、50ng/L、100ng/L、250ng/L、500ng/L，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線添加樣品，與樣品平行操作，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，按儀器條件進(jìn)樣分析，記錄保留時間和峰面積，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.2.5試樣和空白測定試樣和空白樣品按照與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的儀器分析條件進(jìn)行測定。8結(jié)果計算與表示8.1計算含量8記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品中目標(biāo)物與相應(yīng)氘代內(nèi)標(biāo)的保留時間和定量離子對峰面積值，以標(biāo)準(zhǔn)曲線中目標(biāo)物與相應(yīng)氘代內(nèi)標(biāo)的定量離子對峰面積比為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)曲線中目標(biāo)物的含量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到線性方程。根據(jù)樣品中目標(biāo)物及相應(yīng)內(nèi)標(biāo)的定量離子對峰面積值，按公式（1）計算出樣品中目標(biāo)物的含量。pi=(Y-a)/b