仿刺參補體AjC3部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備.x課件_第1頁
仿刺參補體AjC3部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備.x課件_第2頁
仿刺參補體AjC3部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備.x課件_第3頁
仿刺參補體AjC3部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備.x課件_第4頁
仿刺參補體AjC3部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備.x課件_第5頁
已閱讀5頁，還剩3頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

仿刺參補體AjC3部分基因的原核表達及多克隆抗體的制備補體C3(AjC3)在仿刺參的固有免疫系統(tǒng)中扮演著重要角色,是補體系統(tǒng)中含量最高的組成成分。補體AjC3產生的一系列裂解物C3a,C3b等能調節(jié)仿刺參免疫系統(tǒng)。補體AjC3還能夠通過形成溶膜復合物清除靶細胞。目前還沒有檢測仿刺參補體AjC3比較靈敏的工具。本實驗的目的是克隆AjC3部分基因片段,原核表達并純化重組蛋白,制備補體AjC3的多克隆抗體,為進一步研究仿刺參補體AjC3的免疫機制奠定基礎。利用PCR技術擴增AjC3基因片段,將該片段與表達載體pGS-21a連接,構建原核表達重組質粒。將鑒定正確的重組表達質粒轉化到Transetta(DE3)中,在不同溫度,時間,IPTG濃度下誘導表達。超聲破碎后,SDS分析重組蛋白的表達形式。表達的重組蛋白經鎳柱純化后,作為抗原免疫小鼠制備AjC3多克隆抗體。間接ELISA檢測抗體的效價,Westernblot檢測抗體的特異性及AjC3蛋白在各組織中的分布。PCR擴增得到長度分別為1185bp(1d),873bp(2d),555bp(3d)的目的片段;基因測序證明成功的構建了pGS-21a-1d,pGS-21a-2d,pGS-21a-3d重組質粒;其中pGS-21a-1d未表達蛋白質,pGS-21a-2d,pGS-21a-3d最佳誘導條件是30℃,0.2mmol/LIPTG,誘導6h;SDS分析表明pGS-21a-2d,pGS-21a-3d均以包涵體的形式表達。鎳柱純化后重組蛋白純度達到90%,pGS-21a-2d表達的重組蛋白分子量約為67KDa,pGS-21a-3d表達的重組蛋白分子量約為56KDa;間接ELISA檢測抗體效價分別為1:400,1:25600;Westernblot結果顯示多克隆抗體具有良好的特異性,AjC3蛋白在體腔液及體壁中均有分布。構建了重組表達載體pGS-21a-1d,pGS-21a-2d,pGS-21a-3d;純化獲得了重組蛋白;成功制備了具有高效價和特異性的補體AjC3多克隆抗

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論