大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定

實驗一大黃中蒽醌類成分的提取、別離和鑒定實驗目的：1、熟悉蒽醌類成分的提取別離方法。2、掌握PH梯度提取法的原理和操作技術。3、學習用硅膠柱色譜法別離大黃酚和大黃素甲醚。4、學習羥基蒽醌類化合物的鑒定方法。編輯課件實驗原理：本實驗根據大黃中的蒽醌苷類在酸性條件下加熱，可水解成游離羥基蒽醌和糖，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于乙醚、氯仿等親脂性有機溶劑的性質，從水解物中將游離羥基蒽醌提出。再利用游離羥基蒽醌的酸性不同，采用PH梯度萃取法將其別離。編輯課件大黃酸

R1=HR2=COOH大黃素R1=CH3R2=OH蘆薈大黃素R1=CH2OHR2=H大黃素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黃酚R1=CH3R2=H編輯課件實驗器材：試藥：大黃粗粉、牛黃上清丸、含水氯仿〔水飽和〕、甲醇、乙醚、20%硫酸溶液、冰醋酸、5%碳酸氫鈉溶液、5%碳酸鈉溶液、0.25%氫氧化鈉溶液、5%氫氧化鈉溶液、鹽酸、丙酮、乙酸乙酯、醋酸鎂、柱層析用硅膠〔100～200目〕、硅膠-CMC硬板、石油醚〔沸程60-90℃〕-乙酸乙酯〔15∶1〕、石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸〔15∶5∶1〕等儀器：回流裝置一套、蒸發(fā)皿、層析槽、試管、梨形分液漏斗、水浴鍋、電爐、薄層板、點樣毛細管等編輯課件實驗內容與方法：一、游離蒽醌的提取稱取大黃粗粉50g，加20%硫酸溶液50ml，充分攪拌混勻，加氯仿200ml，熱水浴上回流提取1小時，過濾得氯仿濾液。藥渣繼用氯仿200ml回流1小時，過濾，合并兩次氯仿提取液于圓底燒瓶中，加沸石數粒，水浴上蒸餾回收氯仿至200毫升〔可減壓抽干氯仿〕。編輯課件二、PH梯度萃取別離1.大黃酸的別離和精制：將含有總蒽醌的氯仿液放入分液漏斗中，加5%碳酸氫鈉溶液萃取數次〔每次20～30m1〕，至萃取堿水液呈淡紅色為止。合并萃取堿液，加鹽酸至呈酸性〔PH2～3〕，析出黃色沉淀。過濾，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性。枯燥后加冰醋酸10ml加熱溶解，趁熱過濾，濾液放置析晶，過濾，用少量冰醋酸淋洗結晶，得黃色針狀結晶為大黃酸。編輯課件2.大黃素的別離和精制：用碳酸氫鈉液萃取后的氯仿液加5%碳酸鈉溶液萃取數次〔每次20～30m1〕，〔方法同上述碳酸氫鈉溶液的處理〕。萃取液經酸化后析出棕黃色沉淀，過濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀經枯燥后，用15ml丙酮熱溶，趁熱過濾，濾液靜置，析出橙色針狀結晶，過濾后，用少量丙酮淋洗結晶，得大黃素。編輯課件3.蘆薈大黃素的別離和精制：用碳酸鈉液萃取后的氯仿液加0.25%氫氧化鈉溶液萃取數次〔每次20～30m1〕，〔方法同上述碳酸氫鈉溶液的處理〕。萃取液經酸化后析出黃色沉淀，過濾，水洗至中性，枯燥，用10ml乙酸乙酯精制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。編輯課件4.大黃酚和大黃素甲醚的別離和精制：萃取除去蘆薈大黃素后余下的氯仿層，再用5%氫氧化鈉溶液200ml分兩次萃取，至堿水液呈無色為止，合并堿水層，加鹽酸至呈酸性〔PH2～3〕，析出黃色沉淀，過濾，水洗至中性，枯燥，為大黃酚和大黃素甲醚的混合物。將此混合物溶于乙酸乙酯，用硅膠柱色譜別離。編輯課件5.柱層析法別離大黃酚和大黃素甲醚〔1〕裝柱取一玻璃層析柱，垂直固定在鐵架臺上，在管的下端墊入少量棉花，裝入100～200目硅膠〔約1/3高，濕法裝柱〕。〔2〕上樣將樣品置于小蒸發(fā)皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅膠拌和均勻，并于水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的硅膠裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。〔3〕洗脫將色譜柱活塞翻開，洗脫劑為石油醚〔沸程60-90℃〕-乙酸乙酯〔15∶1〕混合液?！?〕收集洗脫液25ml一份，分別收集，回收溶劑至小體積，放置，即可析出結晶，合并相同晶形局部。先洗脫下的化合物為大黃酚，后洗脫下的化合物為大黃素甲醚。編輯課件三、鑒定1、蒽醌類成分化學鑒定〔1〕堿液試驗分別取各蒽醌結晶數毫克置于小試管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml，觀察顏色變化。凡有互為鄰位或對位羥基的蒽醌呈藍紫至藍色，其它羥基蒽醌呈紅色?！?〕醋酸鎂試驗分別取蒽醌結晶數毫克，置于小試管中，各加乙醇1ml使溶解，滴加0.5%醋酸鎂乙醇溶液，觀察顏色變化。編輯課件2、薄層層析檢識對照品的處理：取牛黃上清丸制劑〔含大黃〕3克,切碎,加甲醇50m1冷浸24小時,過濾,取濾液5m1蒸干,殘渣加水10m1使溶解,加鹽酸1m1,置水浴上加熱30分鐘,冷卻,用乙醚20m1分兩次萃取,合并乙醚液,蒸干,殘渣加乙酸乙酯使溶解成1m1,為供試品溶液。吸附劑：硅膠G-CMC-Na板展開劑：石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸〔15∶5∶1〕上層溶液點樣：提取的大黃酸、