醫(yī)院檢驗科培訓課件：《定量檢驗性能驗證要點分析》

定量檢驗性能驗證要點分析主要內容性能驗證的背景性能驗證的條件性能驗證的內容和方法性能驗證實例和要點分析背景實驗室質量和能力的認可和評價在國內和國外都有很多權威機構實驗室質量和能力性能驗證背景《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》：質量、能力、性能驗證背景ISO15189：2012《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》未來實驗室的必經之路CLIA實驗室主要有三個機構監(jiān)管醫(yī)療保險和醫(yī)療補助服務中心（CMS）疾病控制和預防中心（CDC）美國食品和藥物管理局（FDA）獲得CLIA認證，實驗室出具的檢測報告和結果數(shù)據(jù)，將獲得美國醫(yī)療保險、醫(yī)療救助機構及FDA的認可背景美國CLIA認證美國病理學會對臨床實驗室進行的認可活動它主要參照了CLIA-88

的標準美國的法律法規(guī)背景CAP認證大多數(shù)國家包括中國都部分依賴CLSI發(fā)布的方法和標準指南EP16-A、EP5-A、C28背景美國【臨床實驗室標準化協(xié)會】CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）驗證：通過提供客觀證據(jù)證明特定的要求得到滿足的認定

（“verification”：broadlyas“confirmationthroughtheprovisionofobjectiveevidence,thatspecifiedrequirementshavebeenfulfilled”.）

性能驗證（CLIA）：特指使用某種檢測方法的實驗室按照所提供的試劑盒或檢測系統(tǒng)說明書使用時，能復現(xiàn)生產廠家所宣稱的檢測性能

（CLIAusestheterm“verification”：specificallytorelatetoconfirmationthatthelaboratoryusingatestcanreplicatethemanufacturer’sperformanceclaimswhenthetestisusedaccordingtothepackageinsert.）性能驗證（verification）《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》（ISO15189：2012）5.5.1檢驗程序的選擇、驗證和確認5.5.1.1總則實驗室應選擇預期用途經過確認的檢驗程序。每一檢驗程序的規(guī)定要求（性能特征）應與該檢驗的預期用途相關5.5.1.2檢驗程序驗證(Verification)未經修改而使用的已確認的檢驗程序在常規(guī)使用前，應經過實驗室的獨立驗證臨床應用價值預期用途1.疾病的篩查（提示）2.鑒別診斷（確認或驗證）3.療效觀察4.預后判斷5.用藥指導檢驗程序檢驗結果性能驗證的意義性能驗證是為了確保實驗室所用檢測系統(tǒng)的分析性能或檢驗項目的方法學(檢驗程序)能夠滿足檢測和臨床要求，從而保證患者標本檢測結果準確可靠性能驗證的評價方法定量分析臨床應用價值結果的準確可靠精密度正確度線性范圍/臨床可報告范圍生物參考區(qū)間性能驗證的時機新安裝的儀器擬開展的項目新開展項目同一項目的試劑變更廠家或檢驗方法發(fā)生變更時試劑升級、儀器更新、校準品溯源性改變等儀器搬遷等嚴重影響檢驗程序分析性能性能驗證的過程性能驗證的過程人機料法環(huán)性能驗證的過程性能驗證過程人人員培訓儀器、試劑的常規(guī)操作：校準、質控、維護性能驗證的數(shù)據(jù)處理：判定標準、最終報告人員資質儀器操作報告處理：中級以上人員人員分配時間分配：收集標本時間、驗證時間測試項目分配、驗證類別分配性能驗證的過程儀器的狀態(tài)性能驗證過程人機儀器的狀態(tài)試劑：批號、有無過期、有無超過穩(wěn)定期質控：批號、有無過期、有無超過穩(wěn)定期、有無失控及處理校準：批號、有無過期、有無超過校準時間驗證過程宜使用同一批號的試劑和校準品性能驗證的過程性能驗證過程機料試劑正確的位置同一批號有效期穩(wěn)定期試劑消耗品正確的位置正確的配比和配制質控和校準品同一批號有效期穩(wěn)定期驗證的標本標準物質臨床樣本外借樣本質控品常用小工具和耗材加樣槍校準新的槍頭新的反應杯干凈的滴定管法法規(guī)標準文件科室管理體系文件試劑盒說明書方法精密度正確度線性范圍/臨床可報告范圍生物參考區(qū)間性能驗證的過程法規(guī)標準文件CNAS的各種指導文件國標文件、衛(wèi)生行業(yè)標準CLSI文件指南CLAI文件指南科室管理體系文件試劑盒說明書法規(guī)方法-精密度精密度在規(guī)定條件下，多次重復測定同一量值時各測定值之間彼此相符合的程度包括：重復性、再現(xiàn)性、中間精密度、實驗室內精密度方法-精密度精密度---驗證要求CLSI頒布的EP15-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》應同時驗證重復性和中間精密度用于精密度驗證的樣本應具有很好的穩(wěn)定性和均一性樣本濃度至少含兩個濃度水平應盡可能與廠家精密度評價時所用樣本濃度一致宜確定醫(yī)學決定水平處的精密度方法-精密度樣本每個濃度測定的最低要求是每批測3次，測定5天獲得的數(shù)據(jù)按照《WS/T420-2013》或《WS/T492-2016》或EP15-A2的要求進行分析精密度---方案1《WS/T420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》《WS/T492-2016臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》

CLSIEP15-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》方法-精密度重復性：每個濃度樣本批內重復測定20次，使用濃度對數(shù)值計算不同濃度時的測量精密度中間精密度：每個濃度樣本連續(xù)測定20天，每天測定1次獲得的數(shù)據(jù)按照《WS/T420-2013》或《WS/T492-2016》或EP15-A2的要求進行分析精密度---方案2《WS/T420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》《WS/T492-2016臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》

CLSIEP15-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》方法-精密度1、2方案不可用或樣本量不足時（核酸擴增試劑盒)重復性：每個濃度樣本批內重復測定10次中間精密度：每個濃度樣本連續(xù)測定10天，每天測定1次獲得的數(shù)據(jù)按照《WS/T420-2013》或《WS/T492-2016》或EP15-A2的要求進行分析精密度---方案3《WS/T420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》《WS/T492-2016臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》

CLSIEP15-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》方法-精密度批內精密度＜1/4TEa或說明書給出允許CV為符合批間精密度＜1/3TEa或說明書給出允許CV為符合精密度---判斷標準方法-正確度真實度，大量（無限）測量值的均值與真值（參考量值）的接近程度（一致程度）正確度---定義和法規(guī)方法-正確度測定具有溯源性的標準物質物質參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評樣本室間比對：要求與使用相同檢測方法的、質量保證措施較好的、或已獲認可或的實驗室，或與使用配套分析系統(tǒng)的實驗室進行比對正確度---要求方法-正確度正確度---方案1測定具有溯源性的標準物質物質國家標準物質（如GBW）國際標準物質（如WHO、IFCC）CNAS認可的標準物質正確度控制品CNAS認可的正確度驗證樣本每個濃度水平的標準物質樣本至少每天重復測定2次，連續(xù)測定5天記錄檢測結果，計算偏倚比較分析方法-正確度參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評，用回報結果作為評價指標，測定值在允許范圍內，且符合率≥80%則通過正確度驗證對3個不同水平的室間質評樣本每個測定2次，測定均值與靶值的偏倚小于衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評的允許誤差表示準確度可以接受正確度---方案2方法-正確度樣本室間比對：要求與使用相同檢測方法的、質量保證措施較好的、已獲認可實驗室，使用配套分析系統(tǒng)的實驗室進行比對正確度---方案3CNAS-CL02-A003：2018醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明方法-線性范圍/臨床可報告范圍

線性范圍---釋義臨床可報告范圍---釋義線性范圍（LinearRange)是指系統(tǒng)最終的輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃度成正比的范圍臨床可報告范圍（ClinicallyReportableRange)是指對標本采用稀釋、濃縮或者其他預處理來擴展直接分析測量值的范圍方法-線性范圍/臨床可報告范圍應用高、低濃度的標本配制至少5-7種不同濃度應在一批內完成各濃度標本檢測，每份標本至少測定2次做線性回歸圖計算線性回歸方程式y(tǒng)=ax+b和相關系數(shù)r判斷標準：每點實測均值與預期值偏差應<1/2TEa；r≥0.975（r2≥0.95）；b在1±0.03范圍內，則符合標準

線性范圍---方案方法-線性范圍/臨床可報告范圍臨床可報告范圍---方案

準備3份樣本在線性高限1/3內樣本采用項目最大稀釋倍數(shù)或臨床需求倍數(shù)進行手動稀釋每個樣本重復三次計算還原濃度與原始濃度相對偏倚判斷標準:相對偏倚＜1/2TEa或說明書給出允許CV為符合

方法-生物參考區(qū)間生物參考區(qū)間在參考人群中進行抽樣和根據(jù)該項目檢驗結果的分布特征用統(tǒng)計學方法處理后得出的衡量該項目是否異常的指標常采用參考人群的95%區(qū)間方法-生物參考區(qū)間生物參考區(qū)間---驗證要求和方案驗證已知參考區(qū)間在本實驗室應用的可接受性衛(wèi)生行業(yè)標準、國家標準、試劑盒說明書、權威的指南共識選擇20份體檢合格的健康人標本，在檢測系統(tǒng)上進行測定，若20份標本的檢測結果均在儀器說明書提供的參考區(qū)間內或僅有2個標本超出，則驗證通過性能驗證的過程性能驗證過程環(huán)溫濕度冬季夏季用水儀器用水消毒用水生物安全人員操作試劑、標本的存儲和運輸AST檢測項目的性能驗證性能驗證實例及要點分析性能驗證實例及要點分析驗證前的準備人員培訓儀器操作驗證試驗數(shù)據(jù)處理生物安全人員分配收集標本儀器操作整理數(shù)據(jù)整理報告收集標本時間高值標本驗證時間一天做完連續(xù)5天同一時間性能驗證實例及要點分析精密度的判定標準：以國家標準為準性能驗證實例及要點分析精密度標本濃度的選擇可采用新鮮或凍存的樣本當待測物不穩(wěn)定或樣本不易得到時，可考慮使用質控品有明確醫(yī)學決定水平的濃度水平在生物參考區(qū)間上限左右選一個濃度，再根據(jù)檢驗項目的特點在測量線性區(qū)間內選擇另一個濃度線性范圍標本濃度的選擇線性高值的30%以內，低值的50%以內沒有達標的高值標本，選一個月以內的最高濃度先驗證，以后再補若不易獲得低濃度標本，可通過不含被測物的患者標本稀釋獲得標本的選擇和留取方法-生物參考區(qū)間生物參考區(qū)間標本關鍵在于——篩選“健康人群”體檢人群一次通過沒有通過應該反查納入人群是否有問題，而不是懷疑生物參考區(qū)間本身有問題排除標準：經常喝酒近期患病獻血者哺乳期血壓不正常肥胖吸毒特殊職業(yè)正在服用醫(yī)生開方的藥物