動(dòng)物檢疫學(xué)-高致病性禽流感

高致病性禽流感(avianInfluenza)

1編輯課件高致病性禽流感是禽流行性感冒的簡(jiǎn)稱，它是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病。禽流感病毒感染后可以表現(xiàn)為輕度的呼吸道和消化道病癥，死亡率較低；或表現(xiàn)為較嚴(yán)重的全身性、出血性、敗血性病癥，死亡率較高。2編輯課件非致病性禽流感不會(huì)引起明顯病癥，僅使染病的禽鳥體內(nèi)產(chǎn)生病毒抗體。低致病性禽流感可使禽類出現(xiàn)輕度呼吸道病癥,食量減少、產(chǎn)蛋量下降，出現(xiàn)零星死亡。高致病性禽流感最為嚴(yán)重，發(fā)病率和死亡率高。感染的雞群常?！叭姼矝](méi)〞。

按病原體的致病性，禽流感可分為:3編輯課件高致病性禽流感因其在禽類中傳播快、危害大、病死率高等特點(diǎn)，被國(guó)際獸疫局定為A類傳染病，又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。現(xiàn)為通報(bào)性疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。4編輯課件近年來(lái)出現(xiàn)了禽流感病毒感染人的事例：1997年中國(guó)香港禽流感爆發(fā)，有12人感染H5N1型禽流感病毒，6人死亡，這是世界上首次證實(shí)禽流感感染人類；2003年4月荷蘭發(fā)生H7N7型禽流感，人類感染者達(dá)89人，并出現(xiàn)了死亡病例；2003年11月27日，香港一男童感染禽流感；5編輯課件2003年12月至2004年2月，韓國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣、日本、越南、印尼、巴基斯坦、老撾、泰國(guó)、中國(guó)大陸、美國(guó)和加拿大等國(guó)家和地區(qū)相繼爆發(fā)禽流感，其中在越南和泰國(guó)又出現(xiàn)了禽流感〔H5N1〕感染人類的病例，并出現(xiàn)了死亡。2004年禽流感的大爆發(fā)，給世界人民帶來(lái)極大的恐慌。6編輯課件2005年4月，我國(guó)青海湖自然保護(hù)區(qū)留鳥感染H5N1毒株，約6000多只留鳥死亡。2006年亞洲、歐洲、亞洲均有H5N1亞型HPAI爆發(fā)。最近國(guó)內(nèi)外有H5N1血清型引起的禽流感發(fā)病率和死亡率都很高，危害巨大。7編輯課件病原禽流感病毒屬于正粘病毒科流感病毒屬的A型流感病毒。病毒的基因組屬于單股負(fù)鏈RNA。典型的A型流感病毒粒子呈圓球形，有囊膜，對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等脂溶劑敏感。8編輯課件雞瘟病毒9編輯課件根據(jù)流感病毒的血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的抗原性差異，可將其分為不同的亞型。迄今為止，A型禽流感病毒的HA已發(fā)現(xiàn)16種，NA有9種，分別以H1--H16、N1—N9命名。所有的禽流感病毒均屬A型，不同毒株的致病性有差異。10編輯課件禽流感病毒能在雞胚上生長(zhǎng)繁殖。以尿囊腔、羊膜腔或絨毛囊膜上感染時(shí)，強(qiáng)毒株病毒初代感染雞胚后26-36h死亡。禽流感病毒通過(guò)雞胚繼代后增強(qiáng)毒力。除雞胚外，本病毒也能感染鴨胚和鴿胚。犬腎細(xì)胞〔MDCK〕廣泛用于流感病毒的別離培養(yǎng)。非洲綠猴腎細(xì)胞〔Vero〕也適用于A型流感病毒的別離培養(yǎng)。11編輯課件流感病毒能凝集雞、豚鼠、貓、小白鼠、馬、綿羊、人和其他動(dòng)物紅細(xì)胞。對(duì)枯燥和低溫的抵抗力強(qiáng)。低溫和凍干狀態(tài)下可保存病毒。不耐熱，病毒經(jīng)55℃、1h滅活，60℃經(jīng)20min滅活，100℃2分鐘即被滅活。12編輯課件常用消毒劑容易將其滅活，如氧化劑、稀酸、漂白粉和碘劑等都能迅速破壞其活性。13編輯課件流行病學(xué)各種家禽〔火雞、雞、珠雞、石雞、鶴鶉、雉、鵝及鴨〕和野禽〔包括鴨、鵝、磯鷸、燕鷗、鷺、海鷗、天鵝等〕均易感。從遷徙水禽，尤其是鴨中別離的病毒最多；流感在家禽中對(duì)火雞和雞的危害最嚴(yán)重。14編輯課件現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，禽流感病毒能直接感染人，并可引起發(fā)病甚至死亡。在實(shí)驗(yàn)室人工試驗(yàn)中，豬、水貂、猴、貓等均可被禽流感病毒感染。15編輯課件禽流感病毒可通過(guò)消化道和呼吸道進(jìn)入人體傳染給人，也可經(jīng)過(guò)眼結(jié)膜和破損皮膚引起感染。人類直接接觸受禽流感病毒感染的家禽及其糞便或直接接觸禽流感病毒也可以被感染，并可引起發(fā)病甚至死亡。16編輯課件流行特點(diǎn)：發(fā)病急、傳播快、流行范圍廣，常呈地方性或大面積流行，其中高致病性禽流感的發(fā)病率與死亡率均可高達(dá)100%。該病一年四季均可流行，但以冬季和氣溫驟冷驟熱的季節(jié)更易爆發(fā)。17編輯課件臨床檢疫

1、臨床病癥禽流感的病癥依感染禽類的品種、年齡、性別、并發(fā)感染程度、病毒毒力和環(huán)境因素等而有所不同，主要表現(xiàn)為呼吸道、消化道、生殖系統(tǒng)或神經(jīng)系統(tǒng)的異常。18編輯課件病雞頭部腫脹，冠和肉髯發(fā)黑，眼分泌物增多，眼結(jié)膜潮紅、水腫，羽毛蓬松無(wú)光澤，體溫升高；下痢，糞便黃綠色并帶多量的黏液或血液；呼吸困難，歪頭；產(chǎn)蛋率急劇下降或幾乎完全停止，蛋殼變薄、褪色、無(wú)殼蛋、畸形蛋增多；雞腳鱗片下呈紫紅色或紫黑色。在發(fā)病后的5d～7d內(nèi)死亡率幾乎到達(dá)100%。少數(shù)病程較長(zhǎng)或耐過(guò)未死的病雞出現(xiàn)神經(jīng)病癥，包括轉(zhuǎn)圈、前沖、后退、頸部扭歪或后仰望天等。19編輯課件20編輯課件肉髯發(fā)紺21編輯課件雞冠和肉垂腫脹發(fā)紺22編輯課件23編輯課件24編輯課件腳磷片下出血25編輯課件26編輯課件27編輯課件神經(jīng)病癥呼吸病癥28編輯課件禽流感病鴨具有神經(jīng)病癥29編輯課件30編輯課件2、病理變化

最急性型病雞常無(wú)眼觀變化。急性者可見(jiàn)頭部和顏面浮腫，雞冠、肉髯腫大達(dá)三倍以上；皮下有黃色膠樣浸潤(rùn)、出血，胸、腹部脂肪有紫紅色出血斑；心包積水，心外膜有點(diǎn)狀或條紋狀壞死，心肌軟化；病雞胸部肌肉有出血點(diǎn)或出血斑。消化道變化表現(xiàn)為腺胃乳頭水腫、出血，肌胃角質(zhì)層下出血，肌胃與腺胃交界處呈帶狀或環(huán)狀出血；肝、脾、腎瘀血腫大，有灰黃色小壞死灶；31編輯課件呼吸道有大量炎性分泌物或灰黃色干酪樣壞死；胸腺萎縮，有不同程度的點(diǎn)、斑狀出血；法氏囊萎縮或呈黃色水腫，有充血、出血；母雞卵泡充血、出血，卵黃液變稀?。粐?yán)重者卵泡破裂，卵黃散落到腹腔中，形成卵黃性腹膜炎，腹腔中充滿稀薄的卵黃。輸卵管水腫、充血，內(nèi)有漿液性、黏液性或干酪樣物質(zhì)。32編輯課件33編輯課件34編輯課件35編輯課件36編輯課件37編輯課件38編輯課件39編輯課件40編輯課件腳鱗出血〔嚴(yán)重病例〕41編輯課件發(fā)病雞胸肌出血產(chǎn)蛋雞輸卵管中的粘液滲出物流感病雞心冠脂肪出血42編輯課件43編輯課件44編輯課件禽流感病鴨胰腺白壞死點(diǎn)

45編輯課件鵝流感胰46編輯課件實(shí)驗(yàn)室檢疫診斷技術(shù)：我國(guó)已建立瓊脂擴(kuò)散〔AGP〕技術(shù)、亞型分型技術(shù)、病毒分子診斷與檢測(cè)技術(shù)。國(guó)家監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：?流行性感冒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原那么?47編輯課件1、樣品采集：〔1〕病料樣品：至少?gòu)?只病禽和病死禽中采集病料樣品。樣品應(yīng)包括：泄殖腔〔新鮮糞尿樣〕棉拭子和氣管棉拭子〔置于緩沖液體中〕；氣管和肺的混樣；腸管及內(nèi)容物的混樣；肝、脾、腎、腦等其他組織樣品〔不能混樣〕。48編輯課件組織和氣管拭子懸液中參加青霉素〔2000IU/ml〕、鏈霉素〔2mg/ml〕或慶大霉素〔50μg/ml〕。腸管及內(nèi)容物、糞便樣品和泄殖腔棉拭子所用的抗生素濃度應(yīng)提高5倍。49編輯課件〔2〕血樣：分別采集至少10只病禽的，并單獨(dú)存放，不能混合。50編輯課件2、電鏡觀察禽流感病毒一般為球形，直徑為80~120nm，但也常有同樣直徑的絲狀形態(tài)，長(zhǎng)短不一。病毒外表有10~12nm的密集釘狀物或纖突覆蓋，病毒囊膜內(nèi)有螺旋形核衣殼。兩種不同形狀的外表釘狀物是HA〔棒狀三聚體〕和NA〔蘑菇形四聚體〕。51編輯課件3、病毒別離鑒定將感染雞胚或病禽氣管、脾、肺、腎和腦等可用磷酸緩沖液或肉湯培養(yǎng)基制成10倍乳劑，加抗菌素抑菌；如系泄殖腔拭子，可將拭子在溶液中浸漬后去掉拭子，然后用2500-3000r/min離心30min，除殘?jiān)瑸V過(guò)液接種9-11d的SPF雞胚尿囊腔別離病毒。52編輯課件在35-37℃孵化箱內(nèi)孵育，18h后每8h觀察雞胚死亡情況。病毒收獲：無(wú)菌收取18h以后的死胚及96h仍存活的雞胚尿囊液，作血凝試驗(yàn)，以鑒定病毒。陽(yáng)性反響說(shuō)明可能有正粘病毒科的流感病毒；假設(shè)無(wú)血凝活性或血凝價(jià)很低，那么用尿囊液繼續(xù)傳2-3代，并重復(fù)以上血凝試驗(yàn)，假設(shè)仍陰性，那么認(rèn)為病毒別離陰性。53編輯課件4、血清學(xué)檢查瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)〔AGP〕：用于流感病毒型的鑒定，是用病毒的核蛋白抗原檢查血清中的抗體。既可以定性(如免疫雙擴(kuò)散及免疫電泳中以沉淀線判定)，又可以定量(如單輻射擴(kuò)散)。比較簡(jiǎn)便、快捷。54編輯課件血凝試驗(yàn)〔HA〕與血凝抑制試驗(yàn)〔HI〕：證實(shí)流感病毒的血疑活性及排除NDV，也可用病毒抗原鑒定流感病毒的亞型。簡(jiǎn)單的方法是：取1滴1：10稀釋的正常雞血清(最好是SPF雞)和1滴ND抗血清，分別滴于瓷板上，再各加1滴有血凝活性的雞胚尿囊液，混勻后各加1滴5﹪的雞紅細(xì)胞懸液，假設(shè)兩份血清均出現(xiàn)血凝現(xiàn)象，那么說(shuō)明尿囊液中不含有新城疫病毒(NDV)；如果ND抗血清出現(xiàn)HI現(xiàn)象，說(shuō)明尿囊液中含NDV。55編輯課件神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)〔NIT〕：利用流感病毒的糖蛋白神經(jīng)氨酸酶與底物的反響來(lái)檢測(cè)病毒的存在與否。用于鑒定AIV另一種外表抗原——神經(jīng)氨酸酶〔NA〕的亞型。56編輯課件具體方法是：在96孔聚苯乙烯平板反響孔中分別參加已稀釋好的羊膜尿囊液25μl，然后分別參加1-9型已處理的NA抗血清25μl，振蕩混勻，室溫靜置1h，每孔參加25μl胎球蛋白，37℃孵育3h，每孔參加25μl砷試劑至最先出現(xiàn)棕色的孔褪色，最后每孔參加100μl1.6%硫酸巴比妥，將反響板用56℃水漂洗30-60min后判定結(jié)果，呈粉紅色為抗血清NI陰性，無(wú)粉紅色為抗血清NI陽(yáng)性。根據(jù)結(jié)果判定AIV亞型。NIT實(shí)驗(yàn)一般需在AI中心實(shí)驗(yàn)室方可進(jìn)行。57編輯課件ELISA：具有較高的敏感性，既可以檢測(cè)抗體，又可以檢測(cè)抗原。尤其適合于大批樣品的血清學(xué)調(diào)查，可以標(biāo)準(zhǔn)化而且結(jié)果易于分析。在流感的控制、撲滅、檢疫中很有用途。58編輯課件中和試驗(yàn)以中和試驗(yàn)(NT)來(lái)鑒定或滴定流感病毒時(shí)，常用雞胚或組織培養(yǎng)細(xì)胞，操作方法與其他病毒(如NDV)的中和試驗(yàn)相同。取9-10日齡雞胚接種后37℃孵育3-4d，雞胚死亡出現(xiàn)HA活性，表示雞胚感染流感病毒。但由于中和試驗(yàn)的操作相當(dāng)繁瑣，費(fèi)時(shí)間也較長(zhǎng)，試驗(yàn)材料消耗也多，沒(méi)有條件和不必要時(shí)可不進(jìn)行。59編輯課件免疫熒光技術(shù)

常用直接熒光抗體法，即在組織觸(印)片上直接染色，以熒光顯微鏡檢查熒光。一種AIV的熒光抗體可以用來(lái)檢測(cè)同亞型的其他病毒。熒光抗體技術(shù)用于診斷，具