【冬蟲夏草對(duì)治療腎臟疾病的探析進(jìn)展綜述8800字（論文）】

第第VI冬蟲夏草對(duì)治療腎臟疾病的研究進(jìn)展綜述目錄TOC\o"1-3"\h\u13099前言 1114771.糖尿病腎病的進(jìn)展及發(fā)病機(jī)制 18001.1糖尿病腎病的流行病學(xué) 1107721.2糖尿病腎病的病情進(jìn)展 273411.3糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制 381231.3.1遺傳因親 347271.3.2糖代謝異常 3248921.3.3炎癥反應(yīng) 4286512.冬蟲夏草的藥理左右及成分 5171722.1冬蟲夏草的藥理作用 5152102.1.1免疫調(diào)節(jié) 5283272.1.2抗炎 5274302.1.3腎臟保護(hù) 6128552.2冬蟲夏草的活性成分 6270802.2.1多糖 654902.2.2核苷 6290072.2.3甾醇 7326022.2.4氨基酸和多肽 7301473.蟲草治療糖尿病腎病的研究現(xiàn)狀 7247353.1相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法 7262933.1.1動(dòng)物模型制備與分組 7116853.1.2標(biāo)本收集 714523.1.3尿蛋白測(cè)定 835243.1.4血生化指標(biāo)檢測(cè) 8166093.1.5腎組織的光鏡檢查 844913.1.6腎組織的電鏡檢查 9156143.1相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 941003.1.1對(duì)DN大鼠蛋白尿的治療作用 9199023.1.2對(duì)DNKW/BW的影響 929053.1.3對(duì)DN大鼠血清生化指標(biāo)的影響 10237103.1.4對(duì)DN大鼠腎組織病理改變的影響 10161913.1.5對(duì)DN大鼠足突細(xì)胞病變的影響 11302063.3討論 11204954.總結(jié) 1414433參考文獻(xiàn) 15前言在2010年新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志發(fā)表的由中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)實(shí)施的全國(guó)糖尿病流行病學(xué)調(diào)查表明，中國(guó)已成為世界上糖尿病人日最多的國(guó)家，故其嚴(yán)重并發(fā)癥糖尿病腎病(DN)的發(fā)病人數(shù)亦相應(yīng)增加。DN是常見的糖尿病慢性微血管并發(fā)癥，是終末期腎衰(endstagerenaldisease，ESRD)的主要原因之一，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存率。DN隨病情進(jìn)展出現(xiàn)大量蛋白尿，而尿蛋白在系膜區(qū)的聚集可引起系膜細(xì)胞損傷、增生和系膜基質(zhì)合成增加，從而促進(jìn)腎小球硬化;在小管間質(zhì)，蛋白質(zhì)可造成細(xì)胞缺氧以及溶酶體活性增加，導(dǎo)致小管細(xì)胞損傷并刺激炎癥和疤痕形成，此外，尿蛋白還可直接調(diào)理小管細(xì)胞功能，改變其生長(zhǎng)特性及其細(xì)胞因子和基質(zhì)蛋白表型表達(dá)，誘導(dǎo)纖維化過程。鑒于足細(xì)胞損傷及其相關(guān)蛋白表達(dá)變化在糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，積極尋找對(duì)足細(xì)胞病變有保護(hù)和修復(fù)作用的藥物對(duì)糖尿病腎病的治療具有重要意義。目前用于治療足細(xì)胞損傷的藥物有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑及血管緊張素受體阻斷劑、抗氧化制劑、他汀類藥物等，而中藥治療足細(xì)胞損傷特別是糖尿病腎病的足細(xì)胞損傷的研究較少。冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌，富含氨基酸、多糖、有機(jī)酸、多種微量元素、核普、膚類及昌醇類等多種化學(xué)成分，具有“陰陽(yáng)同調(diào)、肺腎雙補(bǔ)”、“補(bǔ)而不峻”、“滋而不膩”等藥效特點(diǎn)。多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床觀察表明，冬蟲夏草及其制劑可通過降血糖、降血壓、調(diào)節(jié)血脂、減少腎細(xì)胞凋亡、拮抗腎組織纖維化等機(jī)制對(duì)DN發(fā)揮治療作用，但CS是否可改善DN腎小球足細(xì)胞病變，目前尚無(wú)確切資料證實(shí)。同時(shí)，雷公藤作為我國(guó)傳統(tǒng)中草藥，具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗菌、殺蟲及抗生殖作用，目前已廣泛應(yīng)用于臨床。1.糖尿病腎病的進(jìn)展及發(fā)病機(jī)制1.1糖尿病腎病的流行病學(xué)糖尿病(diabetesmellitus，DM)是由于機(jī)體無(wú)法分泌產(chǎn)生足夠的胰島素或不能有效的使用胰島素而導(dǎo)致血糖升高的一種慢性疾病。城市化進(jìn)程的加快、高熱量的飲食方式和日益久坐的生活方式導(dǎo)致了前所未有的糖尿病發(fā)病率。根據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，2019年全球成人糖尿病患病人數(shù)約為4.63億，發(fā)病率高達(dá)9.3%，其中我國(guó)成人糖尿病患病人數(shù)為1.16億，高居全球首位。糖尿病的致死率也同樣不容忽視，2019年約有420萬(wàn)成人死于糖尿病及其并發(fā)癥，占全球死亡總數(shù)的11.3%0糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥，在糖尿病患者中的發(fā)生率為25%}400l0[2]oDN是糖尿病患者死亡的主要原因之一，也是終末期腎病(end-stagerenaldisease，ESRD)的首要導(dǎo)致原因。據(jù)調(diào)查，80%以上的終末期腎病是由糖尿病、高血壓或兩者共同造成的。更為嚴(yán)峻的是，糖尿病腎病的患病率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢(shì)，在我國(guó)自2015年起，糖尿病相關(guān)的腎病己經(jīng)取代腎小球腎炎相關(guān)的腎病，成為最常見的慢性腎病[#]。糖尿病腎病所帶來的腎功能減退不僅會(huì)降低患者的預(yù)期壽命，還會(huì)增加各種心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重危害國(guó)民健康。1.2糖尿病腎病的病情進(jìn)展糖尿病腎病是一種慢性疾病，發(fā)病初期癥狀并不明顯，當(dāng)病情進(jìn)展到一定程度之后則會(huì)表現(xiàn)出以持續(xù)性的蛋白尿和進(jìn)行性的腎小球?yàn)V過率下降為主的臨床特征。在臨床診斷過程中，通常需要將尿微量白蛋白等生化指標(biāo)的變化結(jié)合腎臟活檢的病理檢查來確診。根據(jù)1型糖尿病患者的病理和生理變化，Mogensen將糖尿病腎病分為5期，這種分期在一定程度上也適用于2型糖尿病患者。DNI期，腎小球高濾過期:這段時(shí)期以腎小球?yàn)V過率(glomerularfiltrationrate，GFR)升高和腎臟肥大為主要特點(diǎn)，尿白蛋白排泄率(urinaryalbuminexcretionrates，UAER)正常，尚未出現(xiàn)病理組織的變化，在控制血糖后癥狀能夠得到緩解。DNII期，正常白蛋白尿期:GFR正?；蛏?，患者在靜息狀態(tài)時(shí)UAER正常，應(yīng)激狀態(tài)(如劇烈運(yùn)動(dòng)后)可升高;腎小球基底膜(glomerularbasementmembrane，GBM)增厚，系膜基質(zhì)增加。DNIII期，早期糖尿病腎病期，又被稱為微量白蛋白尿期:UAER升高，出現(xiàn)持續(xù)性的微量白蛋白尿，GFR正常，血壓升高;腎小球基底膜增厚和系膜基質(zhì)增加的癥狀更加明顯，并出現(xiàn)腎小球結(jié)節(jié)樣病變和小動(dòng)脈玻璃樣變。DNIV期，臨床糖尿病腎病期:持續(xù)性的大量白蛋白尿，GFR降低，血壓明顯升高，約有30%的患者出現(xiàn)腎病綜合征(大量蛋白尿、低蛋白血癥、水腫和高血脂癥);腎組織出現(xiàn)典型的腎小球彌漫性或結(jié)節(jié)性硬化，腎小管間質(zhì)纖維化以及早期動(dòng)脈粥樣硬化。DNV期，腎功能衰竭期:GFR進(jìn)行性下降，尿蛋白量增加或因腎小球嚴(yán)重受損而減少，伴隨有嚴(yán)重的高血壓和尿毒癥;腎小球大量硬化，腎小管萎縮，腎間質(zhì)纖維化。1.3糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制1.3.1遺傳因親遺傳因素在DN的發(fā)病及進(jìn)展過程中起重要作用。1989年SeaquistER等人進(jìn)行了一項(xiàng)具有里程碑意義的研究，發(fā)現(xiàn)具有腎臟病家族史的患者更容易引發(fā)糖尿病腎病，證實(shí)了糖尿病腎病的遺傳傾向。有研究者發(fā)現(xiàn)有DN同胞的糖尿病患者患糖尿病腎病的風(fēng)險(xiǎn)是無(wú)DN同胞的糖尿病患者的2倍以上。糖尿病腎病的易感基因開始引起越來越多的科研工作者的關(guān)注。全基因組關(guān)聯(lián)和meta分析發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病的發(fā)病與多種基因存在相關(guān)性，如AF4/FMR2family，member3基因、cytochromecoxidasesubunitVIapolypeptide1基因、engulfmentandcellmotility1基因、erythropoietin基因等。糖尿病腎病的發(fā)生是遺傳因素和環(huán)境因素雙重作用造成的，在基因水平研究糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制，對(duì)易感人群的發(fā)現(xiàn)和早期干預(yù)具有重要意義。1.3.2糖代謝異常糖基化終端產(chǎn)物(advancedglycationendproducts，AGES)oAGEs是還原性糖與蛋白質(zhì)、脂類和核酸的游離氨基通過非酶的美拉德反應(yīng)相互作用形成的一類大分子物質(zhì)，糖尿病患者血清和組織中AGEs水平顯著增加。腎臟中AGES的積累會(huì)改變基質(zhì)一基質(zhì)和細(xì)胞一基質(zhì)的相互作用，增加血管對(duì)白蛋白的通透性，抑制細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的降解，促進(jìn)基底膜增厚和系膜擴(kuò)張，加速糖尿病腎病的進(jìn)展。蛋白激酶CCproteinkinaseC，PKC)通路的激活。糖尿病狀態(tài)下，二酞苷油(diacylglycerol，DAG)水平升高，激活DAG-PKC通路，使轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1(transforminggrowthfactor-p1，TGF-p1)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)表達(dá)增加，活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)合成增加，導(dǎo)致腎臟基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)擴(kuò)張、腎臟毛細(xì)血管通透性增加，促進(jìn)腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。多元醇途徑的激活。在高葡萄糖環(huán)境下，多元醇途徑被激活，大量過剩的葡萄糖通過醛糖還原酶轉(zhuǎn)化為山梨醇，再經(jīng)由山梨糖醇脫氫酶轉(zhuǎn)化為果糖。這一過程會(huì)氧化還原型煙酞胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)，還原NAD+，破壞NADH和NAD+的平衡，導(dǎo)致細(xì)胞氧化還原和滲透壓的改變，使細(xì)胞損傷，促進(jìn)糖尿病腎病的發(fā)展。1.3.3炎癥反應(yīng)越來越多的證據(jù)表明炎癥反應(yīng)是糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化和微血管并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。糖尿病患者血漿中各種炎癥因子和促炎因子的濃度顯著升高，并且這些炎癥相關(guān)因子的含量隨著糖尿病腎病病情的加重而增加。在實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病中，抑制炎癥因子向腎臟部位的募集能夠有效的保護(hù)腎臟。這些發(fā)現(xiàn)說明炎癥反應(yīng)介導(dǎo)了糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展。參與糖尿病腎病的炎癥因子有腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactora，TNF-α)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1，細(xì)胞間茹附分-1、血管細(xì)胞茹附分子-1、白介素1、白介素6、白介素18等。它們會(huì)促進(jìn)活性氧的產(chǎn)生，增加內(nèi)皮細(xì)胞通透性，誘導(dǎo)細(xì)胞損傷和細(xì)胞凋亡，促進(jìn)白細(xì)胞一內(nèi)皮粘附，促進(jìn)腎小球系膜增生、腎小球肥大，加速細(xì)胞外基質(zhì)的積聚，損害腎臟的結(jié)構(gòu)和功能。圖1糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制2.冬蟲夏草的藥理左右及成分2.1冬蟲夏草的藥理作用2.1.1免疫調(diào)節(jié)近年來，研究者們對(duì)冬蟲夏草的提取物和分離產(chǎn)物的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了大量研究。冬蟲夏草菌絲體提取物能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，促進(jìn)IL-1，IL-10，TNF-α等細(xì)胞因子的釋放〔25]。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，冬蟲夏草及其提取物能夠增加免疫低下小鼠的碳廓清指數(shù)，提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力和淋巴細(xì)胞的增殖能力，恢復(fù)IL-2、IL-10、干擾素，TNF-α等細(xì)胞因子水平，從而改善小鼠的免疫功能。冬蟲夏草中被發(fā)現(xiàn)具有免疫調(diào)節(jié)作用的成分有多糖、蟲草素和脫氧核糖核酸。2.1.2抗炎多項(xiàng)研究表明，冬蟲夏草提取物具有明顯的抗炎活性。在LPS刺激的RAW264.7巨噬細(xì)胞中，冬蟲夏草提取物能夠抑制NO的釋放，降低誘導(dǎo)型NO合酶、環(huán)氧合酶2和TNF-α的合成好分泌。HanES等人發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草提取物能夠通過下調(diào)炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)，較少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，在葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎中發(fā)揮抗炎活性。LiuZ等人對(duì)缺血再灌注損傷的大鼠進(jìn)行冬蟲夏草提取物給藥治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草提取物可以調(diào)節(jié)NF-kB.IL-1β、iNOS，TNF-α，COX-2，ICAM-1和多形核細(xì)胞水平，阻斷炎癥相關(guān)事件，對(duì)缺血再灌注引起的腦損傷發(fā)揮保護(hù)作用。2.1.3腎臟保護(hù)冬蟲夏草對(duì)多種因素引起的腎損傷均表現(xiàn)出明顯的保護(hù)作用。對(duì)慢性腎病患者給予冬蟲夏草治療后發(fā)現(xiàn)，冬蟲夏草能夠降低患者血清苷油三脂、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平來改善脂質(zhì)分布，并通過影響氧化應(yīng)激，保護(hù)慢性腎病患者的腎臟在糖尿病動(dòng)物模型中，冬蟲夏草給藥治療能夠使血清總膽固醇、苷油三酸酷、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇正常化，改善血清肌配、血尿素氮、尿白蛋白、腎肺重比等腎功能指標(biāo)，并抑制腎組織膠原沉積，表現(xiàn)出有效的腎臟保護(hù)作用。對(duì)膜性腎小球性腎炎大鼠進(jìn)行冬蟲夏草提取物治療有效保護(hù)了大鼠免受膜性腎小球腎炎的侵害，大鼠的尿白蛋白、血清總膽固醇、血清苷油三酸酷、血尿素氮和血清肌醉水平明顯降低，谷膚苷膚過氧化物酶和超氧化物歧化酶水平顯著改善，’腎臟的組織結(jié)構(gòu)損傷也得以恢復(fù)。冬蟲夏草在腎移植、腎阻塞、腎缺血再灌注等因素造成的腎損傷中也表現(xiàn)出明顯的恢復(fù)作用。2.2冬蟲夏草的活性成分2.2.1多糖多糖是冬蟲夏草中含量最豐富的生物活性成分之一，一般從子實(shí)體、菌絲體和發(fā)酵菌液中分離得到，具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、延緩衰老等多種功效。根據(jù)在真菌細(xì)胞中的位置不同，蟲草多糖可以分為胞內(nèi)多糖和胞外多糖。真菌多糖的結(jié)構(gòu)一般比較復(fù)雜，即使是同一原料中提取得到的多糖也可能具有不同的結(jié)構(gòu)或表現(xiàn)出不同的生物活性。2.2.2核苷核苷類成分是冬蟲夏草中重要的活性組分，己被用于冬蟲夏草的質(zhì)量控制。冬蟲夏草中發(fā)現(xiàn)的核普類成分有蟲草素、鳥苷、尿苷、腺苷、肌苷、腺嘿吟、鳥嘿吟、黃嘿吟、單磷酸鳥普、單磷酸尿苷、單磷酸腺普等三十余種核苷、核苷堿基和核苷酸。蟲草素是研究最多的核苷類成分，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、修復(fù)損傷等多種藥理作用。尿苷、鳥苷、腺苷、肌苷、胞嚓咤等成分也被發(fā)現(xiàn)具有一定的生物活性。2.2.3甾醇目前，冬蟲夏草中發(fā)現(xiàn)的甾醇類化合物有麥角甾醇、麥角甾醇衍生物、膽甾醇、谷甾醇、H1一等。其中，麥角甾醇是真菌特有的甾醇，也是維生素D2的重要來源，具有抗氧化、改善器官損傷、抗腫瘤、降血糖等藥理作用。麥角甾醇過氧化物也具有良好的生物活性，能夠抑菌、抗腫瘤、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化以及抗纖維化。2.2.4氨基酸和多肽冬蟲夏草中含有豐富的氨基酸，包括8種人體必須的氨基酸(賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、擷氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)、1種嬰兒必須的氨基酸(組氨酸)以及十幾種其它的游離氨基酸(甘氨酸、絲氨酸、酪氨酸、瞇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等)。冬蟲夏草中發(fā)現(xiàn)的多膚類物質(zhì)有cordymin，cordycedipeptideA，cordyceamidesA，cordyceatnidesB等。其中研究較多的是cordymin，具有抗真菌以及消炎鎮(zhèn)痛等活性。3.蟲草治療糖尿病腎病的研究本章根據(jù)國(guó)內(nèi)的相關(guān)學(xué)者的研究數(shù)據(jù)對(duì)冬蟲夏草對(duì)糖尿病腎病治療研究作出分析，從相關(guān)學(xué)者的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中來探討冬蟲夏草在治療腎病中起到的具體效果。3.1相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法3.1.1動(dòng)物模型制備與分組適應(yīng)性喂養(yǎng)所有動(dòng)物一周后禁食12小時(shí)，按65mg/kg在動(dòng)物空腹?fàn)顟B(tài)下給予腹腔一次性注射STZ，48-72小時(shí)后采尾靜脈血，采用血糖計(jì)測(cè)定血糖。依據(jù)隨機(jī)血糖)16.7mmol/L者入選DM大鼠模型，隨機(jī)分組為B組、C組、D組及E組。A組僅注射等量構(gòu)椽酸緩沖液。每組20只大鼠。C組給予CS菌粉Sg/(kg.d)每日灌胃，D組TWP16mg/kg.d每日灌胃給藥，E組給予CS菌粉Sg/(kg.d)以及TWP16mg/kg.d每日灌胃，A組和B組每日上午給予等量溶媒灌胃一次，每周根據(jù)體重調(diào)整藥物的劑量，連續(xù)灌胃12周。所有大鼠在實(shí)驗(yàn)期間給予喂標(biāo)準(zhǔn)的飲食，自由的飲水，不使用胰島素。3.1.2標(biāo)本收集實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天于金屬代謝籠中留取24小時(shí)尿液，記尿量，過濾、離心分裝后保存于一800C冰箱中待測(cè)尿蛋白含量。大鼠處死前稱體重，腹腔注射戊巴比妥麻醉大鼠后行右側(cè)頸總動(dòng)脈插管以收集血標(biāo)本。一部分收集于添加抗凝劑試管中待測(cè)定血常規(guī)，其余血標(biāo)本4℃離心取血漿保存于留取-20℃待測(cè)定各項(xiàng)生化指標(biāo)。通過右側(cè)頸動(dòng)脈插管注入4℃預(yù)冷的生理鹽水反復(fù)灌洗腎臟，等腎臟顏色全部變蒼白后游離，稱取腎重，置于冰上，然后再取8mm3大小的腎臟組織固定在4%多聚甲醛溶液中，石蠟包埋，制作成為3厚度的多聚賴氨酸處理切片，進(jìn)行免疫熒光研究。其余腎臟組織分別切成大小約lmm3加入戊二醇，有待行透射電鏡檢查。3.1.3尿蛋白測(cè)定（1）稀釋:尿液測(cè)定前用標(biāo)本稀釋液作1:100稀釋(取10u1，加標(biāo)本稀釋液990u1，稀釋100倍)。標(biāo)準(zhǔn)品液配制:在使用前加lml蒸餾水并混勻，配成5000ng/ml的溶液。設(shè)計(jì)8管標(biāo)準(zhǔn)管，第1管加標(biāo)本稀釋液900u1，第2至第8管加標(biāo)本稀釋液500u10在第1管中加入5000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100u1混勻后用加樣器吸出500u1，移至第2管。這樣反復(fù)作倍數(shù)稀釋，從第7管中吸出500u1棄去。第8管為空白對(duì)照。用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:lml濃稀釋液中加9m1蒸餾水)成lOX標(biāo)本的稀釋液。洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:lml濃縮的洗滌液中加19m1的重蒸水)。（2）檢測(cè)程序加樣:依次吸取標(biāo)準(zhǔn)品或者待測(cè)樣品100u1加入各孔，充分混勻反應(yīng)板，后置于37℃下120分鐘。洗板:用洗滌液充分洗滌反應(yīng)板4-6次，印干于濾紙上。酶標(biāo)記抗體工作液加入各孔中，每孔100u1，放置反應(yīng)板在37℃下半小時(shí)，100u1的底物工作液加至各孔，置于37℃條件下在暗處反應(yīng)15分鐘。各孔加100u1終止液，混勻。3.1.4血生化指標(biāo)檢測(cè)血清7150型全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)SCR，BUN、ALT、AST等生化指標(biāo)。血糖測(cè)定采用血糖儀測(cè)定全血血糖。3.1.5腎組織的光鏡檢查將左腎經(jīng)腎門冠狀面切去組織，厚約2mm，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片厚度2um，行HE染色。光鏡下觀察腎組織的病理改變。3.1.6腎組織的電鏡檢查將腎組織標(biāo)本切成lmm3的組織塊，用3.75%戊二醇于4℃固定4h以上。用0.1MPBS漂洗5-6次，丙酮脫水、浸透，然后用石蠟包埋，切片。將厚80-90nm的切片置于銅網(wǎng)上，于醋酸鈾染液中室溫染15-30min，雙蒸水洗凈后，濾紙吸干，再置于檸檬酸鋁染液中，室溫染10-20min，雙蒸水洗凈，濾紙吸干，Hitachi7500透射電鏡觀察。3.1相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1.1對(duì)DN大鼠蛋白尿的治療作用5組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量明顯高于A組(P＜0.01)；C、D、E組24小時(shí)尿蛋白定量明顯低于B組(P＜0.01)如圖3.1圖3.1尿蛋白3.1.2對(duì)DNKW/BW的影響B(tài)組大鼠的KW/BW高于A組大鼠(P<0.O1)，經(jīng)治療后，C、D、E至目KW/BW顯著低于B組大鼠(P<0.01)，以E組降低明顯。見圖2圖3.2腎重/體重3.1.3對(duì)DN大鼠血清生化指標(biāo)的影響B(tài)組大鼠與A組比較，B組肝酶、外周血白細(xì)胞等無(wú)明顯差異，但血肌醉、尿素氮增高(PG＜0.05);血糖明顯增高((P＜0.01)。與B組大鼠比較，C，E組血糖、血肌醉、尿素氮、肝酶及外周血白細(xì)胞等無(wú)明顯差異，D組出現(xiàn)肝酶增高及外周血白細(xì)胞下降(3/20例;15%)(PG＜0.05)，余無(wú)明顯差異，見表3.1表3.1：CS及TWP對(duì)DN大鼠血清生化指標(biāo)的影響3.1.4對(duì)DN大鼠腎組織病理改變的影響腎組織切片HE染色結(jié)果顯示:正常組腎組織未見病理改變;DN組腎小球肥大腎小管變形，治療組(C，D，E)上述病理改變明顯減輕，其中E組減輕最為明顯，D組較C組明顯.見圖3.3。圖3.3：對(duì)DN大鼠腎組織病理改變的影響3.1.5對(duì)DN大鼠足突細(xì)胞病變的影響透射電鏡觀察A組足突細(xì)胞未見病理改變，B組大鼠的足突細(xì)胞足突融合，足突裂孔數(shù)減少、裂孔膜消失，C，D，E組足細(xì)胞損傷比B組減輕，足細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常;治療組中E組的足細(xì)胞損傷相對(duì)C，D組明顯減輕，D組較C組減輕。見圖3.4圖3.4：電鏡圖片（×6000）3.3討論CS屬肉座菌目麥角菌科蟲草屬植物，為蟲草菌的子座，其寄主蝙蝠蛾幼蟲尸體的復(fù)合物，俗稱蟲草，其菌絲成分非常復(fù)雜，含總量達(dá)22.7%的18種氨基酸，還含有多糖、麥角醇、D-甘露醇、硬脂酸、尿嘧啶、腺嘌呤、次黃嘌呤。天然CS因其寄生性嚴(yán)格和生長(zhǎng)環(huán)境特殊而藥價(jià)偏高，使其應(yīng)用以及研究受到限制。人工蟲草是人工發(fā)酵培養(yǎng)得到的菌絲，其富含蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖、抗生素、超氧化物歧化酶、氨基酸、維生素及微量元素等成分，經(jīng)毒理，、藥理、植化研究證明與天然蟲草化學(xué)組成、藥理作用基本一致，可代替天然蟲草生產(chǎn)蟲草制品，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)用于治療慢性腎炎、急慢性腎功能衰竭、腎移植等多種疾病。黎磊石等進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)研究顯示，冬蟲夏草提取液能拮抗慶大霉素造成的腎小管上皮細(xì)胞對(duì)乳酸脫氫酶(LDH)和N-乙酰-β-葡萄糖苷酶(NAG)的釋放，拮抗慶大霉素對(duì)細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用，表明冬蟲夏草可以減輕慶大霉素對(duì)腎小管上皮細(xì)胞損傷，作者還發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草含藥血清能顯著促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖。郭嘯華等在用冬蟲夏草制劑防治大鼠慢性環(huán)孢素腎毒性的研究中發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，治療組大鼠的尿NAG酶及尿鈉排泄減少，尿滲透壓上升，血清肌酐(Scr)顯著下降，腎臟病理變化改善(腎小管上皮細(xì)胞空泡變性及壞死減輕，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化減少，入球小動(dòng)脈透明樣變發(fā)生率降低)。衛(wèi)榮等對(duì)慢性腎衰竭患者在常規(guī)非透析治療基礎(chǔ)上加服蟲草制劑百令膠囊，共治療2個(gè)月，結(jié)果顯示加服百令膠囊治療的患者(30例)Scr及BUN均顯著下降，血紅蛋白及血清白蛋白均顯著上升，與未加服患者(30例)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。王玉國(guó)(治療組21例、對(duì)照組21例)、王雁鵬(治療組36例、對(duì)照組32例)及孫明等(治療組57例、對(duì)照組64例)均嘗試了用CS制劑百令膠囊與強(qiáng)的松和環(huán)孢素聯(lián)合使用，組成“新三聯(lián)”(治療組)，用于腎移植后排斥反應(yīng)的防治。觀察1年，相比于強(qiáng)的松、環(huán)孢素和硫唑嘌呤組成的“舊三聯(lián)”(對(duì)照組)，治療組移植腎的1年存活率及免疫排斥反應(yīng)發(fā)生率，差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，前者甚或更優(yōu)。而“新三聯(lián)”對(duì)骨髓造血功能影響很小，白細(xì)胞下降少見，感染率亦較低，且顯著改善低蛋白血癥以及高脂血癥，表示“新三聯(lián)”治療效果要優(yōu)于“舊三聯(lián)”。近年來，冬蟲夏草對(duì)糖尿病腎病的防治作用越來越受到關(guān)注。黃海泉給50例早期糖尿病腎病患者在降血糖治療基礎(chǔ)上加服冬蟲夏草制劑治療1個(gè)月，相比于30例未加服冬蟲夏草制劑的患者，結(jié)果表明加服CS制劑患者的Scr、BUN、UAER、尿β2-mG均比未加服者顯著降低低。周興磊等對(duì)90例2-4期的DN患者在控制BG和血壓之基礎(chǔ)上加服CS煎劑治療1年。研究發(fā)現(xiàn)對(duì)DN較輕(Ccr≧70ml/min)的32例患者加服CS治療半年后,UAER已比未加服組（32例)顯著減少。1年后,對(duì)治療組16例、對(duì)照組8例進(jìn)行重復(fù)腎穿刺活檢病理檢查顯示,兩組患者腎小球硬化數(shù)均增加,但是加服冬蟲夏草患者的腎小球肥大及系膜增殖程度較未服用患者輕。曹氏發(fā)現(xiàn)蟲草制劑金水寶膠囊可以顯著減少早期DN患者尿微量白蛋白，改善患者脂質(zhì)代謝異常。楊氏研究表明金水寶對(duì)DN尿白蛋白、Scr、BUN降低，超氧化物歧化酶、RBC、Hb升高較治療前有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但冬蟲夏草制劑對(duì)尿病腎病腎臟足細(xì)胞的影響和機(jī)制目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用STZ誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型，觀察12wk后，大鼠Scr、BUN增高；GLU、KW/BW和UAER明顯增高，腎臟皮質(zhì)Nephrin和Podocin蛋白表達(dá)減少，腎小球、小管間質(zhì)、足細(xì)胞病變明顯。顯示糖尿病大鼠模型已出現(xiàn)DN早期表現(xiàn)。冬蟲夏草菌粉給藥12周后，與糖尿病組比較，對(duì)血糖無(wú)明顯影響，KW/BW和UAER降低；腎臟皮質(zhì)Nephrin和Podocin蛋白表達(dá)增高和腎小球、小管間質(zhì)及足細(xì)胞病變病變明顯減輕。應(yīng)用CS后觀察到的nephrin和podocin表達(dá)變化，可能緣于Nephrin和Podocin參與足細(xì)胞修復(fù)，也可能是蛋白尿排泄率減少的結(jié)果。4.總結(jié)中藥在我國(guó)具有悠久的歷史，各種中藥及其提取物對(duì)糖尿病腎病的治療作用己有較多的研究，對(duì)中藥發(fā)揮治療作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制的探索成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。冬蟲夏草是一味具有補(bǔ)肺益腎效果的傳統(tǒng)中藥，而通過發(fā)酵工藝制備的人工蟲草彌補(bǔ)了野生蟲草產(chǎn)量的嚴(yán)重短缺，這些野生和人工蟲草己被廣泛用于包括糖尿病腎病在內(nèi)的各類腎臟疾病的治療，并取得了良好的臨床效果。目前對(duì)冬蟲夏草治療糖尿病腎病的活性組分、作用機(jī)制和藥用制劑的研究仍然處于起步階段。多數(shù)研究?jī)H停留在冬蟲夏草菌粉及其粗提物治療糖尿病腎病的研究上，而市場(chǎng)上的蟲草制劑也僅是填充有蟲草粉末的簡(jiǎn)單膠囊劑。盡管有關(guān)蟲草多糖的少量研究見諸報(bào)端，但是仍然缺乏對(duì)冬蟲夏草治療糖尿病腎病的具體活性組分、作用機(jī)制和高端制劑的系統(tǒng)性研究。

參考文獻(xiàn)[1]施海濤,楊慶春,王雪峰,等.冬蟲夏草對(duì)延緩糖尿病腎病腎小球系膜細(xì)胞增殖的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2011,49(22):3.[2]孫建紅,何戎華.蟲草制劑和開博通對(duì)糖尿病大鼠腎臟功能和形態(tài)影響的對(duì)比研究[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,020(006):450-453.[3]胡楊青,周巧玲,劉抗寒,等.冬蟲夏草對(duì)糖尿病腎病鼠腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β/C-myc表達(dá)的影響[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2005,14(5):5.[4]潘夢(mèng)舒,郝麗,鄭云,等.冬蟲夏草對(duì)DN大鼠腎足細(xì)胞的保護(hù)作用觀察[J].山東醫(yī)藥,2011,51(50):2.[5]解思友,李春如,龍文君,等.蟬花腎損傷保護(hù)作用的藥理及臨床研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2020,43(4):6.[6]龐欣欣,石秀杰,彭紫凝,等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究冬蟲夏草治療糖尿病腎病的機(jī)制[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2021,22(9):3.[7]劉丹丹,王祥生,王建明,等.蟲草制劑聯(lián)合血管緊張素受體阻滯劑治療糖尿病腎病的Meta分析[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2020,15(5):6.[8]王卓.IL-22/IL-22R與糖尿病腎病相關(guān)性研究[D].天津醫(yī)科大學(xué),2020.[9]贠捷,王秀清,馬曉鵬,等.蟲草益腎方治療糖尿病腎病脾腎兩虛,痰濁互結(jié)證的臨床療效及機(jī)制研究[J].河北中醫(yī),2020,42(11):5.[10]謝秋芳,張