第三章食品微生物檢驗(yàn)的試劑及配制

第三章食品微生物檢驗(yàn)的常用試劑及配制.了解染色的根本原理。掌握常用染料的性質(zhì)及其染色的配制技術(shù)。熟悉常用試劑、緩沖溶液、物質(zhì)的量濃度的配制技術(shù)。了解培養(yǎng)基的種類(lèi)及一些常見(jiàn)培養(yǎng)基的用途，掌握一般培養(yǎng)基的配制技術(shù)。.第一節(jié)染料及染液配制技術(shù)一、染色原理微生物染色的根本原理，是借助物理和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等。化學(xué)因素：正負(fù)離子之間的相互吸引等。

.二、染料的種類(lèi)染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類(lèi)型：1.酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑、苦味酸等。2.堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。3.中性〔復(fù)合〕染料：如伊紅美蘭等，瑞脫氏〔Wright〕染料和基姆薩氏〔Gimsa〕染料等〔常用于細(xì)胞核染色〕。4.單純?nèi)旧哼@類(lèi)染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類(lèi)〔Sudanb)的染料.染色細(xì)菌標(biāo)本檢查法

－－染料細(xì)菌染色用的染料酸性染料〔陰離子染料〕：染色離子帶陰電荷，能與帶陽(yáng)電的物質(zhì)結(jié)合，使之著色。降低菌液的pH而使細(xì)菌帶陽(yáng)電時(shí)，就可用酸性染料染色?！惨良t、剛果紅〕堿性染料〔陽(yáng)離子染料〕：與帶負(fù)電的物質(zhì)結(jié)合，細(xì)菌一般帶負(fù)電，所以細(xì)菌染色所用的染料，常用堿性染料〔堿性復(fù)紅、美藍(lán)〕。復(fù)合染料：堿性染料與酸性染料的結(jié)合物〔伊紅美藍(lán)、伊紅天青〕。單純?nèi)玖希翰荒芘c被染物生成鹽類(lèi).

堿性染料的離子帶正電荷，能和帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌蛋電質(zhì)等電點(diǎn)較低，當(dāng)它生長(zhǎng)于中性、堿性或弱酸性的溶液中時(shí)常帶負(fù)電荷，所以通常采用堿性染料(如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅或孔雀綠等)使其著色。

酸性染料的離子帶負(fù)電荷，能與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)菌分解糖類(lèi)產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH值下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料著色。

中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱(chēng)復(fù)合染料．如伊紅美藍(lán)、伊紅天青等。

..三、常用染液的配制1.常用染料的溶解度表3-12.常用染料的配制

.第二節(jié)常用試劑的配制技術(shù)一、緩沖液的配制技術(shù).二、物質(zhì)的量濃度溶液的配制技術(shù)1.溶液濃度表示法2.物質(zhì)的量濃度溶液的配制方法3.溶液濃度的調(diào)整4.常用酸堿的物質(zhì)的量濃度計(jì)算.三、pH指示劑的配制技術(shù).四、血清學(xué)反響試劑制備技術(shù)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)在第五章講解.五、生化試劑制備技術(shù)及試驗(yàn)法什么是微生物生化試驗(yàn)?指通過(guò)利用生物化學(xué)的方法來(lái)測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來(lái)鑒別細(xì)菌的類(lèi)別、屬種的試驗(yàn)。

由于細(xì)菌各自酶系統(tǒng)不同，新陳代謝的產(chǎn)物也有所不同，而這些產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性。為此，可利用生物化學(xué)的方法來(lái)鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的細(xì)菌。.細(xì)菌的生化反響檢查法1.在培養(yǎng)物中參加某種底物與指示劑，經(jīng)接種、培養(yǎng)后，觀察培養(yǎng)基的pH值變化。2.在培養(yǎng)物中參加試劑，觀察它們同細(xì)菌代謝產(chǎn)物所生成的顏色反響。3.根據(jù)酶作用的反響特性，測(cè)定酶的存在。4.根據(jù)細(xì)菌對(duì)理化條件和藥品的敏感性，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。.生化試驗(yàn)的本卷須知1.待檢菌應(yīng)是新鮮培養(yǎng)物。培養(yǎng)18-24h。2.待檢菌應(yīng)是純種培養(yǎng)物。3.遵守觀察反響的時(shí)間。觀察結(jié)果的時(shí)間，多為24或48小時(shí)。4.應(yīng)做必要的對(duì)照試驗(yàn)。5.提高陽(yáng)性檢出率，至少挑取2-3個(gè)待檢的疑似菌落分別進(jìn)行試驗(yàn)。.生化試驗(yàn)分類(lèi)〔一〕糖〔醇〕類(lèi)代謝試驗(yàn)〔二〕氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)〔三〕有機(jī)酸鹽和銨鹽代謝試驗(yàn)〔四〕酶類(lèi)試驗(yàn).〔一〕糖〔醇〕類(lèi)代謝試驗(yàn)

1.糖醇類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)2.V-P試驗(yàn)3.甲基紅〔MethylRed〕試驗(yàn)MR.

1.糖醇類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)

原理：不同的細(xì)菌對(duì)各種糖醇的分解能力及所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物各不同，有的能分解多種糖醇，有的只能分解1~2種糖醇，有的分解糖醇能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的分解糖醇只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，根據(jù)這些特點(diǎn)，可鑒別細(xì)菌。.糖發(fā)酵試驗(yàn)原理

不同微生物發(fā)酵糖的能力各異，產(chǎn)生的分解產(chǎn)物也不同，可以作為細(xì)菌分類(lèi)鑒定的手段。大腸埃希菌/產(chǎn)氣腸桿菌葡萄糖CH3COCOOHHCOOH甲酸解氫酶H2+CO2傷寒沙門(mén)菌葡萄糖CH3COCOOHHCOOH指示劑：溴麝香草酚藍(lán)pH<6.3(黃)；6.3<pH<7.2(綠)；pH>7.2(藍(lán))pH6.3pH7.2舉例.常用的糖醇單糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖雙糖：乳糖、蔗糖、麥芽糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇類(lèi)：甘露醇、山梨醇、肌醇、衛(wèi)茅醇.2〕試驗(yàn)方法 (1)試劑：糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，常用的指示劑主要有酚紅、溴麝香草酚藍(lán)顏色反響較敏感，但穩(wěn)定性較差。溴甲酚紫和酸性復(fù)紅比較穩(wěn)定，特別是對(duì)發(fā)酵緩慢的細(xì)菌，培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，宜選那么二者。 (2)培養(yǎng)基：液體糖發(fā)酵管，半固體糖發(fā)酵管，固體糖發(fā)酵管，雙糖(或三糖)高層斜面發(fā)酵管。

.2〕試驗(yàn)操作方法以無(wú)菌操作的方法將經(jīng)別離培養(yǎng)的純種細(xì)菌用接種針或環(huán)移取，接種于糖發(fā)酵管中，假設(shè)為半固體培養(yǎng)基，那么用接種針作穿刺接種。置36±1.0℃置溫箱內(nèi)培養(yǎng)經(jīng)一定時(shí)間(數(shù)小時(shí)至二周)培養(yǎng)，然后每天觀察結(jié)果。.1.糖發(fā)酵試驗(yàn)要注意杜氏小管的置入方法；2.在接種后，輕緩搖動(dòng)試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡。本卷須知.杜氏小管灌裝

灌裝不好會(huì)使杜氏小管中有氣泡，影響觀察結(jié)果。首先將試管中裝滿培養(yǎng)液，然后用醫(yī)用注射器吸取一定量培養(yǎng)液，排空其中空氣，將針頭伸到杜氏小管底部(防止氣泡產(chǎn)生)，緩緩將培養(yǎng)液推入杜氏小管直到凸起(外表張力作用)，再至過(guò)量以至培養(yǎng)液潤(rùn)濕杜氏小管外表，因培養(yǎng)液具有一定粘滯力，它可使?jié)駶?rùn)的杜氏小管貼著試管放入時(shí)慢慢滑到試管底部，而不撞破試管底部。.氣泡導(dǎo)管氣泡陽(yáng)性陽(yáng)性陰性培養(yǎng)基變?yōu)辄S色培養(yǎng)基未變色、無(wú)氣泡產(chǎn)生結(jié)果記錄：產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，陽(yáng)性，以“+〞表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陽(yáng)性，以“⊕〞表示不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陰性，以“-〞表示.2.V-P試驗(yàn)〔乙酰甲基甲醇試驗(yàn)〕1〕原理：某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中的氧氧化為二乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱(chēng)V－P〔+〕反響。.V.P.試驗(yàn)(伏―普試驗(yàn))

用來(lái)測(cè)定某些細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的能力。27.某些細(xì)菌在糖代謝過(guò)程中，經(jīng)糖酵解途徑產(chǎn)生丙酮酸。因不同細(xì)菌所含酶不同，進(jìn)一步對(duì)丙酮酸的代謝也不同。大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌2CH3COCOOHCH3COCHOHCH3+2CO2O2+KOHCH3COCHOHCH3CH3COCOCH3CH3COCOCH3+胍基紅色化合物+H2OVP試驗(yàn)陰性。VP試驗(yàn)〔V〕實(shí)驗(yàn)原理舉例.應(yīng)用：主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別。本試驗(yàn)常與MR試驗(yàn)一起使用，一般情況下，前者為陽(yáng)性的細(xì)菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細(xì)菌不一定都這樣規(guī)律。.2〕V.P.試驗(yàn)取3支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，1號(hào)接種大腸桿菌，2號(hào)接產(chǎn)氣桿菌，第3支接未知菌。37℃培養(yǎng)48h后，參加40%KOH5~10滴，然后再參加等量的5%α-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37℃溫箱中保溫30min，以加快反響速度。觀察培養(yǎng)基的顏色變化。3〕結(jié)果觀察與記錄〔1〕發(fā)酵管出現(xiàn)紅色者，為陽(yáng)性，記V-P+〔2〕發(fā)酵管為黃色或銅綠色者，為陰性，記V-P-30.本卷須知VP實(shí)驗(yàn)一定要注意開(kāi)蓋振蕩！且反響時(shí)間較長(zhǎng)。.中文名稱(chēng)：大腸埃希菌菌株保藏編號(hào)：CVCC3038特征特性：

非抗酸性

化能異養(yǎng)最適溫度37.pH7.2~7.4

不利用檸檬酸鹽可發(fā)酵多種碳水化合物如：葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇接觸酶陽(yáng)性、氧化酶陰性、脲酶陰性.MR試驗(yàn)陽(yáng)性、VP試驗(yàn)陰性

屬名：Escherichia種名加詞：coli.3.甲基紅〔MR〕試驗(yàn)1〕原理：腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過(guò)程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基pH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性；有的細(xì)菌使丙酮酸脫羧后形成酮、醇類(lèi)中性產(chǎn)物，培養(yǎng)液pH＞5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗(yàn)陰性。.檢測(cè)不同細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸的能力。大腸埃希菌葡萄糖產(chǎn)氣腸桿菌指示劑：甲酸乙酸乳酸琥珀酸等分解甲酸、乙醇和乙酰甲基甲醇

pH>5.4葡萄糖分解甲基紅pH<4.5(紅)；pH>5.4(橘黃色)。甲基紅試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理pH4.5pH5.4舉例.2〕試驗(yàn)方法：挑取新鮮的待試培養(yǎng)物少許，接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于36±1℃或30℃〔以30℃較好〕培養(yǎng)3~5天，從第48h起，每日取培養(yǎng)液1ml，參加甲基紅指示劑1~2滴，立即觀察結(jié)果。.3〕結(jié)果觀察與記錄〔1〕呈鮮紅色或橘紅色為陽(yáng)性，呈淡紅色為弱陽(yáng)性，記MR+；〔2〕呈橘黃色或黃色為陰性，記MR-，從發(fā)現(xiàn)陰性并培養(yǎng)至第5天仍為陰性，即可判定結(jié)果。.MR-VP試驗(yàn)原理及照片V-P.1.靛基質(zhì)〔吲哚〕試驗(yàn)2.H2S試驗(yàn)3.尿素酶試驗(yàn)

〔二〕氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn).1.吲哚試驗(yàn)〔靛基質(zhì)試驗(yàn)〕1〕原理：某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反響表現(xiàn)出來(lái)。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。.吲哚試驗(yàn)色氨酸分解反響：吲哚反響：40.

不同微生物所含酶系統(tǒng)不同，某些細(xì)菌含有色氨酸酶，能夠分解培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中的色氨酸。大腸埃希菌色氨酸產(chǎn)氣腸桿菌色氨酸酶+H2OCH3COCOOH吲哚+檢測(cè)：吲哚+對(duì)二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚+H2O玫瑰紅色吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性+吲哚試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理吲哚陰性-舉例.2〕試驗(yàn)方法：

取3支胰蛋白水培養(yǎng)基培養(yǎng)基，1號(hào)接種大腸桿菌，2號(hào)接種產(chǎn)氣桿菌，第3支接未知菌。37℃培養(yǎng)24h～48h。沿試管壁滴加數(shù)滴吲哚試劑于培養(yǎng)物液面，觀察結(jié)果。3〕結(jié)果觀察與記錄呈現(xiàn)玫瑰紅色,為陽(yáng)性反響,記+無(wú)紅色者,為陰性反響,記-.靛基質(zhì)試驗(yàn)原理及照片靛基質(zhì)+.2.硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)1〕原理：某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸生成H2S，H2S可與參加培養(yǎng)基中的鉛或鐵離子生成黑色沉淀物PbS或FeS，以此鑒別細(xì)菌。

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2〕方法與結(jié)果(1)瓊脂穿刺法：培養(yǎng)基：三糖鐵培養(yǎng)基、含硫酸亞鐵(或醋酸鉛)的半固體培養(yǎng)基。 操作：將試驗(yàn)細(xì)菌以接種針沿管壁穿刺接種到含醋酸鉛或硫酸亞鐵培養(yǎng)基中，經(jīng)37℃24-48h培養(yǎng)后，觀察結(jié)果。 結(jié)果：培養(yǎng)基變黑色為陽(yáng)性。當(dāng)產(chǎn)生硫化氫量少時(shí)，為了便于觀察結(jié)果，在穿刺接種培養(yǎng)時(shí)，一定要沿培養(yǎng)基管壁進(jìn)行。(2)醋酸鉛試紙法：培養(yǎng)基：含胱氨酸的半固體培養(yǎng)基、浸有醋酸鉛的濾紙條。操作：待檢菌穿刺接種培養(yǎng)基，懸掛醋酸鉛紙條，37℃培養(yǎng)24-48h。結(jié)果：試紙呈黑色為陽(yáng)性。該法較敏感。.3〕結(jié)果觀察與記錄培養(yǎng)基底部呈黑色，為陽(yáng)性，記+培養(yǎng)基底部無(wú)黑色，為陰性，記-

.3.尿素分解試驗(yàn)?zāi)蛩孛浮睻rease〕試驗(yàn)1〕原理：有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個(gè)分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑呈粉紅色。培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色，為陽(yáng)性。以此鑒別細(xì)菌。1〕未接種2〕尿素酶陽(yáng)性3〕尿素酶陰性.2〕試驗(yàn)方法：

挑取大量培養(yǎng)18~24h的待試菌，濃密涂布接種于尿素瓊脂斜面上，不要到達(dá)底部，留底部作變色對(duì)照。培養(yǎng)2、4和24h分別觀察一次結(jié)果，培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色為陽(yáng)性，顏色不變者為陰性。如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天，作最終判定。.尿素酶試驗(yàn)圖陽(yáng)性3〕結(jié)果觀察與記錄培養(yǎng)基呈粉紅色，為陽(yáng)性，記+培養(yǎng)基顏色不變，為陰性，記-.〔三〕呼吸酶類(lèi)試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn)氰化鉀試驗(yàn).1.氧化酶試驗(yàn)1〕原理:氧化酶使細(xì)胞色素C氧化后，氧化型細(xì)胞色素C再使鹽酸二甲基對(duì)苯二胺氧化，使生成玫瑰紅色到暗紫色的醌類(lèi)化合物,再和α-萘酚結(jié)合,生成吲哚酚藍(lán),呈藍(lán)色反響，為陽(yáng)性。.氧化酶或稱(chēng)細(xì)胞色素氧化酶，是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗(yàn)時(shí)，此酶首先使細(xì)胞色素C氧化，然后氧化型細(xì)胞色素C再使對(duì)苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反響。本實(shí)驗(yàn)?zāi)c桿菌科陰性，弧菌科，非發(fā)酵菌陽(yáng)性〔個(gè)別除外〕，奈瑟菌屬均陽(yáng)性。試驗(yàn)方法取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴，陽(yáng)性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深；再加α-萘酚溶液一滴，陽(yáng)性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色。陰性于兩分鐘內(nèi)不變色。.用于奈瑟菌屬的菌種鑒定，該屬細(xì)菌均陽(yáng)性。此外，也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細(xì)菌的區(qū)別，前者陽(yáng)性，而后者陰性。莫拉菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等均為陽(yáng)性。異常結(jié)果：奈瑟菌屬有腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9種致病菌，引起流行性腦脊髓膜炎上呼吸道病癥：鼻咽炎等全身感染病癥：高熱、出血點(diǎn)或瘀血點(diǎn)，腦膜炎病癥：頭痛、嘔吐、頸項(xiàng)強(qiáng)直;引起淋病，引起新生兒淋病性眼結(jié)膜炎。.氧化酶試驗(yàn)本卷須知：①試驗(yàn)時(shí)應(yīng)防止接觸含鐵物質(zhì)，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。②10g/L鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或10g/L鹽酸四甲基對(duì)苯二胺水溶液為無(wú)色溶液，在空氣中易被氧化而失效，故應(yīng)經(jīng)常更換新試劑，并盛于棕色瓶中，假設(shè)試劑已變成深藍(lán)色，應(yīng)棄去不用。.試劑1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺1%α-萘酚-乙醇液.藍(lán)色為+不變色或?yàn)榉奂t色為-.2.過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)1〕原理：某些細(xì)菌可分泌過(guò)氧化氫酶，參加過(guò)氧化氫后，可將過(guò)氧化氫分解生成水和氧氣，產(chǎn)生氣泡，即為陽(yáng)性反響。.2〕試驗(yàn)方法用滴管直接滴加1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試劑1-2滴在培養(yǎng)物上,再參加1%α-萘酚-乙醇液1-2滴,在30秒內(nèi)判定試驗(yàn)結(jié)果。3〕結(jié)果觀察與記錄在30秒內(nèi)呈藍(lán)色反響,為陽(yáng)性,記+不變色或?yàn)榉奂t色者,為陰性,記-.2〕試驗(yàn)方法取固體培養(yǎng)基上的新鮮菌落一環(huán)，置于潔凈玻片上〔或試管〕，滴加3%過(guò)氧化氫液數(shù)滴，或在瓊脂斜面培養(yǎng)物上直接滴加過(guò)氧化氫液，立即觀察結(jié)果。.3〕結(jié)果觀察與記錄產(chǎn)生氣泡者，為陽(yáng)性，記+不產(chǎn)生氣泡者，為陰性，記-.3.硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn)1〕原理：某些細(xì)菌具有復(fù)原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽復(fù)原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽可生成亞硝酸，亞硝酸與對(duì)氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再與α-萘胺作用，生成紅色的化合物，呈紅色反響，為陽(yáng)性反響。.試劑A、對(duì)氨基苯磺酸試劑B、α-萘胺試劑.2〕試驗(yàn)方法取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，在硝酸鹽培養(yǎng)基上接種，在36±1℃培養(yǎng)1~4天，每天取2mL培養(yǎng)液,參加A、B試劑的等量混合物各二滴混勻，立即觀察結(jié)果。.3〕結(jié)果觀察與記錄呈現(xiàn)紅色，為陽(yáng)性，記+假設(shè)無(wú)紅色出現(xiàn)，為陰性，記-.4.氰化鉀試驗(yàn)1〕原理：氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細(xì)菌的生長(zhǎng),但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時(shí)仍能生長(zhǎng),以此鑒別細(xì)菌..2〕試驗(yàn)方法

取培養(yǎng)20～24h的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌落1環(huán)，接種至對(duì)照培養(yǎng)基及氰化鉀培養(yǎng)基內(nèi)，立即以橡膠塞塞緊，36±1℃培養(yǎng)24～48h，觀察結(jié)果。.3〕結(jié)果觀察與記錄對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管有菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性，記+。對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管無(wú)菌生長(zhǎng)為陰性。記-。.〔四〕毒性酶類(lèi)試驗(yàn)溶血試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn).1.溶血試驗(yàn)1〕原理：某些細(xì)菌在代謝過(guò)程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，不同的細(xì)菌有不同的溶血反響，借此可鑒別細(xì)菌。.2〕試驗(yàn)方法平板法試管法.平板法將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，36±1℃培養(yǎng)24～48h，觀察結(jié)果。.溶血試驗(yàn)的溶血類(lèi)型及現(xiàn)象〔1〕α〔甲型〕溶血:菌落周?chē)霈F(xiàn)較窄的半透明的草綠色溶血環(huán)。〔2〕β〔乙型〕溶血:菌落周?chē)霈F(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)。〔3〕γ〔丙型〕溶血:菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán)。.甲型〔α-〕溶血乙型〔β-〕溶血丙型〔γ-〕溶血.β〔乙型〕溶血.試管法

將待檢菌培養(yǎng)液與等量的2%羊血球混合，在36±1℃培養(yǎng)16～18h，觀察結(jié)果。如溶血，培養(yǎng)液可出現(xiàn)透明狀。.3〕結(jié)果觀察與記錄有溶血現(xiàn)象，為陽(yáng)性，記+；無(wú)溶血現(xiàn)象，為陰性，記-.2.血漿凝固酶試驗(yàn)1〕原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，附著在細(xì)菌的外表，形成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固現(xiàn)象,為陽(yáng)性。.2〕試驗(yàn)方法〔1〕玻片法：取清潔枯燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔〔人〕血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5min內(nèi),如血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，那么為陽(yáng)性;如兩者呈均勻混濁，無(wú)凝固那么為陰性。.有凝塊均勻混濁血漿生理鹽水血漿凝固酶試驗(yàn).〔2〕試管法取滅菌小試管3支，各參加血漿－無(wú)菌水(1:1)0.5ml，1支參加被檢菌株的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液〔或濃菌懸液〕0.5ml；其余2支作對(duì)照管，1支參加金黃色葡萄球菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液或菌懸液0.5ml作陽(yáng)性對(duì)照;另1支參加營(yíng)養(yǎng)肉湯或0.9％氯化鈉溶0.5ml作空白對(duì)照。將3管同時(shí)放37℃溫箱或水浴中培養(yǎng)，每0.5h觀察一次，4h內(nèi)無(wú)凝固現(xiàn)象者，觀察直至24小時(shí)。.陽(yáng)性反響陰性反響不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固巨大塊凝固完全凝固，倒置不流動(dòng).金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)

.3〕試管法的結(jié)果觀察與記錄空白對(duì)照管的血漿流動(dòng)自如，陽(yáng)性對(duì)照管血漿凝固。試驗(yàn)管血漿凝固者為陽(yáng)性；均無(wú)凝固那么為陰性。.其他

檸檬酸鹽利用試驗(yàn)

1.有機(jī)酸鹽的利用試驗(yàn).

枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)

1〕原理：某些細(xì)菌能利用檸檬酸鹽作為唯一碳源，分解枸櫞(檸檬)酸鹽生成碳酸鹽；同時(shí)分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)色，為陽(yáng)性。.腸桿菌科各種細(xì)菌利用檸檬酸鹽的能力不同，有的菌可利用檸檬酸鈉作為碳源，有的那么不能。大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌

大腸埃希菌不能利用檸檬酸鹽，故不能在以檸檬酸鹽為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。檸檬酸鹽利用試驗(yàn)陰性。

產(chǎn)氣腸桿菌能在以檸檬酸鹽為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并分解檸檬酸鹽產(chǎn)生CO2，再生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基由中性變?yōu)閴A性，培養(yǎng)基中的指示劑BTB由綠色變?yōu)樗{(lán)色。枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)〔C〕實(shí)驗(yàn)原理舉例

.2〕試驗(yàn)方法

挑取待檢菌，在西蒙檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面上密集劃線接種，在36±1℃培養(yǎng)1~4天，每天觀察結(jié)果。.3〕結(jié)果觀察與記錄斜面有菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基斜面變?yōu)樗{(lán)色或深藍(lán)色，為陽(yáng)性，記+；無(wú)菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基斜面仍為綠色者，為陰性，記-.檸檬酸鹽試驗(yàn)原理及斜面照片陽(yáng)性+.2.三糖鐵〔TSI〕試驗(yàn).1〕三糖鐵試驗(yàn)的原理

如果細(xì)菌可利用乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)基全部變黃；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面最后為紅色，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類(lèi)不被氧化，仍保持黃色。如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培養(yǎng)基底部變黑。.制好的培養(yǎng)基對(duì)照管斜面紅色，底面黃色培養(yǎng)基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黃色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO2.2〕試驗(yàn)方法以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置36±1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。.大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和志賀氏菌原理？2－志賀氏菌3－沙門(mén)氏菌4－大腸桿菌.下面照片所示2-3-4，可能是大腸桿菌、沙門(mén)氏菌還是志賀氏菌？2－志賀氏菌3－沙門(mén)氏菌4－大腸桿菌.思考題提問(wèn)：志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。在培養(yǎng)基上應(yīng)該產(chǎn)生什么現(xiàn)象？大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。在培養(yǎng)基上應(yīng)該是什么現(xiàn)象？沙門(mén)氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣，在培養(yǎng)基上應(yīng)該是什么現(xiàn)象？.第三節(jié)培養(yǎng)基培養(yǎng)基：人工配制、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的混合養(yǎng)料。要求：應(yīng)具備6大營(yíng)養(yǎng)要素；物質(zhì)比例適宜；必須滅菌。營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、能源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水.微生物的六大營(yíng)養(yǎng)素.一、培養(yǎng)基的成分與分類(lèi)

.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水碳源兼能源氮源無(wú)機(jī)鹽生長(zhǎng)因子細(xì)胞的組成成分提供細(xì)胞代謝的介質(zhì)直接參與代謝過(guò)程降低細(xì)胞內(nèi)溫度維持生物大分子的天然構(gòu)象合成含氮物質(zhì)提供能量構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)提供能量

構(gòu)成細(xì)胞的組成成分；作為酶的組成成分；維持酶的活性；調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓；作為某些自養(yǎng)菌的能源。

1.培養(yǎng)基的成分維持細(xì)菌的代謝、繁殖.2.培養(yǎng)基的分類(lèi)⑴按成分的不同分天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基⑵按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基⑶按培養(yǎng)基用途根底培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基.二、培養(yǎng)基pH的測(cè)定與調(diào)整測(cè)定pH是培養(yǎng)基配制過(guò)程中的重要步驟之一，測(cè)定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃。調(diào)節(jié)pH可用無(wú)菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會(huì)比最終pH調(diào)高0.2左右，滅菌后根本適宜。

.二、培養(yǎng)基pH的測(cè)定與調(diào)整測(cè)定pH是培養(yǎng)基配制過(guò)程中的重要步驟之一，測(cè)定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃。調(diào)節(jié)pH可用無(wú)菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液。當(dāng)調(diào)節(jié)緩沖液的pH時(shí)，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液。一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會(huì)比最終pH調(diào)高0.2左右，滅菌后根本適宜。因此對(duì)培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進(jìn)行測(cè)定，并記下每次pH的測(cè)定結(jié)果，有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對(duì)滅菌程序的耐受性，從而指導(dǎo)滅菌前pH的調(diào)節(jié)。測(cè)定時(shí)，一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化，或用酸度計(jì)校正，如與所需pH不符，可用以上的酸或堿液加以校正。調(diào)整pH后要加熱過(guò)濾，使培養(yǎng)基澄清。.三、常用培養(yǎng)基的制備技術(shù)1.玻璃器皿的清洗制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細(xì)吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈，晾干后備用。〔1〕平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內(nèi)，于121℃高壓蒸汽滅菌3min后烘干，備用?！?〕試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，再用布或報(bào)紙包扎好，121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干，備用?！?〕吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端，然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi)，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干，備用。還可以160℃干熱滅菌2h后，備用。..2.培養(yǎng)基制備的根本方法和本卷須知〔1〕培養(yǎng)基配方的選定〔2〕培養(yǎng)基的制備記錄〔3〕培養(yǎng)基成分的稱(chēng)取〔4〕培養(yǎng)基各成份的混合和溶化〔5〕培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正〔6〕培養(yǎng)基的過(guò)濾澄清〔7〕培養(yǎng)基的分裝〔8〕培養(yǎng)基的滅菌〔9〕培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試〔10〕培養(yǎng)基的保存.培養(yǎng)基的分裝.2.培養(yǎng)基制備的根本方法和本卷須知〔1〕培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差異。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來(lái)源。〔2〕培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱(chēng)，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號(hào)，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂?！?〕培養(yǎng)基成分的稱(chēng)取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱(chēng)取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置于傍側(cè)，每稱(chēng)完一種成分即在配方做出記號(hào)，并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱(chēng)取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱(chēng)取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。.4、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。最好使用不銹鋼萵加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大局部固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一局部水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而喪失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。5、培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終PH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。PH調(diào)整后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。6、培養(yǎng)基的過(guò)濾澄清液體培養(yǎng)基必須絕對(duì)澄清，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無(wú)顯著沉淀，因此，須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以到達(dá)此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形，以防止因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、那么須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復(fù)過(guò)濾。如過(guò)濾法不能到達(dá)澄清要求、那么須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶?jī)?nèi)，裝入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2，每1000ml培養(yǎng)基參加1~2個(gè)雞蛋的蛋白，強(qiáng)力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。.7、培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎〔現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者〕。分裝時(shí)最好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，以為測(cè)定該批培養(yǎng)基最終pH之用。8、培養(yǎng)基的滅菌一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中，如無(wú)特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。某些畏熱成分，如糖類(lèi)，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無(wú)菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等那么應(yīng)以無(wú)菌操作技術(shù)抽取和參加于經(jīng)冷卻約50°C左右的培養(yǎng)基中。瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面，待其自然凝固。9、培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其最終pH。將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過(guò)夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，即棄去。用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時(shí)，如無(wú)菌生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，那么該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。10、培養(yǎng)基的保存培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過(guò)一周，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過(guò)3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽.〔4〕培養(yǎng)基各成分的混合和熔化溶化：一般應(yīng)放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi)。參加蒸餾水，隔水加熱以促其溶解，加熱時(shí)應(yīng)經(jīng)常攪拌，防止焦結(jié)，待其溶解后補(bǔ)足水分。在使用枯燥培養(yǎng)基時(shí)，先將蒸餾水按定量參加容器中，然后稱(chēng)取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中，靜置10—15min，攪拌，振蕩，或延長(zhǎng)時(shí)間以促進(jìn)溶解，一般不要熱，必要時(shí)加熱，但時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，溫度不宜過(guò)高，防止某些營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。.大微DW-9型微生物試劑分液器是一款精密輸送液體的電子蠕動(dòng)泵分液系統(tǒng)，是大微科技專(zhuān)為微生物實(shí)驗(yàn)室中各種試劑溶液(培養(yǎng)基、緩沖液、稀釋液等)的精確計(jì)量和分裝而設(shè)計(jì)，它可以使您頻繁的重復(fù)分液操作變得輕松、高效！配備不同直徑的分液管，在得到多種分裝量范圍的同時(shí)，保證精確的分液精度。儀器一機(jī)多用，1臺(tái)設(shè)備，即可實(shí)現(xiàn)“傾注平板制備〞和“試管分裝〞等多種用途；被廣泛應(yīng)用于各種食品、藥品企業(yè)、政府檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研單位的專(zhuān)業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室。3.可簡(jiǎn)易編程，能夠在設(shè)定的時(shí)間內(nèi)分注預(yù)設(shè)容量的液體，同時(shí)顯示分注累積容量。4.分裝快速，1L溶液分裝到100個(gè)試管中，最快僅需2分鐘。.〔3〕培養(yǎng)基的分裝：大批量配制時(shí)使用的自動(dòng)分配器須經(jīng)校準(zhǔn)和確認(rèn)。每次使用前后，均要對(duì)分配器的管道系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，在分裝無(wú)菌培養(yǎng)基前，那么要采用無(wú)菌硅膠管。固體培養(yǎng)基一般分裝在250ml、500ml錐形瓶中，高壓滅菌后根據(jù)需要分裝平皿或試管。平皿：傾注平皿，應(yīng)在無(wú)菌室中放置3—4h，如用塑料平皿須在35℃培養(yǎng)箱中倒置30—60min。讓水蒸汽自然蒸發(fā)。斜面：制備低層斜面分裝于試管，約占容積1/5，滅菌后趁熱斜放在細(xì)玻璃棒和木桿上，使成斜度，分裝使注意管口和瓶塞上勿沾有培養(yǎng)基，如沾有培養(yǎng)基應(yīng)用布抹去，以防止污染。高層斜面：制備高層斜面分裝于試管，約占試管容積的1/3，滅菌后趁熱放置成高層短斜面，待其凝固后應(yīng)用。分裝好的培養(yǎng)基或緩沖液等及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天〔2h內(nèi)最正確〕進(jìn)行滅菌處理。液體、半固體培養(yǎng)基一般在高壓滅前分裝，約裝試管容積的1/3，在滅菌后還要加其他成分的液體、半固體培養(yǎng)基，滅菌后再分裝于滅菌試管或錐形瓶中。培養(yǎng)基的滅菌：培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌，各種培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和壓力，按其成分不同而定。普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min，但容器和裝量較大時(shí)，應(yīng)延長(zhǎng)至20min。含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動(dòng)蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續(xù)3d，間歇滅菌。血清或組織液，采用低熱56—58水浴1h，連續(xù)5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等，可用細(xì)菌過(guò)濾器，過(guò)濾除菌。高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣，再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時(shí)間，到達(dá)全部殺滅微生物。以上的滅菌時(shí)間和溫度要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證確認(rèn)，如不同類(lèi)型培養(yǎng)基混合一起滅菌時(shí)宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。.

稱(chēng)量：按照配方正確稱(chēng)取各種原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中參加所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解。調(diào)pH值：用1NNaOH或1NHCl調(diào)pH，用pH試紙對(duì)照。加瓊脂溶化：加熱過(guò)程中要不斷攪拌，可適當(dāng)補(bǔ)水。分裝：注意不要污染棉塞。包扎成捆，掛上標(biāo)簽〔必須用鉛筆寫(xiě)〕，注明何種培養(yǎng)基。滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在370C下恒溫培養(yǎng)24h，確定無(wú)菌生長(zhǎng)，方可使用。2.培養(yǎng)基的制備.3.食品檢驗(yàn)常用培養(yǎng)基的制備技術(shù).〔1〕根底培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏3g蛋白胨10g氯化鈉5g瓊脂20g自來(lái)水1000mLpH7.2~7.4滅菌

121℃15min用于別離和培養(yǎng)細(xì)菌.

馬鈴薯〔或豆芽汁〕蔗糖〔或葡萄糖〕瓊脂培養(yǎng)基〔用于別離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基〕其配方如下：去皮馬鈴薯〔或鮮豆芽〕200g蔗糖〔或葡萄糖〕20g自來(lái)水1000mL瓊脂20gpH自然滅菌：〔含蔗糖〕1.05kg/cm220min〔含葡萄糖〕0.1kg/cm230min〔2〕PDA培養(yǎng)基.

〔3〕淀粉瓊脂培養(yǎng)基〔高氏一號(hào)〕配方如下：可溶性淀粉20.0gKNO31.0gK2HPO40.5gMgSO4?7H2O0.5gNaCl0.5gFeSO4?7H2O0.01g瓊脂20g自來(lái)水1000mL滅菌：121℃15min用于別離和培養(yǎng)放線菌，是一種合成培養(yǎng)基。.

無(wú)菌水為下一次微生物別離實(shí)驗(yàn)中所需要的材料。100mL三角燒瓶〔裝有玻璃珠〕，裝自來(lái)水45.0mL，試管中裝9.0mL自來(lái)水，塞上棉塞，包扎、滅菌備用。三角燒瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。無(wú)菌水的制備.

棉塞的制作

.培養(yǎng)基制備技術(shù)

----培養(yǎng)基分類(lèi)根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否完全了解來(lái)區(qū)分：１〕天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等。用這些物質(zhì)配成的培養(yǎng)基雖然不能確切知道它的化學(xué)成分，但一般來(lái)講，營(yíng)養(yǎng)是比較豐富的，微生物生長(zhǎng)旺盛，而且來(lái)源廣泛，配制方便，所以較為常用，尤其適合于配制實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性常受生產(chǎn)廠或批號(hào)等因素的影響。２〕合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是一類(lèi)化學(xué)成分和數(shù)量完全知道的培養(yǎng)基，它是用化學(xué)成分的化學(xué)藥品配制而成。這類(lèi)培養(yǎng)基化學(xué)成分精確、重復(fù)性強(qiáng)，但價(jià)格昂貴，而微生物又生長(zhǎng)緩慢，所以它只適用于做一些科學(xué)研究，例如營(yíng)養(yǎng)、代謝的研究。３〕半合成培養(yǎng)基在合成培養(yǎng)基中，參加某種或幾種天然成分；或者在天然培養(yǎng)基中，參加一種或幾種成分的化學(xué)藥品即成半合成培養(yǎng)基。例如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等。這種培養(yǎng)基在生產(chǎn)實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)室中使用最多。根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來(lái)區(qū)分：１〕液體培養(yǎng)基所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的，其中的成分根本上溶于水，沒(méi)有明顯的固形物，液體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分分布均勻，易于控制微生物的生長(zhǎng)代謝狀態(tài)。２〕固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中參加適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等，以瓊脂最為常用。固體培養(yǎng)基在實(shí)際中用得十分廣泛。３〕半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑參加到液體培養(yǎng)基中，就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例，它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時(shí)可用來(lái)觀