仔豬黃痢大腸桿菌的分離鑒定

仔豬黃痢大腸桿菌的分離鑒定仔豬黃痢病是出生仔豬常發(fā)的急性、致死性腸道傳染病，多在仔豬出生后幾天內(nèi)發(fā)病，發(fā)病率高、死亡率高。臨床癥狀主要以腹瀉、排黃色稀糞、急性死亡為主要特征，剖檢有腸炎和敗血癥變化，是危害哺乳仔豬的重要傳染病之一，嚴(yán)重影響仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。2015年3月，北京順義某豬場(chǎng)突發(fā)仔豬腹瀉，排黃白色或黃色水樣稀便，根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀和病理剖檢，并結(jié)合細(xì)菌病原分離、生化鑒定，致病性試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)，確診為仔豬黃痢大腸桿菌病。對(duì)分離的菌株進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，篩選出了3種敏感藥物，根據(jù)診斷及藥敏試驗(yàn)結(jié)果采取了相應(yīng)的控制措施，效果顯著經(jīng)治療，病情得到了有效控制?，F(xiàn)報(bào)告如下。1發(fā)病情況北京順義某豬場(chǎng)于2015年3月，5日齡仔豬突然發(fā)病，仔豬腹瀉不止，患豬糞便呈黃白色或黃色水樣，仔豬迅速消瘦、全身衰弱，很快死亡。2臨診癥狀患豬腹瀉黃色水樣、順肛門流下。精神沉郁，停止吃乳，脫水，迅速消瘦。3病理變化心包增厚，心包膜外面覆蓋纖維素性滲出物，心外膜小點(diǎn)出血。肝表面覆蓋一層灰黃色纖維素膜，肝腫大呈土黃色，表面有細(xì)小的灰白色壞死點(diǎn)。脾腫大出血。十二指腸出血。4實(shí)驗(yàn)室診斷4.1細(xì)菌分離培養(yǎng)將采集的2份肝臟組織分別接種馬丁瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)18?24h，觀察菌落形態(tài)。挑取可疑菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢、純培養(yǎng)。4.2生化試驗(yàn)參照BioMerieuxVITEK32全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏儀鑒定操作說(shuō)明進(jìn)行。取純化的單菌落接于0.45%NaCL基物安培管，用比濁儀制備混濁度相當(dāng)于1個(gè)麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?，接種于VITEK革蘭氏陰性菌鑒定卡（GNI+），放入讀數(shù)器中鑒定讀取結(jié)果。4.3致病性試驗(yàn)將上述生化試驗(yàn)鑒定為大腸桿菌陽(yáng)性的菌株，分別取純化的單菌落接種普通營(yíng)養(yǎng)肉湯，37C培養(yǎng)24h，將每個(gè)菌株的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物分別經(jīng)腹腔接種小白鼠各2只，每只注射0.2mL,同時(shí)用無(wú)菌肉湯以同樣途徑接種2只小白鼠作為對(duì)照，觀察、記錄試驗(yàn)結(jié)果。對(duì)死亡小白鼠剖檢，并從肝、脾取樣接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)18?24h,觀察結(jié)果。挑取單個(gè)菌落用革蘭氏染色法染色、鏡檢。4.4藥敏試驗(yàn)采用紙片法進(jìn)行。15種抗菌藥物紙片：氟苯尼考、慶大霉素、氟哌酸、氧氟沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、卡那霉素、阿莫西林、四環(huán)素、鏈霉素、環(huán)丙沙星、林可霉素、新霉素、金霉素、紅霉素。5結(jié)果5.1細(xì)菌分離培養(yǎng)2份樣品經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)良好，馬丁瓊脂培養(yǎng)基上可見灰白色、圓形、光滑、濕潤(rùn)的菌落，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊的小菌落，革蘭氏染色為陰性小桿菌。符合大腸桿菌的培養(yǎng)及形態(tài)特征。5.2生化試驗(yàn)將從病料中分離純化的菌落經(jīng)BioMerieuxVITEK32全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定得到極好鑒定結(jié)果，36株菌株均能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、阿拉伯糖、乳糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不發(fā)酵棉子糖、肌醇、側(cè)金盞花醇；多數(shù)不能發(fā)酵蔗糖，少數(shù)發(fā)酵產(chǎn)酸；鳥氨酸脫羧酶、氧化酶均為陰性；甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性，V.P.試驗(yàn)陰性。符合大腸桿菌的生化特性。5.3致病性試驗(yàn)將生化試驗(yàn)鑒定為大腸桿菌陽(yáng)性的2株菌株的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物分別經(jīng)腹腔接種小白鼠各2只，24h內(nèi)全部發(fā)病死亡，對(duì)照組均健活。對(duì)死亡小白鼠剖檢，并從肝、脾取樣接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37C培養(yǎng)18?24h，結(jié)果在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊的小菌落。挑取單個(gè)菌落用革蘭氏染色法染色、鏡檢，可見革蘭氏陰性小桿菌。結(jié)果表明，分離純化的2株大腸桿菌均為致病性大腸桿菌。5.4藥敏試驗(yàn)經(jīng)鑒定，15種抗生素中氟苯尼考和新霉素高度敏感，慶大霉素中度敏感，其余12種均耐藥。6小結(jié)與討論6.1根據(jù)菌株形態(tài)染色鏡檢觀察、培養(yǎng)特性、生化特性等結(jié)果，可以確定所分離的菌株為大腸桿菌。6.2從藥敏試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，從此豬群分離的大腸桿菌的耐藥性很強(qiáng)，15種抗生素中只有2種高度敏感，這可能與臨床中不合理使用抗生素有關(guān)。此豬場(chǎng)采用氟苯尼考、新霉素高敏藥物治療，同時(shí)采用合理的相應(yīng)綜合防治措施，效果顯著，病情得到了有效控制。6.3目前，豬大腸桿菌病仍然是我國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)的重要多發(fā)病，隨著集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，由致病性大腸桿菌引起的仔豬腹瀉是目前最嚴(yán)重的仔豬傳染病之一，也是引起仔豬死亡的重要原因，其造成的經(jīng)濟(jì)損失日益嚴(yán)重。近年來(lái)，在我國(guó)，由致病性大腸桿菌引起的仔豬黃白痢有明顯上升趨勢(shì)，終年發(fā)生，仔豬死亡率增高，成活率降低，斷奶窩重降低，如果仔豬黃白痢與其他豬病混合感染，其死亡率更高。發(fā)病豬場(chǎng)經(jīng)過(guò)敏感藥物治療后，雖然能夠一定程度上降低仔豬的死亡率，但耐過(guò)豬大多生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、飼料報(bào)酬率降低。因此，采取有效的措施預(yù)防和控制仔豬腹瀉，提高仔豬成活率己成為目前養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)的一項(xiàng)重要任務(wù)。6.4仔豬大腸桿菌病的發(fā)生受多種因素的影響，大腸桿菌的病原學(xué)特性、飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)狀況及環(huán)境因素對(duì)本病的發(fā)生都有著重要影響。因此，防治本病除了有針對(duì)性地免疫接種、使用敏感藥物外