DB37-T 4206-2020 漁用獸藥 中草藥中氯霉素的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

65.020.30CCS

B

42DB37 37/T

4206—2020漁用獸藥 中草藥中氯霉素的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

of

in

Chinese

by

liquid

tandem

山東省市場監(jiān)督管理局 發(fā)

布DB37/T

4206—2020 本文件按照GB/T

—《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實施。本文件有山東省農(nóng)業(yè)標準化委員會漁業(yè)標準化分技術委員會歸口（魯）。本文件起草單位：山東省淡水漁業(yè)研究院、青島市華測檢測技術有限公司。本文件主要起草人：吳蒙蒙、姚建華、朱永安、武風娟、孫棟、趙華鋒、張嬋、郭芳芳、劉紅彩。DB37/T

4206—2020 1 范圍本文件規(guī)定了漁用獸藥

中草藥中氯霉素測定的原理、試劑和耗料、儀器設備、樣品、測定步驟、測量結果、檢測方法靈敏度、回收率、精密度、線性范圍。本文件適用于漁用獸藥

中草藥中氯霉素的測定方法。2 規(guī)范性引用文件文件。GB/T

6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4 原理C18凈化后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標法定量。5 試劑和耗材5.1

水：GB/T

6682，一級。5.2

乙酸乙酯：色譜純。5.3

乙腈：色譜純。5.4

甲醇：色譜純。5.5

氨水：分析純。5.6

50

%乙腈水溶液：將

50

乙腈與

50

水混合均勻。5.7

氯化鈉：分析純。5.8

氯霉素標準品：氯霉素

，純度不低于

%

3

5.9

標準溶液的配置。a)

mg(精確至

0.01

mg)于

mL

(4.4)溶解定容，該溶液濃度為

1

mg/mL。

℃避光保存，有效期為

6

個月。b)

0.1

mL

于

mL

定容，該溶液濃度為

10

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期為

3

個月。DB37/T

4206—2020c)

0.1

mL

于

10

mL

釋定容。該溶液濃度為

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期為

3

個月。d)

氯霉素氘代內(nèi)標：氯霉素

D-5，純度不低于

99

%-18

℃儲存，有效期

3

e)

氘代氯霉素儲備液：10

精確至

0.01

mg)于

10

mL

棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，該溶液濃度為

1

mg/mL。-18

6

個月。f)

于

mL

甲醇稀釋定容，該溶液濃度為

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期為

3

個月。g)

0.1

mL

于

10

醇稀釋定容。該溶液濃度為

0.1

μ

g/mL。-18

℃避光保存，有效期為

3

個月。5.10 實驗耗材5.10.1 C18固相萃取柱：1

000

mg/6

mL。5.10.2 微孔濾膜：0.22

μ

m，有機系。6 儀器設備6.1

液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（）。6.2

電子天平：感量

0.000

1

g

和

0.01

mg。6.3

旋渦混合器。6.4

離心機：轉速不低于

10

r/min。6.5

固相萃取裝置。6.6

超聲波震蕩器。6.7

旋轉蒸發(fā)儀。7 樣品部過0.45

篩，用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內(nèi)，加封后作出標記，一份作為試樣，一份作為留樣。液體樣品混勻后取出部分作為試樣，其余樣品作為留樣。8 測定步驟8.1 提取稱取2

g（精確至0.001

g50

μ

L8

mL混勻后靜置30

，加入

mL氨水，再加入

mL乙酸乙酯，振蕩提取10

min，10000

r/min離心5

min，取上層乙酸乙酯于雞心瓶中，40

℃旋轉濃縮至近干，加入2

mL乙腈渦旋混勻，取1

mL4

水混勻。8.2 凈化依次用6

mL乙腈和6

C18

mL乙腈水，收集洗脫液于50

mL離心管中，加入約0.5

g氯化鈉使上述溶液飽和，振蕩，4

r/min5

min，取上層乙腈層于40

℃氮吹濃縮至干。準確加入2

mL乙腈溶液定容，過0.22

μ

m濾膜。8.3 標準工作曲線的制備minmL/min

0.000.310901.500.3953.500.3953.510.310905.000.31090

Parentm/z

Daughterm/z

Cone

Energy321.0152.12518321.0257.12512-D5326.1157.12518DB37/T

4206—2020精確移取適量氯霉素標準工作液于10

mL0.1

mL乙腈水溶液稀釋成濃度分別為0.2

μ

、0.5

μ

g/L、

μ

、1.0

μ

、5.0

μ

的標準溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配，供液相色譜-串級質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標法定量。8.4 儀器測定8.4.1 液相色譜條件色譜柱：

C18柱，長50

mm，內(nèi)徑

mm，粒徑

μ

m40

℃；流速：0.3

mL/min；進樣量：3

μ

L；流動相：A：乙腈；B：水，梯度洗脫條件見表1。表1 梯度洗脫程序表8.4.2 質(zhì)譜條件離子化模式及掃描方式：電噴霧負離子掃描（ESI-）；檢測方式：多反應檢測（）；毛細管電壓（Capillary2.0

Kv；脫溶劑溫度（

Temperature

脫溶劑氣流速（）：1000

L/Hr；錐孔氣流速（Cone

L/hr；霧化氣（Nebuliser）：

Bar；定性離子對、定量離子對及電壓、碰撞能量見表2。表2質(zhì)譜參數(shù)8.4.3 定性測定在相同測定條件下，待測物在樣品中的保留時間與標準工作液中的保留時間相對偏差在±

%之較，若相對偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷為樣品中存在對應的待測物。5020101020253050DB37/T

4206—2020表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差8.4.4 定量測定氯霉素標準工作液特征離子的多反應監(jiān)測（）色譜圖見附錄A。8.5 空白測試除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。8.6 平行測試按照上述前處理方式對同一樣品進行平行試驗測試。9 測量結果試樣中氯霉素的含量按公式（1）計算，數(shù)值以微克每千克（μ

g/kg）表示，計算結果需扣除空白值：X=

c

nm

......................................

(1)式中：X

——樣品中氯霉素的含量（μ

g/kg）；c

——從內(nèi)標標準曲線查得的試樣溶液氯霉素的濃度，單位為微克每升（μ

）；V

——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；n

——等分倍率；m

——試樣的質(zhì)量，單位為克（g測定結果用平行測定算術平均值表示，結果保留2位有效數(shù)字。10 檢出限、回收率、精密度、線性范圍10.1 檢出限與定量限本方法檢出限為0.3

μ

，定量限為1

μ

g/kg。10.2 回收率本方法基質(zhì)加標樣品加標量1

μ

g/kg～10

μ

g/kg范圍內(nèi)，回收率均為80

%～

%。10.3 精密度本方法的批內(nèi)變異系數(shù)CV小于等于10

%，批間變異系數(shù)CV小于