DB22T 3601-2023人參銹腐病菌分子檢測 實時熒光定量PCR法_第1頁
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22法請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件起草單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)、吉林參王植?？萍加腥藚P腐病菌分子檢測實時熒光定量PCR法本文件適用于人參根和土壤中銹腐病菌的實時熒光定量PCR分GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和GB/T28067甘蔗黃葉病毒實時熒光RT-PCR檢測方法3.13.2一種主要由強壯土赤殼菌（Ilyonectriarobusta）一種在DNA擴增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測定每次聚合3.3Ct值cyclethreshold根據(jù)人參銹腐病強壯土赤殼菌I.robusta組蛋白Histone基因的保守序列設(shè)計一對特異性引物進行PCR擴增反應(yīng)。利用熒光信號伴隨目的PCR產(chǎn)物的增加而增強的原理，收集PCR擴增過程的熒5.2試劑5.2.3土壤總DNA提取試劑5.2.4實時熒光定量PCR試5.3引物6.8恒溫水浴鍋。6.9渦旋振蕩器。7.1.2.1經(jīng)分子檢測3次未檢出強壯土赤殼菌的健康人參根基因組7.1.2.2經(jīng)分子檢測3次未檢出強壯土赤殼菌的土壤7.2樣品采集與制備每25m2人參田塊采用梅花形采樣法，不少準備人參根樣品和土壤樣品，參照基因組DNA提取試劑盒說明要求提取基因組DNA。采用核酸蛋2.0之間時，DNA模板適宜熒光定量PCR擴增。用無菌一級水將模板DNA濃度稀釋成50ng/μL用8.2實時熒光定量PCR反應(yīng)體積(μL）按照商品化試劑盒說明書

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