病毒載體概述

病毒載體研究進(jìn)展基因載體系統(tǒng)病毒載體系統(tǒng)非病毒載體系統(tǒng)腺病毒載體反轉(zhuǎn)錄病毒載體腺伴隨病毒載體單純皰疹病毒載體慢病毒載體裸DNADNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)復(fù)合物DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物細(xì)胞內(nèi)包裝細(xì)胞外包裝DNA-陽(yáng)離子多聚物DNA/RNA嵌合物吳小兵〔‘863’方案生物領(lǐng)域病毒基因載體研發(fā)基地〕整理ppt病毒載體概述〔1〕要求：1、攜帶外源基因并能包裝成感染性病毒顆粒2、介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)移和表達(dá)3、對(duì)機(jī)體不致病容量：自身基因組大小的105%~110%類型：1、重組型病毒載體

2、無(wú)病毒基因的病毒載體復(fù)制缺陷型

可復(fù)制型復(fù)制缺陷型組成：1、病毒復(fù)制和包裝元件2、病毒基因3、插入的外源基因或元件4、病毒外殼/外膜

用途：基因轉(zhuǎn)移和表達(dá)1、基因治療2、疫苗3、器官移植4、組織工程5、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物6、基因功能研究整理ppt病毒載體概述〔2〕優(yōu)點(diǎn)：1、利用病毒天然的感染性進(jìn)入細(xì)胞，轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高；2、復(fù)雜的裝配過(guò)程由細(xì)胞完成；3、不同的病毒載體具有不同的表達(dá)特點(diǎn)。存在的問(wèn)題：1、安全性 2、靶向性 3、有效性細(xì)胞毒性染色體毒性免疫毒性轉(zhuǎn)導(dǎo)靶向性轉(zhuǎn)錄靶向性轉(zhuǎn)導(dǎo)效率靶向性基因表達(dá)水平和持續(xù)時(shí)間表達(dá)的可調(diào)控性整理ppt常用的病毒載體的特點(diǎn)：整理ppt病毒載體研究方向1、病毒包裝系統(tǒng)2、無(wú)病毒基因的病毒載體6、自我擴(kuò)增型病毒載體7、條件增殖型病毒載體5、嵌合型病毒載體3、靶向性病毒載體4、可調(diào)控表達(dá)的病毒載體8、新病毒載體整理ppt病毒載體包裝系統(tǒng)組成：1、宿主細(xì)胞2、輔助元件〔輔助質(zhì)粒、輔助病毒〕3、被包裝的DNA/RNA包含順式作用元件單因素生產(chǎn)系統(tǒng)〔one-componentsystem)雙因素生產(chǎn)系統(tǒng)(two-componentsystem)gagpolenvLTRLTR

圖1反轉(zhuǎn)錄病毒包裝系統(tǒng)示意圖圖2腺病毒包裝系統(tǒng)示意圖

293cellE1a,bJM17AdShuttle

293cellE1a,b整理ppt多因素生產(chǎn)系統(tǒng)(multi-componentsystem)多因素系統(tǒng)雙因素系統(tǒng)圖3腺病毒伴隨病毒包裝系統(tǒng)示意圖hostcellHelpervirusHelperplasmidrepcapVectorplasmidHostcell+vectorDNAHelpervirus+helperplasmid圖4雙因素系統(tǒng)生產(chǎn)重組AAV病毒示意圖proviralcellRecombinanthelpervirus(rHSV-repcap)repcap整理ppt無(wú)病毒基因的病毒載體被包裝的DNA/RNA中不含任何病毒編碼基因，只保存其復(fù)制和包裝所必需的順式作用元件。獲得的重組病毒顆粒具有野生型病毒的外殼/外膜和感染性，但不表達(dá)病毒蛋白。腺伴隨病毒載體：反轉(zhuǎn)錄病毒載體：腺病毒載體：?jiǎn)渭儼捳畈《据d體：LTRLTR

genegeneITRITRpAgeneITRITRpAgenepacorigenegenegenegene整理ppt無(wú)輔助病毒包裝系統(tǒng)圖5重組AAV無(wú)輔毒包裝系統(tǒng)adenovirusgeneITRITRaavvectorplasmidE2aE4orf6VAHelperplasmid:293細(xì)胞E1a,bcre293-cregeneITRITRAdenoviruswithpackagingsignalflankedbyloxP圖6mini-adnovirus無(wú)輔毒包裝系統(tǒng)整理ppt靶向性病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)靶向性轉(zhuǎn)錄靶向性〔特異性〕改造病毒外殼/外膜連接靶向性結(jié)合分子Modifiedadenoviruscell組織特異性啟動(dòng)子腫瘤選擇性啟動(dòng)子細(xì)胞周期調(diào)控啟動(dòng)子腫瘤血管內(nèi)皮導(dǎo)向啟動(dòng)子雙特異性啟動(dòng)子病毒增殖的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控整理ppt可調(diào)控表達(dá)的病毒載體細(xì)胞的調(diào)控元件病毒的調(diào)控元件人工合成的調(diào)控元件細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄細(xì)胞啟動(dòng)子病毒啟動(dòng)子albuminMVMP4TyrosinaseorTRP-1B19promoterPSAHBVMBPJCVMCKEBVGFAPNSEKDR/flt-1AFPCEAerbB2HREMDR1P1tTAtetOpgeneP1tTAtetOpgenetTAtetOpgenetetOp四環(huán)素調(diào)控合成的轉(zhuǎn)錄因子GAL4PRVP16RXREcRVP16FKB12ZFHD-1FRAPP65rapamycinRU486GAL4ERVP16ESTRADIOLGAL4ERp65Diphenolindenemuristerone整理ppt整理ppt重組病毒的生產(chǎn)和純化小量制備和純化大量制備和純化場(chǎng)所細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞裂解病毒別離病毒純化制劑保存培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)瓶、細(xì)胞工廠、發(fā)酵罐反復(fù)凍融機(jī)械法或化學(xué)法裂解實(shí)驗(yàn)室中試車間離心離心、超濾、萃取密度梯度超速離心濃縮、柱層析配方緩沖液低溫整理ppt病毒載體與基因治療產(chǎn)業(yè)化基因治療產(chǎn)品的知識(shí)產(chǎn)權(quán)構(gòu)成1、治療基因2、調(diào)控元件3、改造的外殼/外膜4、靶向分子5、包裝系統(tǒng)6、生產(chǎn)和純化技術(shù)7、制劑和保存技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的組織和實(shí)施：1、合作開(kāi)發(fā)2、專業(yè)分工3、政府支持和企業(yè)投資4、利益分配基因治療的三個(gè)核心局部1、基因載體系統(tǒng)2、基因表達(dá)系統(tǒng)3、治療基因整理ppt知識(shí)產(chǎn)權(quán)和根底研究專利對(duì)學(xué)術(shù)研究的影響1、無(wú)影響〔對(duì)非常早期研究〕2、有影響〔對(duì)臨床試驗(yàn)和可能的商業(yè)開(kāi)發(fā)〕基因治療領(lǐng)域的知識(shí)產(chǎn)權(quán)主要通過(guò)專利系統(tǒng)來(lái)保護(hù)對(duì)于基因治療公司最重要的專利是：1、載體系統(tǒng)；2、生產(chǎn)過(guò)程；3、整體治療方案治療基因和表達(dá)系統(tǒng)可