中藥指紋圖普研究

中藥指紋圖譜研究1中藥指紋圖譜的含義及重要性

2中藥指紋圖譜的測(cè)定方法

3存在的問(wèn)題及前景展望1中藥指紋圖譜的含義及重要性

隨著我國(guó)加入WTO，被譽(yù)為“國(guó)粹”的中藥越來(lái)越被制藥界所看好。但是，對(duì)中藥而言，應(yīng)用上千年，但仍沒(méi)擺脫“丸、散、膏、丹”難辨的局面，并且長(zhǎng)期以來(lái)我們未能從根本上解決質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題，使中藥跨出“國(guó)門”受到了阻礙。近年來(lái)，我國(guó)科研人員經(jīng)過(guò)潛心研究，終于找到了控制中藥內(nèi)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的辦法，中藥指紋圖譜(fingerprintoftraditionalChinesemedicine)技術(shù)。1）含義：

指紋圖譜最初來(lái)源于犯罪學(xué)和法醫(yī)學(xué),依據(jù)每個(gè)人的指紋（如：拱形、環(huán)形和螺形）在微小細(xì)節(jié)構(gòu)造上的不同,可以鑒定出不同個(gè)體，大大提高了偵破率。

中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，借助計(jì)算機(jī)和現(xiàn)代分析技術(shù)，可以將中藥的特性和有效成分采用色譜圖或光譜圖的形式描繪出來(lái)，標(biāo)示其化學(xué)特征，使每味中藥都擁有如人的指紋一樣的標(biāo)準(zhǔn)圖譜。它是一種綜合的，可量化的鑒定手段，是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評(píng)價(jià)中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。2）重要性目前，指紋圖譜已成為國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的鑒別中藥品種和評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的最有效手段，也是中藥現(xiàn)代化的重要標(biāo)志。2000年，美國(guó)FDA允許草藥保健品申報(bào)資料可以提供色譜指紋圖鑒別資料[1]。德國(guó)藥用植物學(xué)會(huì)、加拿大藥用及芳香植物學(xué)會(huì)、英國(guó)草藥典和印度草藥典也接受色譜指紋圖譜。2中藥指紋圖譜的測(cè)定方法

（1）薄層色譜法(TLC)（2）高效液相色譜法(HPLC)（3）氣相色譜法(GS)

（4）高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)（5）高速逆流色譜法（HSCCC）（6）X-射線衍射法（7）紅外光譜法(IR)（8）紫外光譜法(UV)（9）核磁共振法(NMR)（10）質(zhì)譜法（MS）

（11）其他方法（OTHERS）（1）薄層色譜法(TLC)TLC的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、分析速度快、結(jié)果直觀形象、應(yīng)用范圍廣泛。謝培先生等對(duì)人參、西洋參、三七，在規(guī)范操作條件下得到的TLC熒光彩色圖像，在同一板上形象地展示了3個(gè)樣品的異同。而后謝培山、顏玉貞又使用CAMAG系列薄層掃描儀對(duì)黃連中的黃酮類成分等進(jìn)行了薄層色譜指紋分析。李彩君等以高良姜素為對(duì)照品,建立了高良姜藥材的薄層色譜定性鑒別。（2）高效液相色譜法(HPLC)HPLC的特點(diǎn)是分離效果好、精密度高、準(zhǔn)確性好、分析速度快。

GulnurToke等人對(duì)土耳其藥用植物闊葉椴（TiliaPlatyphylos）中的花、葉以及苞葉中的黃酮類使用反相HPLC進(jìn)行分析，建立了一種快捷準(zhǔn)確的質(zhì)量檢測(cè)方法。并且將結(jié)果與其他同屬的2種土耳其常見(jiàn)植物作比較。結(jié)果表明，同屬不同種植物的黃酮類成分有其特征性的HPLC色譜圖，可用于粗藥品的鑒定。JamalFaghihi等人應(yīng)用反相HPLC技術(shù)對(duì)大豆的各極性提取物進(jìn)行了檢測(cè)，并獲得了一系列具有代表性且重現(xiàn)性較好的指紋圖譜。（3）氣相色譜法(GS)

GC的特點(diǎn)是高效、靈敏、樣品用量少、分析速度快，用于中藥揮發(fā)性成分的分離和鑒定。李秀珍,高海等用GC法測(cè)定魚腥草注射液揮發(fā)性成分,建立了魚腥草注射液指紋圖譜分析法。吳忠等人研究了仲景胃靈片及其原料藥的低級(jí)性提取部分的氣相色譜,獲得其可靠的指紋特征譜圖。（4）高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)HPCE的特點(diǎn)是分離模式多、效率高、速度快、適用范圍廣、樣品用量少、靈敏度高。王寅,喬傳等深入研究了不同居群大青葉的理化特征，表明異地栽培的大青葉藥材的酸性提取部位的化學(xué)成分及含量有很明顯的差異，跟據(jù)電泳圖特征峰的遷移時(shí)間和峰面積能有效地鑒別不同居群大青葉藥材。王鋼力等用HPCE的MECC的分離模式,測(cè)定了18個(gè)卷柏屬植物樣品的乙酸乙酯提取物,以相對(duì)峰面積和相對(duì)遷移時(shí)間為參數(shù),建立了18個(gè)樣品的毛細(xì)管電泳指紋圖譜。

（5）高速逆流色譜法（HSCCC）

HSCCC的特點(diǎn)是操作更為簡(jiǎn)便，容易掌握。袁黎明等通過(guò)HSCC研究了虎杖、茜草及決明子，還用HSCC分離、制備黃柏中的生物堿。

（6）X-射線衍射法

X-射線衍射法的特點(diǎn)是指紋性強(qiáng)，圖譜穩(wěn)定可靠。鄭笑為等應(yīng)用粉末X衍射Fourier譜分析法建立了珍珠粉、海水珍珠、淡水珍珠的指紋圖譜,并對(duì)珍珠質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià)。王樹春等人采用X衍射Fourier譜分析法比較識(shí)別了天然熊膽與引流熊膽汁干燥品、熊膽與偽品的區(qū)別（7）紅外光譜法(IR)

孫素琴等采用紅外指紋圖譜結(jié)合計(jì)算機(jī)輔助比對(duì)的技術(shù),能快速地對(duì)道地藥材進(jìn)行質(zhì)量鑒別,適合大量樣品的快速鑒別研究,為道地藥材的質(zhì)量鑒別研究提供了科學(xué)理論依據(jù)。

（8）紫外光譜法(UV)

石春新等總結(jié)了近幾年來(lái)紫外光譜在中藥材真?zhèn)舞b別中的應(yīng)用。

（9）核磁共振法(NMR)NMR的特點(diǎn)是具有高度的特征性和重現(xiàn)性。王思宏等通過(guò)對(duì)NMR的研究，獲得了野生和栽培高山紅景天有效成分紅景天甙的特征核磁共振指紋圖譜,并以此為依據(jù)對(duì)高山紅景天進(jìn)行真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評(píng)價(jià)。（10）質(zhì)譜法（MS）

袁湘林等利用基體輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)黃芪及其偽品進(jìn)行了分析辨別。（11）其他方法（OTHERS）

中藥指紋圖譜的研究除上述方法外，還有色譜連用技術(shù)及DNA指紋圖譜等。目前最常用的色譜連用技術(shù)是高效液相譜(或毛細(xì)管電泳)/二極管陣列檢測(cè)器/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用方式(HPLC或CE/DAD/MS/MS)所得的多維指紋圖譜。

陶鈞等獲得了天麻基因組DNA的RAPD擴(kuò)增優(yōu)化條件和適合于天麻遺傳分化研究的DNA指紋圖譜。3存在的問(wèn)題及前景展望

在眾多的分析方法中,色譜法是主要的手段,尤其是TLC、HPLC和GC色譜技術(shù)。TLC是一種開(kāi)放系統(tǒng),外界影響因素較多,必然增加了實(shí)驗(yàn)的難度；HPLC中色譜峰的定位受很多因素的影響，一般色譜峰用其保留值來(lái)定位，雖然色譜實(shí)驗(yàn)條件是控制保留值的主要因素，但也有許多非色譜技術(shù)（比如操作因素）對(duì)其產(chǎn)生影響。另外中藥來(lái)源復(fù)雜，摻偽嚴(yán)重，即使同種正品也會(huì)因生長(zhǎng)地域、采集時(shí)間、加工和存儲(chǔ)條件不同而引起組分和含量的變化。因此中藥本身的復(fù)雜性和測(cè)定方法的易變性對(duì)保證圖譜較好的穩(wěn)定性、可靠性、重現(xiàn)性有很大的難度。

因?yàn)橹讣y圖譜本身的特點(diǎn)是整體性和模糊性，所以其共有峰和特異峰僅靠人眼難以確定。而利用計(jì)算機(jī)模型和模糊數(shù)學(xué)的方法,可以比較好的解決這一問(wèn)題。

這就要求我們多學(xué)科協(xié)同開(kāi)展指紋圖譜研究，即用多學(xué)科交叉綜合技術(shù)手段對(duì)中藥中復(fù)雜成分質(zhì)量的穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)的計(jì)算機(jī)輔助分析檢測(cè)方法。并在中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)積累的基礎(chǔ)上建立信息數(shù)據(jù)庫(kù)，使中藥質(zhì)量控制管理更加科學(xué)化，現(xiàn)代化，規(guī)范化。

如今，中藥指紋圖譜能鑒別中藥的真?zhèn)我咽且粋€(gè)較為普遍的共識(shí)。中藥指紋圖譜的研究也成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn),并引起了許多科研單位及藥品生產(chǎn)企業(yè)的高度重視。隨著各項(xiàng)生產(chǎn)技術(shù)及分析測(cè)定手段的發(fā)展，采用指紋圖譜有望成為中藥質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)方法,在中藥現(xiàn)代化過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。中藥指紋圖譜作為一種更為合理更有發(fā)展?jié)摿Φ目刂颇Ｊ?，必定能?biāo)準(zhǔn)化、系統(tǒng)化標(biāo)、規(guī)范化中藥質(zhì)量，使我們的“國(guó)粹”走出國(guó)門，走向國(guó)際市場(chǎng)！參考文獻(xiàn)[1]ECRDofFDA.GuidanceforindustryBotanicalDrugproducts(Draftguidance)[s].2000[2]XiePeishan,YanYuzhen.HPTLCFingerprintIdentificationofGinseng[J].HighResolutionChromatography﹠ChromatographyCommunication,1987,10(11):607[3]XiePeishan,YanYuzhen.ApplicationofHPTLCfingerprintAnalysistoStabilityEvaluationofGinsengPreparation[J].JournalofPlanarChromatography-ModernTLC,1988,1(3):258[4]OptimizationofTLCofProtoberberineAlkloidsandFingerprintValuationoftheCoptidesRhizome.J.ofPlannarChromatography[J].ModernTLC,1992,5(5):302307[5]李彩君，林巧玲，謝培山等.高良姜中黃酮類成分薄層色譜指圖譜鑒別[J].中藥新藥與臨床藥理，2001，12(3)：183.[6]GulnurToker.ComparativeevaluationoftheflavonoidcontentinofficinalTiliaeflosandTurkishlimespeciesforqualityassessment[J].PharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,2001,26:111-121[7]JamalFaghihi.Reproducibilityofthehighperformanceliquidchromatographicfingerprintsobtainedfromtwosoybeancultivarsandaselectedprogeny[J].ChromatographyA,2001,915:61-74[8]李秀珍,高海,劉海靜.魚腥草注射液指紋圖譜分析方法的研究[J].西北藥學(xué)雜志,2002,17(4):154-155.[9]吳忠.仲景胃靈片GC指紋圖譜研究[J].中藥材,2001,24(3):196-197[10]王寅,喬傳卓，尹茶.高效毛細(xì)管電泳法用于不同居群大青葉藥材的鑒別[J].中草藥,2003,31（7）:547-549[11]王鋼力，戴忠，魯靜，等.11種卷柏屬藥用植物HPCE指紋圖

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