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核酸類藥物的生產(chǎn)第五節(jié)核酸類藥物的生產(chǎn)內(nèi)容提要五、核酸類結(jié)構(gòu)改造藥物的制備二、核酸類藥物的生產(chǎn)方法一、核酸類藥物的分類三、DNA和RNA的制備四、肌苷的制備3堿基:腺嘌呤A核苷:腺苷核苷酸:腺苷酸AMP(腺苷一磷酸)ADP(腺苷二磷酸)ATP(腺苷三磷酸)DNARNA4(一)什么是核酸類藥物?具有藥用價值的核酸、核苷酸、核苷、堿基及其衍生物。
5(二)核酸類藥物的分類具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)
核酸類藥物的分類自然結(jié)構(gòu)核酸類物質(zhì)的類似物和聚合物61、具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)
ATP、GTP、CTP、UTP、肌苷。ATP:用于心肌炎、心肌梗死、心力衰竭及動脈或冠狀動脈硬化的治療或輔助治療。肌苷:用于急慢性肝炎、肝硬化、白細胞減少、血小板減少等。72、自然結(jié)構(gòu)核酸類物質(zhì)的類似物和聚合物疊氮胸苷、阿糖腺苷、阿糖胞苷等。治療病毒、腫瘤、艾滋病的重要藥物。8二、核酸類藥物的生產(chǎn)方法直接提取法1水解法(酶水解、堿水解、酸水解)2化學(xué)合成法3酶合成法4微生物發(fā)酵法59酶水解10堿水解用堿水解RNA可產(chǎn)生2’、3’-混合核苷酸
2’、3’-混合核苷酸在醫(yī)藥上有它的特殊用途,對血小板減少,白血球減少癥和癌癥化療后升白血球均有較好療效。11DNA的作用維護正常免疫功能延緩機體衰老調(diào)節(jié)新陳代謝(一)DNA的制備促進細胞的活化12利用補救合成途徑為人體提供脫氧核苷酸,參與人體核酸代謝,從而具有促進細胞生長、修復(fù)受損細胞及改變機體代謝的作用。用于急﹑慢性肝炎白細胞減少癥,血小板減少癥及再生障礙性貧血等的輔助治療。13脫氧核糖鳥嘌呤核苷酸脫氧核糖腺嘌呤核苷酸脫氧核糖胸腺嘧啶核苷酸脫氧核苷酸鈉注射液脫氧核糖胞嘧啶核苷酸1:1:1:1-提供四種脫氧核苷酸,參與人體核酸代謝產(chǎn)品成份14DNA的粗提取1、準備材料將新鮮菜花和體積分數(shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24h。2、取材稱取30g菜花,去梗取花,切碎。3、研磨將碎菜花放入研缽中,倒入10mL研磨液,充分研磨10min。4、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液倒入塑料離心管中進行離心,用1000r/min的旋轉(zhuǎn)頻率,離心25min,取上清液放入燒杯中,取上清液。5、加冷酒精將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數(shù)為95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液,可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。15DNA的鑒定1、配制二苯胺試劑取0.1mLB液,滴入到10mLA液中,混勻。2、鑒定取4mLDNA提取液放入試管中,加入4mL二苯胺試劑,混勻后觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100℃)加熱10min。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現(xiàn)淺藍色)。16農(nóng)業(yè)生產(chǎn)化妝品抗癌、抗病毒關(guān)節(jié)炎肝炎、心臟病RNA的作用(二)RNA的制備17BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)
【性
狀】
本品為白色或類白色凍干塊狀物或粉末,易溶于水?!舅幚矶纠怼?/p>
本品具有提高機體細胞免疫功能和抑瘤作用?!具m
應(yīng)
癥】適用于胰腺癌、肝癌、胃癌的輔助治療,對乙型肝炎的輔助治療有較好的效果。本品亦可用于其他免疫機能低下引起的各種疾病。BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)
BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)
BP素(注射用核糖核酸Ⅱ)
181、制備RNA的材料來源
主要采用酵母、面包酵母等。19(1)稀堿法
用氫氧化鈉溶液,使細胞壁變性,使核酸從細胞內(nèi)釋放出來,再用酸中和至pH7.0,將pH調(diào)至RNA的等電點(pH2.5),使RNA沉淀出來。
(2)濃鹽法
用高濃度鹽溶液(6%~8%)處理,同時加熱,改變細胞壁的通透性,使核酸從細胞內(nèi)釋放出來。2、提取法制備RNA203、RNA的提取實例啤酒酵母是提取RNA的很好的資源。取100g壓榨啤酒酵母,加入230mL0.33mol/L的Na0H溶液,20℃以下緩慢攪拌30min。用6mol/LHCl調(diào)至pH7,攪拌15min,離心得清液255mL。冷至10℃以下6mol/LHCl調(diào)pH2.5,置冷過夜,離心得RNA1.8g。21肌苷的背景知識【質(zhì)量標準】:收載于《中華人民共和國藥典》2005年版二部205頁22【藥理作用】
本品能使處于低能缺氧狀態(tài)下的細胞繼續(xù)順利進行代謝,并參與人體能量代謝與蛋白質(zhì)的合成。
【適應(yīng)癥】
臨床用于白細胞或血小板減少癥,各種急慢性肝臟疾病、心臟疾病、洋地黃中毒癥等疾病。
肌苷的背景知識23洋地黃肌苷的背景知識24肌苷是由次黃嘌呤與核糖結(jié)合而成。次黃嘌呤可由腺嘌呤(A)脫氨形成,是嘌呤衍生物。肌苷的背景知識251、肌苷生產(chǎn)的工藝流程26精制菌種菌種擴大培養(yǎng)發(fā)酵提取吸附洗脫肌苷控制要點2、肌苷生產(chǎn)的控制要點27菌種變異芽孢桿菌
2、肌苷生產(chǎn)的控制要點28(2)種子擴大培養(yǎng)流程29A、斜面培養(yǎng)30-32℃,培養(yǎng)48h斜面培養(yǎng)基:葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、牛肉浸膏、瓊脂B、搖瓶振蕩培養(yǎng)(32±1)℃,培養(yǎng)18h搖瓶培養(yǎng)基:葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、玉米漿、尿素、NaClC、種子罐培養(yǎng)(32±1)℃,培養(yǎng)12-15h種子罐培養(yǎng)基:同搖瓶種子培養(yǎng)基30發(fā)酵50L發(fā)酵罐,(32±1)℃,
93h500L發(fā)酵罐,(32±1)℃,75h20000L發(fā)酵罐,(35±1)℃,83h發(fā)酵培養(yǎng)基:淀粉水解糖、干酵母水解液、豆餅水解液、尿素、硫酸銨、硫酸鎂、氯化鉀、磷酸氫二鈉、有機硅油313溶解氧和CO2的影響1溫度的影響4泡沫的影響2pH的影響發(fā)酵過程要注意32(4)提取、吸附、洗脫(5)精制33(一)三氮唑核苷的制備
[別名]
利巴韋林,病毒唑,為廣譜抗病毒藥物。
[抗病毒機制]
抑制多種DNA和RNA病毒的復(fù)制,但對病毒無直接的滅活作用。[抗病毒譜]如甲型和乙型流感病毒、單純皰疹病毒、麻疹病毒、乙型腦炎病毒、流行性出血熱病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等。
341、化學(xué)合成法
1972年,美國一家公司首次化學(xué)合成法研制成功。
鳥苷核糖-1-磷酸核糖-1-磷酸+三疊氮羧基酰胺(TCA)三氮唑核苷
乙酸酐,冰醋酸雙-對硝基苯酚-磷酸酯氨解352、發(fā)酵法(1)36(2)培養(yǎng)基斜面活化培養(yǎng)基:葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏.,氯化鈉、瓊脂,種子培養(yǎng)基:葡萄糖、味精、尿素、蛋白胨、酵母膏、玉米漿,發(fā)酵培養(yǎng)基:葡萄糖、硫酸銨、酵母粉、味精、豆餅水解液、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、硫酸錳、碳酸鈣,37 TCA添加量為10g/L(3)發(fā)酵最適條件38MnSO4的最佳添加量為10mg/L39KH2PO24的最佳添加量為6mg/L40胞二磷膽堿,為卵磷脂生物合成必需的輔酶。主要用于急性顱腦外傷和腦手術(shù)后的意識障礙1954年,Kennedy博士等人發(fā)現(xiàn)了胞二磷膽堿1963年,日本武田公司首次開發(fā),用于治療意識障礙獲得成功,商品名Nicholin,譯名尼可林。1973年,國內(nèi)試制
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