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文檔簡介

溫故而知新限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶質(zhì)?！d體基因工程操作的工具剪切拼接導入表達（一）獲得目的基因（二）形成重組DNA分子（三）將重組DNA分子導入受體細胞（四）目的基因的檢測和表達1、篩選含有目的基因的受體細胞2、目的基因的表達步驟一獲得目的基因人工合成(反轉(zhuǎn)錄法)序列：從基因文庫獲得未知序列：(DNAlibrary)聚合酶鏈式反響(PolymeraseChainReaction)氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。在酶的作用下，不斷延伸，合成雙鏈DNA。屢次循環(huán)，獲得大量雙鏈DNA分子。目的基因的mRNA逆轉(zhuǎn)錄單鏈DNA合成雙鏈DNA（目的基因）蛋白質(zhì)氨基酸序列推測mRNA的核苷酸序列推測結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列化學合成目的基因人工合成法逆轉(zhuǎn)錄法根據(jù)氨基酸序列直接合成DNA鳥槍法：散彈射擊法供體細胞DNA限制酶許多DNA片段載入運載體導入受體細胞擴增產(chǎn)生特定性狀分離目的基因從基因文庫獲得步驟二形成重組DNA分子可能存在情況：目的基因載體步驟三將重組DNA分子導入受體細胞1、將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ǎ恨r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(三)將目的基因?qū)胧荏w細胞1.基因工程中常用的受體細胞有哪些？2.導入過程如何？大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細胞借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑受體細胞：細菌CaCl2細胞壁的通透性增大重組質(zhì)粒進入受體細胞目的基因隨受體細胞的繁殖而復制步驟四篩選含有目的基因的受體利用標記基因來篩選：通過檢測標記基因的有無，〔或利用標記基因表達的性狀〕來判斷目的基因是否導入受體細胞。對目的基因進行分子水平的檢測：步驟五目的基因的表達1、通過鑒定目的基因的產(chǎn)物蛋白來確定目的基因的表達?？乖c抗體雜交2、目的基因?qū)胧荏w細胞后，受體細胞〔或受體細胞發(fā)育來的生物體〕會表現(xiàn)特定的性狀，通過性狀的觀察來確定目的基因的表達。引入病原體目的基因的檢測與鑒定——檢查是否成功檢測—鑒定——①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、

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