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人絨毛膜促性腺激素〔HCG〕稀釋經(jīng)驗分享和臨床應(yīng)用介紹
鄭州金域生化發(fā)光室
李利娟精選ppt概述人絨毛膜促性腺激素〔HCG〕的簡單介紹人絨毛膜促性腺激素〔HCG〕的定量檢測人絨毛膜促性腺激素〔HCG〕的臨床應(yīng)用精選ppt關(guān)于人絨毛膜促性腺激素〔HCG〕HCG是由兩個非共價鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個亞基不具有生物活性,當連接成完整化合物時始具活性,分子量約為4.7萬。HCGα亞單位的氨基酸排列與黃體生成素〔LH〕α亞單位相似,故用完整的抗HCG分子的抗體測定HCG時與LH間有免疫交叉反響。但它們的β亞單位各不相同。因此為防止交叉反響,目前均采用抗β-HCG單克隆抗體進持特異的HCG檢查,近年來還有報道采用抗β-HCG羧基末端肽單克隆抗體以進一步提高檢測的敏感性和特異性。精選pptHCG與其它激素的區(qū)別HCG與LH、FSH、TSH有一個相同的α亞基和一個不同的β亞基。LH的β亞基含121個氨基酸,HCG的β亞基相當于在LH的β亞基的C末端延伸了24個氨基酸,共有145個氨基酸。精選pptHCG的檢測最初為膠體金法進行定性檢測〔試紙條定性〕上世紀九十年代,使用放射免疫法目前主流使用化學發(fā)光、電化學發(fā)光〔貝克曼庫爾特Access,雅培Axsym,德普DPC系列,羅氏Elecsys,強生Eci〕精選ppt定性檢測局限定性檢測的應(yīng)用與局限1、由于是定性的方法也就是說只是給出陽性陰性的結(jié)果,而不能給出正確的數(shù)值。因此在用于判定其它疾病方面用定量檢測血清HCG來代替。2、由于檢測者可能是取隨機尿液檢測,就有可能在妊娠早期出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。3、一些與HCG有相同或相適片斷的激素可能會與尿試紙條上的抗體結(jié)合而造成假陽性。如黃體生成素(LH)、某些前列腺素、某些激素類避孕藥精選ppt定量檢測放射免疫分析由于其靈敏度及穩(wěn)定性不如現(xiàn)在的化學發(fā)光也已被淘汰。精選ppt〔電〕化學發(fā)光檢測〔電〕化學發(fā)光檢測相比較放射免疫分析靈敏度,準確度,穩(wěn)定性及線性范圍均有明顯的優(yōu)勢,但是由于臨床所需檢測HCG范圍極廣,且由于免疫檢測鉤狀效應(yīng)的存在使得〔電〕化學發(fā)光檢測HCG檢測仍然存在一定的局限。在日常檢測中我們通過利用HCG試紙條聯(lián)合應(yīng)用到達節(jié)約試劑的目的,同時可以有效防止鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)。精選ppt鉤狀效應(yīng)鉤狀效應(yīng)是指免疫檢測中由于抗原、抗體濃度比例不適宜而致檢測結(jié)果呈假陰性的現(xiàn)象。1929年Heidelberger利用等量抗體檢測濃度遞增抗原,當抗原濃度較低,抗體濃度相對較高時,沉淀反響不明顯;當抗原濃度增加到與抗體濃度比例適宜時,沉淀反響明顯;繼續(xù)增加抗原濃度時,沉淀反響反而減弱。據(jù)此繪出雙相應(yīng)答曲線,曲線頂峰區(qū)域,抗體、抗原濃度呈最適比,沉淀反響明顯,稱等價帶。頂峰區(qū)域左側(cè),由于抗體濃度過高,沉淀反響不明顯,稱前帶;頂峰區(qū)域右側(cè)。由于抗原濃度過高,沉淀反響也不明顯,稱后帶。抗體濃度過高所致結(jié)果稱前帶現(xiàn)象,抗原濃度過高所致結(jié)果稱后帶現(xiàn)象,統(tǒng)稱為帶現(xiàn)象。1977年Green把此現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)〔hookeffect〕,包括了前后帶現(xiàn)象。精選ppt定量檢測HCG現(xiàn)狀 在HCG的定量檢測中經(jīng)常會遇到一些高值標本,超過儀器的分析范圍,只能報告:>線性。而臨床要求檢驗科提供準確的檢驗結(jié)果,以便采取適當?shù)闹委煷胧榱朔乐姑つ窟x擇稀釋倍數(shù),造成不必要的試劑浪費和延長檢驗時間。我們發(fā)現(xiàn)可以借助HCG試紙條先定性檢測血HCG,根據(jù)檢測帶〔以下簡稱T帶〕出現(xiàn)或不出現(xiàn)的時間和顏色的深淺,經(jīng)過與質(zhì)控帶〔以下簡稱C帶〕比較來選擇稀釋倍數(shù),從而使超過儀器分析范圍的高值標本盡快地、并盡可能地一次就報告準確結(jié)果。精選ppt定量檢測HCG現(xiàn)狀由于HCG在體內(nèi)的變化很快,個體差異極大。而且在妊娠期的不同時間〔平均2.2天,HCG上翻一倍〕HCG水平差異極大。特別是對于葡萄胎,惡性葡萄胎,絨毛膜癌等疾病,血清HCG極高。這樣就有一些極高值的HCG標本,無法準確報告結(jié)果。但臨床又要求一個準確的檢驗結(jié)果,以便采取適當?shù)闹委煼椒?。這樣,有的實驗室盲目地選擇稀釋倍數(shù),必定浪費試劑和時間。如果稀釋倍數(shù)選擇太小,稀釋后仍大于儀器分析范圍,必然要試著增加稀釋倍數(shù)后重新測定。如果稀釋倍數(shù)過大,會造成過度稀釋后的標本中HCG含量極微量而測不出,或者不在儀器的線性范圍內(nèi)造成很大的誤差,必然要縮小稀釋倍數(shù)再進行測定。雖然該儀器有機內(nèi)稀釋功能,但是固定為某一稀釋倍數(shù)如2、3、5、10、20、50、100。而且只有在第一次測試超線。才會采用機內(nèi)稀釋。這樣就有兩個問題:第一,不稀釋或稀釋倍數(shù)過小必然會浪費試劑。第二,在大多數(shù)情況下,固定高稀釋倍數(shù),會造成稀釋后的標本,不在測試線性范圍內(nèi),造成很大的測定誤差,影響臨床的判斷。精選ppt試紙條初篩與定量檢測聯(lián)合應(yīng)用試紙條顯示狀況
判斷稀釋倍數(shù)結(jié)果1100>10000002503878273502038814209072552093019651495675195098不稀釋327.69不稀釋194.7
判斷稀釋倍數(shù)結(jié)果1100>10000002503878273502038814209072552093019651495675195098不稀釋327.69不稀釋194.7精選ppt試紙條顯色分析T帶不出現(xiàn),C帶出現(xiàn)。血HCG定性試驗陰性,說明HCG含量為零或極低,可直接原倍檢測T帶出現(xiàn),顏色很淺,說明HCG含量較低,可直接定量測定。T帶出現(xiàn),顏色略淺于C帶。有就T帶分析有兩種情況,就T帶本身而言為一長方形,a:此長方形內(nèi)左側(cè)顏色比右側(cè)深,這種標本一般濃度不會太高,只需選擇較低倍數(shù)〔不超20倍〕稀釋上機檢測即可。b:右側(cè)顏色深者,標本HCG濃度一般很高,至少在就我們經(jīng)驗來看,在羅氏E601儀器上一般要選至少20倍上機稀釋檢測。其濃度至少在七八萬,高者達兩三百萬。T帶出現(xiàn),但顏色與C帶深淺相當或是深于C帶,前提是T帶長方形內(nèi)著色均勻,此類標本血HCG較高,但其濃度一般低于b種情況下濃度精選ppt試紙條初篩與定量檢測聯(lián)合應(yīng)用我們在定量測定前,首先用HCG定性試紙條定性測定血HCG,根據(jù)T帶與C帶出現(xiàn)的時間以及顏色的深淺等來選擇相應(yīng)的稀釋倍數(shù)進行定量測定,不必屢次進行定量測定。極大地提高了一次報告成功率,而且定性試紙條相對于定量試劑來說,要廉價得多。這樣既節(jié)約了試劑本錢;又可以防止鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)同時縮短了時間,可以說是到達了事半功倍得效果。精選ppt在我們之前發(fā)現(xiàn)的幾例鉤狀效應(yīng)的標本中試紙條分析情況均同于b種情況,具體檢測數(shù)據(jù)見下表:以下數(shù)據(jù)來至于西門子標本稀釋檢測結(jié)果鉤狀效應(yīng)原倍結(jié)果118250302001236518631188在此種情況中,如缺少試紙條的先期判斷,恐怕我們就會發(fā)出錯誤報告了。精選pptHCG的臨床意義HCG的檢查對早期妊娠診斷有重要意義,對與妊娠相關(guān)疾病、滋養(yǎng)細胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀察等有一定價值。精選pptHCG的臨床意義1.診斷早期妊娠:孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可達8萬IU/L,多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。在妊娠最初3個月,HCG水平每〔2.2±0.5〕天約升高一倍,精選pptHCG的臨床意義2.異常妊娠與胎盤功能的判斷:①異位妊娠:如宮外孕時,本試驗只有60%的陽性率,在子宮出血3天后,HCG仍可為陽性,故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。如果用HCG難以確認,還可用血孕酮來做輔助性診斷。宮外孕患者的血孕酮水平低,這是公認的。故可作為早期診斷方法之一。臨界值為63nmol/L.異位妊娠引起腹腔內(nèi)出血時,腹腔血β-HCG均大于正常值,且明顯高于靜脈血β-HCG。精選pptHCG的臨床意義婦女受孕后,從第9-11天起即可測出血中β-HCG升高,以后每兩天β-HCG的量可升高2倍〔就算有先兆流產(chǎn),HCG的增加比率不會變〕。
比方今天是234,如果后天測出來是450左右就就可認為是正常宮內(nèi)早孕。異位妊娠時,由于輸卵管肌層菲薄、滋養(yǎng)細胞發(fā)育不良,血供差,合體滋養(yǎng)細胞合成hCG量顯著減少,每天升高幅度也減少如果連續(xù)兩次增加速度緩慢,說明宮外孕或者胚胎不正常發(fā)育緩慢。比方今天是10,后天是15,再2天才17,這樣的HCG值肯定不正常,保胎的成功率極低。如果HCG值持續(xù)而明顯的下降,就算B超測到胎心也最好做清宮手術(shù),說明胎兒其實已經(jīng)腦死亡。精選pptHCG的臨床意義CA-125是一種來源于體腔上皮、生殖道粘膜和卵巢上皮細胞外表的衍生腫瘤相關(guān)抗原,胎兒絨毛膜羊水和母體脫膜中均有大量的CA-125。有資料說明異位妊娠流產(chǎn)患者血清CA-125水平顯著高于異位妊娠成活組;相反,βhCG水平顯著低于異位妊娠成活組;并且血清CA-125水平有隨著β-hCG水平的降低而增高的趨勢,認為CA-125水平升高是對β-hCG降低的一種補償,并有助于鑒別異位妊娠流產(chǎn)和成活性異位妊娠;但血清CA-125與β-hCG之間無統(tǒng)計學相關(guān)性。對于流產(chǎn)型異位妊娠患者可在血清CA125和連續(xù)β-hCG監(jiān)測條件下采用期待療法或藥物治療。精選pptHCG的臨床意義②流產(chǎn)診斷與治療:不完全流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘存,HCG檢查仍可呈陽性;完全流產(chǎn)或死胎時HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性,因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。③先兆流產(chǎn):如尿中HCG仍維持高水平多不會發(fā)生難免流產(chǎn)。如HCG在2500IU/L以下,并逐漸下降,那么有流產(chǎn)的或死胎的可能,當降至600IU/L那么難免流產(chǎn)。在保胎治療中,如HCG仍繼續(xù)下降說明保胎無效,如HCG不斷上升,說明保胎成功④在產(chǎn)后4天或人工流產(chǎn)術(shù)后13天,血清HCG應(yīng)低于1000IU/L,產(chǎn)后9天或人工流產(chǎn)術(shù)后25天,血清HCG應(yīng)恢復(fù)正常。
如不符合這一情況,那么應(yīng)考慮有異常可能。精選pptHCG的臨床意義3.滋養(yǎng)細胞腫瘤診斷與治療監(jiān)測①葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪丸畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高,有的可達10萬到數(shù)百萬IU/L,可用稀釋試驗診斷如妊娠12周以前1:500稀釋尿液呈陽性,妊娠12周以后1:250稀釋尿液呈陽性,對葡萄胎診斷有價值。1:100-1:500稀釋尿液呈陽性對絨毛膜癌也有診斷價值,如男性尿中HCG升高,要考慮睪丸腫瘤如精原細胞癌、畸形及異位HCG瘤等。如果HCG增加速度非???,說明有葡萄胎的可能,必須緊密監(jiān)測。當然也有可能是雙胞胎。②滋養(yǎng)層細胞腫瘤患者術(shù)后3周后尿HCG應(yīng)<50IU/L,8-12周呈陰性;如HCG不下降或不轉(zhuǎn)陰,提示可能有殘留病變,這類病例常易復(fù)發(fā),故需定期檢查。精選p
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