白色念珠菌與抑菌效力檢查方法

白色念珠菌檢查方法

1、增菌培養(yǎng)取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、ml、10cm2）直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48～72小時。2、分離培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時（必要時延長至72小時）。1精選課件ppt

結(jié)果判斷

白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落呈乳白色偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。若平板上無菌落生長或生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出白色念珠菌。2精選課件ppt2、如平板上生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選2～3個菌落分別接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48小時（必要時延長至72小時）。若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長，判供試品未檢出白色念珠菌。3、若平板上生長的菌落為綠色或翠綠色，挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24～48小時。取培養(yǎng)物進(jìn)行染色，鏡檢及芽管試驗。3精選課件ppt4、芽管試驗挑取1%吐溫80玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物，接種于加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤的平皿內(nèi)，置35～37℃、1～3h，置顯微鏡下觀察，可見到由孢子長出短小芽管。5、若上述疑似菌為非革蘭陽性菌，顯微鏡未見厚膜孢子、假菌絲、芽管，判供試品未檢出白色念珠菌。4精選課件ppt

抑菌劑效力測定概述

1、抑菌劑效力檢查法系用于測定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評價最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時也可用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段抑菌劑的確定。

2、如果藥物本身不含有充分的抗菌活性，那么應(yīng)根據(jù)制劑特性（如水溶液制劑）添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常儲存和使用過程中可能發(fā)生微生物污染和大量繁殖尤其多劑量包裝的制劑，避免因藥物微生物污染及對患者造成傷害。

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3、所有抑菌劑都具有一定的毒性，而且在貯存過程中其有效性有可能因藥物的活性成分提高或降低，為保證藥品的質(zhì)量和用藥安全，添加防腐劑的量應(yīng)根據(jù)制劑本身是否具抗菌活性，保持最低有效量并在藥品包裝上注明添加抑菌劑的名稱和數(shù)量。6精選課件ppt

培養(yǎng)基

1、胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基

2、胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基

3、沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

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培養(yǎng)基的適用性檢查

菌種銅綠假單胞菌pseudomonasaeruginosa）金黃色葡萄球菌（staphycococcus）白色念球菌（Candidaalbicans）]

黑曲霉（Aspergillusniger）大腸埃希菌（EscherichiaColi）

菌液的制備同控制菌培養(yǎng)基適用性檢查8精選課件ppt

適用性檢查

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌各50～100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酷胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置30～35℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置20～25℃培養(yǎng)72小時，計數(shù)；同時，用對應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗。9精選課件ppt

結(jié)果判定

被檢培養(yǎng)基的菌落數(shù)與對照培養(yǎng)基菌落數(shù)相比大于70%，菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。10精選課件ppt

抑菌劑效力測定

供試品分類為了達(dá)到試驗?zāi)康?，根?jù)供試品的給藥途徑和用途將供試品分為四類，以便標(biāo)準(zhǔn)的制定和執(zhí)行，但對于一些抗酸性制劑和含活生物制劑應(yīng)考慮會降低有益菌的生物活性。見表11精選課件ppt

表產(chǎn)品分類類別藥品

1類注射劑、其他非腸道制劑，包括乳劑、耳用制劑、無菌鼻用制劑及眼用制劑

2類局部給藥制劑、非滅菌鼻用制劑及用于黏膜的乳劑

3類口服非固體制劑（非抗酸制劑）

4類非固體抗酸制劑12精選課件ppt

菌種和菌液的制備同培養(yǎng)基適用性檢查

供試品接種

1、抑菌劑效力可能受試驗用容器特征的影響，如容器的材質(zhì)、形狀、體積及封口的方式等。因此，只要供試品每個包裝容器的裝量足夠試驗用，同時容器便于按無菌操作的接入試驗菌液、混合及取樣等，一般應(yīng)將試驗菌直接接種于供試品原包裝容器中進(jìn)行貯存。

13精選課件ppt2、若因供試品的性狀或每個容器裝量等因素需將供試品轉(zhuǎn)移至無菌容器時，該容器的材質(zhì)不得影響供試品的特性（如吸附作用），特別應(yīng)注意不得影響供試品的PH，PH對抑菌劑的活性影響很大，同時容器的口徑大小應(yīng)便于供試品的進(jìn)出及混勻。14精選課件ppt3、取包裝完整的供試品至少5份，直接接種試驗菌，或取適量供試品分別轉(zhuǎn)移至5個適宜的無菌容器中（若試驗菌侏數(shù)超過5株，應(yīng)增加相應(yīng)的供試品份數(shù)），每一容器接種一個試驗菌。15精選課件ppt4、1、2、3類供試品1g或1ml接種菌量為105～106cfu，4類供試品中1g或1ml接種菌量為106～108cfu，接種菌液的體積不得超過供試品體積的0．5%～1%，充分混合，使供試品中的試驗菌均勻分布。5、將接種的供試品在試驗期間置20～25℃，避光貯存，貯存溫度的變化應(yīng)盡可能控制在最小范圍，并防止被污染。16精選課件ppt

存活菌數(shù)測定

由于供試品中含有抑菌活性，所以菌數(shù)測定方法應(yīng)進(jìn)行驗證。根據(jù)菌數(shù)測定結(jié)果，計算1ml(g)供試品各試驗菌所加的菌數(shù)及各間隔時間的菌數(shù)，并換算成lg值。17精選課件ppt

測定細(xì)菌用胰酷胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，測定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

根據(jù)產(chǎn)品類型，在規(guī)定的接種時間，分別從上述每個容器中取供試ml(g)，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋成1：10、1：102、1：103等稀釋級。

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結(jié)果判斷

1、抑菌劑效力根據(jù)各間隔時間測定的菌數(shù)1.0lg值相對于初始值（0時菌數(shù)1.0lg值）減少程度進(jìn)行評價（見表），試驗結(jié)果按有效數(shù)字的修約規(guī)則進(jìn)舍，保留一位小數(shù)點。結(jié)果符合表，要求可判斷該產(chǎn)品抑菌效力符合規(guī)定。

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表防腐劑抗菌效力標(biāo)準(zhǔn)

1類供試品細(xì)菌7天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天菌數(shù)下降不少于3.0lg，第14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，到7、14、28天菌數(shù)均不增加。

2類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于2.0lg，14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，到14、28天菌數(shù)均不增加。

3類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天到28天菌數(shù)均不增加。真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

4類供試品細(xì)菌，真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增長。注：1、表中“不增加”是指對前一個測定時間，試驗菌增加的數(shù)量不超過0.5lg。

2、0時菌數(shù)供試品加入試驗菌，搖勻，立即取樣檢查，培養(yǎng)，計數(shù)，為0時20精選課件ppt

舉例1、氯化鈉注射液、碳酸氫鈉注射液不含抑菌劑加入菌從初始到6h就開始無限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液從初始到24h對數(shù)值無變化，72h后明顯降低，具一定的抑菌力。2、呋麻滴鼻液、硫糖鋁混懸液、阿昔洛韋滴眼液、鯨脂滴耳液、潔爾陰洗液從初始值到7天后計算值大于1.