登革熱病毒的分子診斷方法

登革熱病毒的分子診斷方法登革熱簡介登革熱，又名骨痛熱，是登革熱病毒引起、依蚊傳播的一種急性傳染病。本病于1779年在埃及開羅、印度尼西亞雅加達(dá)及美國費(fèi)城發(fā)現(xiàn)，并據(jù)癥狀命名為關(guān)節(jié)熱和骨折熱。1869年由英國倫敦皇家內(nèi)科學(xué)會命名為登革熱。登革熱癥狀1、發(fā)熱2、全身毒血癥狀3、皮疹4、出血5、淋巴結(jié)腫大登革熱的特點(diǎn)特點(diǎn)：1、地方性2、季節(jié)性3、突然性4、傳播迅速，發(fā)病率高，病死率低，疫情常由一地向四周蔓延。登革熱的歷史1779年于開羅發(fā)生，于巴達(dá)維亞（今雅加達(dá)）發(fā)生1873年于臺灣澎湖縣發(fā)生1987-1990南臺灣大爆發(fā)1978年5月2日廣東佛山石灣鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)首例病人。1999年夏季福州市近郊發(fā)生登革熱流行2004年福州市臺江、連江、閩侯發(fā)生局部流行2001-2006年廣東省共報告登革熱本地病例2897例。登革熱的分布現(xiàn)狀全球每年約有五千萬宗登革熱個案，常見于熱帶和亞熱帶地域。登革熱病毒登革病毒基因組結(jié)構(gòu)傳播登革病毒的蟲媒埃及伊蚊（Ae.aegypti)白紋伊蚊(Ae.albopictus)分子診斷方法1、TaqManMGB實時熒光RT-PCR法2、核酸雜交技術(shù)3、RT-NEST-PCR4、多重PCRTaqManMGB實時熒光RT-PCR法目前最主要采用的對登革熱病毒的快速檢測方法。該方法在2009年成為中國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。(SN/T2301-2009)技術(shù)背景是在定性PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù)。于1996年由美國Appliedbiosystems公司推出，在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品中的DNA(orcDNA)的起始濃度進(jìn)行定量的方法。是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數(shù)最敏感、最準(zhǔn)確的方法。引物和探針FAM：熒光報告基團(tuán)MGB：熒光淬滅基團(tuán)Den-FP：Den-RP：Den-Probe：技術(shù)原理技術(shù)原理技術(shù)優(yōu)點(diǎn)1、特異性更強(qiáng)2、能有效解決PCR污染問題3、自動化程度高4、可實現(xiàn)熒光信號的積累與PCR產(chǎn)物形成完全同步，可以實時監(jiān)控RT-PCR過程。應(yīng)用領(lǐng)域目前該技術(shù)主要應(yīng)用在檢測登革熱病毒、口蹄疫病毒、馬秋波病毒、禽呼腸孤病毒等方面。