微生物培養(yǎng)練習(xí)

1．(10分)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。答復(fù)以下問題：(1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。[z.zs.tep](2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即________和________。(3)為了篩選出高效菌株，可比擬單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力____________。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈________附近進(jìn)行，以防止周圍環(huán)境中微生物的污染。[答案](1)原油選擇(2)平板劃線法稀釋涂布平板法(3)強(qiáng)(4)干熱滅菌高壓蒸氣滅菌火焰2．(10分)(2023·東北三校一模)現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公，但是仍然不可防止的每年要產(chǎn)生大量的廢紙，其主要成分是木質(zhì)纖維，人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源——乙醇。以下圖是工業(yè)上利用微生物用纖維素生產(chǎn)乙醇的根本工作流程，請(qǐng)答復(fù)相關(guān)問題。(1)自然界中①環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在_______的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以________為碳源、并參加________的培養(yǎng)基上篩選周圍有________的菌落。(2)如上所述的篩選中獲得了三個(gè)菌落，對(duì)它們分別培養(yǎng)，并完成環(huán)節(jié)②，且三種等量酶液中酶蛋白濃度相同，那么你認(rèn)為三種酶液的活性________(一定相同、不一定相同、一定不同)，可以通過________________進(jìn)行定量測(cè)定。(3)根據(jù)測(cè)定結(jié)果，①環(huán)節(jié)常選擇毛霉，那么②中獲得的酶是________酶。該酶至少包括__________________________三個(gè)組分。(4)生產(chǎn)中可以滿足④環(huán)節(jié)的常見菌種是________，為了確保獲得產(chǎn)物乙醇，⑤環(huán)節(jié)要注意________________，④過程要注意防止_____________________。(5)該技術(shù)雖然有廣闊的前景，但存在酶的本錢高等問題，為了降低本錢主要從以下幾方面入手改良該過程。首先要通過________等技術(shù)手段對(duì)產(chǎn)酶微生物改造，提高酶的產(chǎn)量。其次，可利用________等技術(shù)使酶能夠重復(fù)利用。[答案](1)富含纖維素(其他合理答案也可，如落葉較多等)纖維素剛果紅透明圈(2)不一定相同對(duì)纖維素酶催化纖維素分解后所產(chǎn)生的葡萄糖(3)纖維素C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶(4)酵母菌發(fā)酵裝置密閉(或保證無氧條件等)雜菌污染(5)基因工程(基因突變)固定化酶3．(10分)生物技術(shù)實(shí)踐與人們生產(chǎn)和生活密切相關(guān)，也為許多學(xué)生將來就業(yè)奠定了知識(shí)根底和能力根底。請(qǐng)答復(fù)以下有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐中的問題。(1)無菌技術(shù)主要通過消毒和滅菌來防止雜菌的污染。常用的滅菌方法有________滅菌、干熱滅菌和________滅菌。(2)在果醋、泡菜的制作過程中，需要氧氣的是________；在制作果醋過程中，榨取的果汁非常渾濁，解決的方法是________。(3)血紅蛋白的提取和別離的實(shí)驗(yàn)中，在洗脫過程中參加物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是________。如果紅色區(qū)帶________，說明色譜柱制作成功。(4)進(jìn)行菊花組織培養(yǎng)的根本實(shí)驗(yàn)操作步驟是：制備MS固體培養(yǎng)基、_______、接種、培養(yǎng)、移栽、栽培?；ㄋ庪x體培養(yǎng)時(shí)，選擇適宜發(fā)育時(shí)期的花粉能提高誘導(dǎo)成功率，確定花粉發(fā)育時(shí)期最常用的染色方法是________。花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中________。(5)橘皮精油的提取之所以不采取水蒸氣蒸餾法，是因?yàn)樗姓麴s會(huì)導(dǎo)致原料________和有效成分________等問題。[答案](1)灼燒高壓蒸汽(2)果醋用果膠酶處理(3)準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致均勻一致的移動(dòng)(4)外植體消毒醋酸洋紅法激素的種類及其濃度配比(5)焦糊水解4．自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸飼r(shí)一般要將它們別離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)答復(fù)有關(guān)問題。實(shí)驗(yàn)步驟：(1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。(2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用________法接種樣品。(3)適宜溫度下培養(yǎng)。結(jié)果分析：(1)測(cè)定大腸桿菌數(shù)目時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是________，其理由是________________________________________________________________________。A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250(2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是________(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)。(3)用這種方法測(cè)定的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量________，因?yàn)?。解析：此題考查微生物的計(jì)數(shù)方法，可從兩種接種方法的優(yōu)缺點(diǎn)和統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)應(yīng)注意的問題入手解答該題。為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，應(yīng)用稀釋涂布平板法接種樣品。(1)選取多個(gè)菌落數(shù)相差不大的平板計(jì)數(shù)，取其平均值。(2)234÷0.1×105＝2.34×108。(3)因?yàn)榫淇赡苡蓛蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起生長(zhǎng)而成，所以實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多。答案：實(shí)驗(yàn)步驟：(2)稀釋涂布平板結(jié)果分析：(1)D在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否相當(dāng)(2)2.34×108(3)多當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落5．為了探究土壤中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如下表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如以下圖所示。請(qǐng)分析答復(fù)以下問題：KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g1g10g15g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL(1)簡(jiǎn)述土壤中可分解尿素的細(xì)菌的鑒定方法及原理： _______________________。(2)培養(yǎng)基中參加尿素的目的是篩選________，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。(3)“目的菌〞生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的________和________，實(shí)驗(yàn)中需要振蕩培養(yǎng)，原因是__________________________。(4)轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)基時(shí)，常采用________接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。(5)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行________處理后，才能倒掉。解析：尿素是培養(yǎng)基中的唯一氮源，因此原那么上只有能夠利用尿素的微生物才能夠在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。由于細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，pH升高，故在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中參加的酚紅指示劑將變成紅色；這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，可篩選目的菌；目的菌生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的尿素和葡萄糖；振蕩培養(yǎng)的目的是提供氧氣；固體培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)的接種方法常用稀釋涂布平板法或平板劃線法；倒掉培養(yǎng)基之前應(yīng)對(duì)其進(jìn)行滅菌處理。答案：(1)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中參加酚紅指示劑，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨，pH升高，使酚紅指示劑變?yōu)榧t色(2)目的菌選擇(3)尿素葡萄糖為目的菌提供氧氣(4)稀釋涂布平板法(或平板劃線法)(5)滅菌6．(2023·濟(jì)南一模)白僵菌高孢粉是國(guó)家林業(yè)局推廣的高效生物殺蟲劑之一，應(yīng)用于多種林木和農(nóng)作物害蟲的防治。白僵菌分生孢子附著在寄主表皮、氣孔或消化道上，遇適宜條件開始萌發(fā)，生出芽管。同時(shí)產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶、幾丁質(zhì)酶等溶解昆蟲的表皮，通過芽管入侵蟲體，在蟲體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，消耗寄主體內(nèi)養(yǎng)分，產(chǎn)生各種毒素，形成大量菌絲和孢子，布滿蟲體全身。請(qǐng)答復(fù)下面的問題：(1)從自然菌樣中篩選較理想生產(chǎn)用菌種的一般步驟是：采集菌樣富集培養(yǎng)性能測(cè)定。白僵菌的菌樣應(yīng)從________處采集。(2)別離白僵菌菌種的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。在配制白僵菌培養(yǎng)基時(shí)參加蔗糖、硫酸銨、硝酸鉀等成分，蔗糖屬于________營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)白僵菌純培養(yǎng)常用的接種方法是________和________。(4)別離與培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和接種工具都要進(jìn)行________處理，利用高溫可以使微生物的________等物質(zhì)發(fā)生變性。解析：選擇培養(yǎng)基用于選擇別離菌種。蔗糖屬于微生物的碳源。微生物別離培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基、接種工具都要進(jìn)行滅菌處理，其原理是高溫使蛋白質(zhì)、核酸變性而使細(xì)胞失去活性。答案：(1)純種別離感病昆蟲(2)選擇碳源(3)平板劃線法稀釋涂布平板法(或稀釋混合平板法)(4)滅菌蛋白質(zhì)和核酸7．以下圖為別離并統(tǒng)計(jì)分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程，據(jù)此答復(fù)有關(guān)問題：菌數(shù)(1)要從富含纖維素的環(huán)境中別離纖維素分解菌，從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋@說明。(2)某同學(xué)根據(jù)需要，配制了纖維素分解菌的培養(yǎng)基如下，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏、水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g適量如果將其中的纖維素粉換成________，菌落數(shù)___________________________________，即可說明選擇培養(yǎng)基的作用。(3)接種微生物最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，本實(shí)驗(yàn)宜采用_______法，原因是_______________________________________________________。解析：(1)因?yàn)槔w維素分解菌與耐熱菌有不同的生活習(xí)性，生活在不同的環(huán)境中，故要根據(jù)目的菌株對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。(2)因?yàn)槠咸烟鞘悄鼙晃⑸镏苯永玫挠袡C(jī)小分子，所以如果將其中的纖維素粉換成葡萄糖，纖維素分解菌及其他細(xì)菌會(huì)生長(zhǎng)繁殖得更快，故菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基。(3)因?yàn)橄♂屚坎计桨宸ㄒ獙⒕哼M(jìn)行一系列的梯度稀釋，故該法可根據(jù)稀釋體積計(jì)算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)，而平板劃線法那么不能這樣，所以本實(shí)驗(yàn)宜采用稀釋涂布平板法。答案：(1)根據(jù)目的菌株對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找(2)葡萄糖明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)(3)稀釋涂布平板平板劃線法難以根據(jù)稀釋體積計(jì)算每克樣品中的細(xì)菌數(shù)8．選擇培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一。該技術(shù)主要是利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，制定環(huán)境條件，使僅適應(yīng)該條件的微生物生長(zhǎng)旺盛，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從中別離到所需的特定微生物。選擇條件可根據(jù)所需別離的微生物的特點(diǎn)，從物理、化學(xué)、生物及綜合多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等許多方面。以下圖描述了采用選擇方法從土壤中別離能降解酚類化合物對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為________，碳源為______。(2)實(shí)驗(yàn)原理是___________________________________________________________。(3)①③重復(fù)培養(yǎng)的目的是_________________________________________________。(4)⑤的菌落中大局部是降解________的微生