零售藥店合理用藥情況調(diào)研報告及零排放豬舍基質(zhì)墊層微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性分析

PAGEPAGE1零售藥店合理用藥情況調(diào)研報告【摘要】目的:了解零售藥店合理用藥開展情況，促進高職藥學(xué)教育，提高藥學(xué)從業(yè)者的藥學(xué)服務(wù)水平。方法:通過調(diào)查問卷的方式，分析不合理用藥的部分原因,就高職教育方面提出對策。結(jié)論:高職藥學(xué)教育要重視專業(yè)素質(zhì)的培養(yǎng)提高，使學(xué)生能盡快適應(yīng)崗位需要，指導(dǎo)患者安全有效用藥?！娟P(guān)鍵詞】高職教育藥學(xué)合理用藥零售藥店

隨著我國社會生活方式的演變和醫(yī)療保險、醫(yī)藥分家、藥品的分類管理制度等一系列改革措施的出臺,使得藥品市場展現(xiàn)出前所未有的活力,給廣大群眾購藥提供了極大的方便,人們已逐漸形成“大病去醫(yī)院,小病上藥店”的保健觀念。藥品作為一種特殊的商品,其生產(chǎn)和經(jīng)營有一定的特殊性，與之緊密聯(lián)系的藥學(xué)類的教育也顯示出獨特的重要性，如何能培養(yǎng)出高素質(zhì)的藥學(xué)工作人員是我們工作的重點。藥學(xué)人員是藥學(xué)服務(wù)的實施者,是合理用藥的宣傳員和執(zhí)行者,其自身業(yè)務(wù)水平的高低,直接影響到合理用藥工作開展的廣度和深度,影響到所提供的藥學(xué)服務(wù)的質(zhì)量。但是在實際生活中，由于藥學(xué)人員自身專業(yè)素質(zhì)的局限和消費者醫(yī)學(xué)知識的缺乏，在用藥安全方面還存在不少隱患。為此,我們采用問卷調(diào)查的方式,通過對本地區(qū)零售藥店的考察,結(jié)合高職高專藥學(xué)類（藥品經(jīng)營與管理和藥品生產(chǎn)）專業(yè)人才培養(yǎng)目標(biāo)，就零售藥店合理用藥中存在的問題進行分析并據(jù)此提出相對的建議，旨在讓藥學(xué)教育工作者高度重視藥學(xué)人員的專業(yè)素質(zhì)教育的培養(yǎng)。1方法1.1調(diào)查對象廣州市天河區(qū)部分零售藥店店員,共計40人。性別:男8人,女32人；年齡:20～45歲。1.2調(diào)查方法采用問卷調(diào)查方式,無記名填寫。從合理用藥的基本概念、處方調(diào)配、專業(yè)知識及有關(guān)藥品法規(guī)知識等方面,并參考合理用藥調(diào)研的國際指標(biāo)[1],設(shè)計問卷調(diào)查表(見表1)。1.3結(jié)果判定滿分為22分。按照得分程度劃分為:較好:>15分；較差:<9分；一般:9～15分。2結(jié)果2.1答題總體情況共收回問卷調(diào)查表40份,較好的共計5人，占12.5%；較差的3人，占7.5%；一般的32人，占80%。合理用藥問卷調(diào)查表題目(Q1～Q13)備選答案得分1您對于國家基本藥物:了解、不了解102您是否知道WHO倡導(dǎo)使用何種藥名:專利名、商品名、通用名0013您能否根據(jù)癥狀判斷常見疾病及推薦用藥:不能能014您知道哪些藥品的使用率是WHO提出控制的:抗生素、維生素、注射劑、營養(yǎng)保健藥10105您是否了解全球有1/3的人是死于:戰(zhàn)亂、疾病、不合理用藥0016您對于同一種藥品傾向于使用:國產(chǎn)藥/進口藥、單方/復(fù)方、口服/注射1/01/01/07您在調(diào)配處方時能夠?qū)彶槟男﹥?nèi)容:藥物書寫、配伍禁忌、相互作用1118您未向病人交待用藥注意事項的原因:時間不夠、業(yè)務(wù)水平有限、認(rèn)為無關(guān)緊要-0.5-0.5-19您對于藥品的使用說明書:不看、簡單過目、認(rèn)真掌握00.5110您學(xué)習(xí)過下列哪些科目:藥效學(xué)、藥動學(xué)、生物藥劑學(xué)、藥物經(jīng)濟學(xué)、藥物流行病學(xué)1111111您對《藥品管理法》:不了解、部份了解、熟悉00.5112您經(jīng)常閱讀哪些藥學(xué)期刊:(每一種雜志記1分)11112.2答題具體情況2.2.1概念類題題目1-6屬于概念性問題，有相當(dāng)一部分人對合理用藥相關(guān)概念認(rèn)識很模糊，具體情況見下：Q1:42%的人不了解什么是國家基本藥物。Q2:51%的人不了解WHO倡導(dǎo)使用通用名，大多數(shù)人(42%)選擇了專利名。Q3:48%的人不能根據(jù)患者癥狀判斷所患疾病，也不能給出用藥指導(dǎo)。Q4:58%的人回答錯誤。其中54%的人不了解注射劑的使用率也是WHO提出控制的指標(biāo)。Q5:69%的人知道是死于不合理用藥。Q6:半數(shù)以上的人(54%)不能按照合理用藥的原則正確選擇藥物。其中21%的人選擇進口藥,50%的人選擇復(fù)方制劑，8%的人選擇注射劑。2.2.2處方調(diào)配類題Q7:大部分表示能夠在調(diào)配處方時審查處方各項內(nèi)容,但因業(yè)務(wù)水平有限,真正能審查藥物配伍禁忌和相互作用的人還是為數(shù)甚少。Q8:用藥注意事項（老人、兒童藥物用量，服藥時間等）通常被忽略,部份原因是由于工作忙、時間緊,40%的人承認(rèn)業(yè)務(wù)水平有限,但有少數(shù)人(18%)卻認(rèn)為無關(guān)緊要。2.2.3學(xué)習(xí)類題Q9:絕大多數(shù)人對藥品使用說明書只是簡單過目。Q10:5門藥學(xué)科目中,72%的人僅學(xué)過3門以下的課程,幾乎所有人都未學(xué)過藥物流行病學(xué)和藥物經(jīng)濟學(xué)等新興學(xué)科。Q11:對于《藥品管理法》,絕大多數(shù)人只限于部份了解而未認(rèn)真學(xué)習(xí)過。Q12:只有30%的人能夠經(jīng)常閱讀公開出版的藥學(xué)期刊《廣東藥學(xué)》、《醫(yī)藥經(jīng)濟報》等。3討論從以上的問卷調(diào)查來看，藥學(xué)工作者首先在思想上沒有認(rèn)識到開展藥學(xué)服務(wù)、指導(dǎo)合理用藥的重要性。其次，醫(yī)學(xué)和藥學(xué)理論知識不夠，不能合理推薦藥物。再者，大部分不注意知識更新，缺乏學(xué)習(xí)主動性。針對這幾點問題，在藥學(xué)類高職教育階段，筆者有以下幾方面建議，有助于改善提高藥學(xué)工作者的專業(yè)水平。3.1加強職業(yè)素質(zhì)教育，增強藥學(xué)服務(wù)意識零售藥店的傳統(tǒng)工作任務(wù)是以藥品為中心，僅僅專注于藥品的銷售，而忽視消費者實際用藥的目的、過程、結(jié)果等，或把它當(dāng)作是醫(yī)院醫(yī)師的責(zé)任。而藥店要在激烈的市場競爭中立于不敗之地，必須在服務(wù)環(huán)節(jié)上狠下工夫，藥學(xué)服務(wù)又是服務(wù)中的重頭戲[2]。因此提高和加強藥學(xué)人員的服務(wù)意識和業(yè)務(wù)水平已刻不容緩,教師要在職業(yè)教育階段就培養(yǎng)學(xué)生的服務(wù)意識，強調(diào)藥學(xué)服務(wù)的重要性和必要性，增強開展藥學(xué)服務(wù)的積極性和主動性,努力為患者提供所需的藥學(xué)信息，而不是簡單的機械的發(fā)藥，把藥物等同于一般的商品來銷售。3.2優(yōu)化課程設(shè)置藥學(xué)類專業(yè)涉及的學(xué)科范圍較廣,課程種類多而復(fù)雜，但是高等職業(yè)教育學(xué)制一般都是3年,如何在較短的時間內(nèi)合理地精選和安排課程，就成為藥學(xué)高職教育中關(guān)鍵的問題。除了公共基礎(chǔ)課程外，在專業(yè)課程安排上，由于藥學(xué)類高職高專學(xué)生的就業(yè)崗位主要集中在藥品營銷和藥品生產(chǎn)兩大領(lǐng)域，那么針對藥品經(jīng)營者來說，就要求他們必須掌握一定的醫(yī)學(xué)知識才能更好地開展藥學(xué)服務(wù)，指導(dǎo)患者合理用藥。但是醫(yī)學(xué)知識內(nèi)容廣泛，知識學(xué)習(xí)不能過深過細，掌握必需、夠用這個原則即可。醫(yī)學(xué)課程主要以人體系統(tǒng)器官為邏輯軸線，對人體解剖學(xué)、組織學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、診斷學(xué)、臨床疾病及治療學(xué)等內(nèi)容進行課程重組。內(nèi)容安排兼顧基礎(chǔ)性、綜合性、先進性和實用性。我院已經(jīng)在藥學(xué)系老師的組織下，對醫(yī)學(xué)課程進行了優(yōu)化重組，開發(fā)了新教材《實用醫(yī)學(xué)概要》，目前已經(jīng)投入使用，使用效果良好。醫(yī)學(xué)課程是進行用藥指導(dǎo)的基礎(chǔ)，藥品經(jīng)營者只有掌握了比較扎實的醫(yī)學(xué)知識，才能把疾病和用藥更好的聯(lián)系起來。對于藥品經(jīng)營者來說，醫(yī)學(xué)知識是基礎(chǔ)，藥品知識才是關(guān)鍵，藥理學(xué)、藥事管理與法規(guī)、臨床藥學(xué)、醫(yī)藥商品學(xué)等課程依據(jù)所屬專業(yè)不同，可以適當(dāng)安排兩門或者兩門以上的課程學(xué)習(xí)。藥理學(xué)是藥學(xué)工作者必須掌握的一面學(xué)科，但是對于高職學(xué)生來說，藥理學(xué)理論性過強，因此在知識的深度上可以降低一些，但是對于基本藥物的基本的藥理作用和不良反應(yīng)，必須要求學(xué)生掌握。只有這樣，當(dāng)患者有藥物需求時，藥品經(jīng)營者才能比較準(zhǔn)確地幫助患者明確常見疾病及推薦合適的藥物。筆者在調(diào)研過程中，發(fā)現(xiàn)大部分藥店工作人員都能熟練掌握藥品的基本作用，但是在疾病的簡單判斷上，由于臨床知識的缺乏，相當(dāng)一部分的回答不盡如人意。例如，一位患者眼部紅腫疼痛，要購買眼藥水，問遍店內(nèi)工作人員其所患的是什么眼病，但是無一人能夠判斷，只是含糊的推薦患者使用用氯霉素眼藥水。疾病不能明確就推薦藥物，也是不合理用藥的一種表現(xiàn)。3.3重視用藥指導(dǎo)合理用藥是以當(dāng)代藥物和疾病的系統(tǒng)知識及理論為基礎(chǔ),安全、有效、經(jīng)濟、適當(dāng)?shù)厥褂盟幬?表現(xiàn)在給藥過程的各個環(huán)節(jié),包括藥物選擇正確,藥品使用保證安全有效、價格合理、劑量適當(dāng),給藥途徑適宜,合并用藥合理,病人依從性良好等方面[3]。那么在藥學(xué)類的高職教育過程中，教師就一定要加強這一部分，不僅從理論上講授，還要給出大量的實例，引起學(xué)生重視。比如說藥物使用方法不當(dāng)，最近熱議的有“尼美舒利”兒童退燒藥不良反應(yīng)事件，很大一部分原因是因為藥物不合理的使用，當(dāng)然也有藥品管理上有疏漏，很多藥店沒有嚴(yán)格按照處方藥管理規(guī)定出售。在調(diào)查過程中，對于之前的濫用抗生素這個問題，目前確實引起了足夠的重視，藥店工作人員在推薦用藥時也比較謹(jǐn)慎，但是在執(zhí)行處方藥管理規(guī)定上，還不夠嚴(yán)格。另外值得提出的是，對于特殊人群用藥，很多店員都沒有給患者說明，如果有患者問及，就拿著藥物說明書現(xiàn)看。這個也是不安全用藥的很常見的原因。在指導(dǎo)合理用藥過程中，最重要的并且藥學(xué)工作者普遍感覺比較困難的是，藥物之間的相互作用和潛在的不良反應(yīng)，這點與藥學(xué)工作者的藥學(xué)知識和實踐經(jīng)驗關(guān)系密切。一些已經(jīng)明確的藥物相互作用和不良反應(yīng)，大部分都寫進了書本，教師要在教學(xué)過程中把知識活化，案例教學(xué)，調(diào)動學(xué)生的積極性來學(xué)習(xí)。課堂之外，還盡可能的利用校內(nèi)模擬藥店，通過實訓(xùn)培養(yǎng)學(xué)生的職業(yè)技能。除了基礎(chǔ)性的學(xué)習(xí)外，隨著醫(yī)藥技術(shù)的迅猛發(fā)展,新、特藥層出不窮,很多藥物之間的相互作用和不良反應(yīng)還未顯現(xiàn)，需要在使用過程中及時發(fā)現(xiàn)及時報告，這就涉及到知識更新的問題，藥學(xué)工作者一定要注意不斷加強學(xué)習(xí)，多閱讀藥物方面的報紙書籍。在教學(xué)過程中，教師也要跟上藥物發(fā)展的步伐，及時學(xué)習(xí)，并不斷把這些信息傳遞給學(xué)生。鼓勵學(xué)生利用寒暑假時間參加社會實踐，可以更好地把理論和實踐結(jié)合起來。3.4加強師資隊伍建設(shè)指導(dǎo)合理用藥，提供藥學(xué)服務(wù)是一項知識寬廣、應(yīng)用性強的工作，內(nèi)容從基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)到臨床藥學(xué)，涉獵范圍既廣泛又深入，且要求有一定的臨床經(jīng)驗。為此，我們應(yīng)該選擇有實際工作經(jīng)驗的教師上課，同時在教學(xué)過程中不斷提高改進其教學(xué)方法；讓教師定期到醫(yī)院、藥房及藥店輪訓(xùn)學(xué)習(xí)；積極開展教研室內(nèi)部合理用藥討論會,以便教師之間能夠及時交流用藥知識,營造濃厚的學(xué)術(shù)氛圍。除了要注重藥學(xué)及相關(guān)學(xué)科的知識更新外,還應(yīng)注意學(xué)習(xí)藥政法規(guī)及藥品使用管理中的各項規(guī)定,加強法制觀念,依法辦事。3.5開展多種形式的社會服務(wù)高職藥學(xué)教育工作者在做好基礎(chǔ)教育的同時，應(yīng)利用自身優(yōu)勢，加強對在職人員的繼續(xù)教育,有針對性地制訂培訓(xùn)計劃,因地制宜創(chuàng)造條件,采用多種形式(如對外培訓(xùn)、函授等)提高藥學(xué)工作者的專業(yè)水平。定期組織為藥學(xué)工作者和學(xué)生作有關(guān)合理用藥新知識、新進展的學(xué)術(shù)報告,更新其合理用藥的觀念,提高相關(guān)知識水平。3.6普及用藥常識隨著經(jīng)濟的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)知識的普及,人們越來越重視自身的保健,自我藥療行為已成為醫(yī)療保健體系的重要組成部分，那么消費者對于疾病和藥物療效的認(rèn)知就很重要。在學(xué)院范圍內(nèi)，除了對藥學(xué)類專業(yè)的學(xué)生進行必要的專業(yè)教育外，教師可以開設(shè)醫(yī)藥類的公共選修課，或者舉辦各種類型的講座，讓非本專業(yè)的學(xué)生能夠了解到這些知識。對外，可以進行各種形式的用藥宣傳活動，或是發(fā)放宣傳冊，或是搞一些宣傳展板，幫助消費者盡可能多的了解用藥常識。安全用藥關(guān)系到人民群眾生命健康,作為藥學(xué)服務(wù)的直接實施者，藥學(xué)工作者所接受的教育至關(guān)重要。藥學(xué)高職教育工作者應(yīng)該從思想上積極轉(zhuǎn)換觀念，認(rèn)真探索行之有效的教學(xué)方法，使合理用藥的觀念深入人心，使學(xué)生能盡快適應(yīng)崗位需要，指導(dǎo)患者安全有效用藥。

【參考文獻】[1]唐鏡波,陳香譜,譚軍,等.合理用藥調(diào)研的國際指標(biāo)[J].中國藥房,1995,6(4):6.[2]彭正發(fā)，郭婧，李禮強.藥學(xué)服務(wù)將成為藥店競爭的新手段[J].首都醫(yī)藥，2004（21）：5-6.[3]田麗娟,于培明.我國不合理用藥原因分析及對策探討[J].中國藥房,2005,16(16):1205-1204.零排放豬舍基質(zhì)墊層微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性分析摘要：用微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記總量，分析零排放豬場豬舍基質(zhì)墊層微生物群落的數(shù)量變化，日本洛東微生物菌種處理組和零排放I號菌種處理組各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記含量變化趨勢相近?；|(zhì)墊層微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記檢測出37個生物標(biāo)記，構(gòu)成微生物群落的指紋圖譜，含量最高的前四個生物標(biāo)記為：O42細菌16:00含量為431260，O88細菌18:1ω9c含量為413075，O87厭氧細菌18:1ω7c含量為101368，O34耗氧細菌15:0ISO含量為90328.不同的生物標(biāo)記多樣性指數(shù)在基質(zhì)墊層不同層次分布不同，可作為衡量特定微生物生物標(biāo)記功能的一個指標(biāo)。通過基質(zhì)墊層微生物脂肪酸生物標(biāo)記特征指數(shù)B的分析，提出了微生物群落分布的特征指標(biāo)，生物標(biāo)記特征指數(shù)B越高，表明微生物群落中的細菌和真菌含量越高，有利于基質(zhì)墊層分解糞便排泄物，可作為基質(zhì)墊層微生物群落變化優(yōu)劣的特征性指標(biāo)；通過基質(zhì)墊層耗氧細菌和厭氧細菌脂肪酸生物標(biāo)記發(fā)酵指數(shù)F的分析，揭示了基質(zhì)墊層發(fā)酵特性，發(fā)酵指數(shù)F越高，表明耗氧細菌起的作用越大，耗氧細菌越小，生物標(biāo)記的發(fā)酵指數(shù)可以作為研究糞便排泄物的微生物分解過程的指數(shù)。ThediversityofPLlFAsbiomarkersforthemicrobialcommunityinthestromacushionofnon-pollutionpigstyLiuBo1*,ZhengXuefang1,LinYingzhi1,LanJianglin1,LinBin2,YeYaohui3,LuoYangfen3(1.AgriculturalBio-ResourcesResearchInstitute,FujianAcademyofAgriculturalSciences;2.AgriculturalEngineeringResearchInstitute,FujianAcademyofAgriculturalSciences;3.FujianNingdeAgriculturalResearchInstitute)Abstract:ThePLFAsbiomarkerswereintroducedintoanalyzingtheThediversityofPLFAsbiomarkersforthemicrobialcommunityinthestromacushionofnon-pollutionpigsty.ThemicrobialstrainsofLUODONandLINGPAIFANG#1wereusedtotreatthestromacushioninthenon-pollutionpigsty.Theresultsshowedthattheefficiencyoffomentationonthepigeffluentbythetwostrainsweresimilar.37ofPLFAsbiomarkersweredetectedoutbytheMIDImicrobialidentifysystem,whichconstructedthefingerprintingofthemicrobialcommunityinthestromacushioninthenon-pollutionpigsty.ThefourmosthighofPLFAswerethebacteriunbiomarkerof16:00with431260，bacteriumbiomarkerof18:1ω9cwith413075，theanaerobicbacteriumbiomarkerof18:1ω7cwith101368，theaerobicbacteriumof15:0ISOwith90328.ThedifferentPLFAsbiomarkersweredistributedinthedifferentlayersofstromacushionwithdifferentdensities.Thenewcharacteristicindex(B)ofthePLFAsbiomarkerswasbuiltupasB=[PLFAsbacterium×PLFAsfungus]/[PLFAsactinomycetes×PLFAsprotest]toanalyzethestructureofmicrobialcommunity.Thenewfermentationindex(F)ofthePLFAsbiomarkerswasbuiltupasF=[aerobicbacteriumPLFAs/anaerobicbacteriumPLFAs]todistinguishthefermentationstateinthestromacushionofpigsty.

1引言日本生物發(fā)酵舍零排放養(yǎng)豬法是根據(jù)微生態(tài)理論和生物發(fā)酵理論，采用特殊工藝加工而成的飼料添加劑，在豬舍內(nèi)建立并全面鋪設(shè)一定厚度的谷殼、鋸末和飼料添加劑等混合有機物墊料，豬飼養(yǎng)在上面，其所排出的糞尿在豬棚內(nèi)經(jīng)微生物完全發(fā)酵迅速降解、消化，從而達到免沖洗豬欄、無臭味、零排放，從源頭實現(xiàn)環(huán)保、無公害養(yǎng)殖目的。其技術(shù)原理是將添加劑、鋸木屑、谷殼、米糠、生豬糞按一定比例摻拌均勻并調(diào)整水分堆積發(fā)酵使有益微生物菌群繁殖，經(jīng)充分發(fā)酵后，鋪墊豬舍（40-100公分），在墊料中形成以有益菌為強勢菌的生物發(fā)酵墊料，使豬舍中病原菌得以抑制，保證了生豬的健康生長。該生物發(fā)酵墊料中的有益菌以生豬糞尿為營養(yǎng)保持運行，調(diào)節(jié)養(yǎng)殖密度，使生豬糞尿得到充分分解并轉(zhuǎn)化為水分得到揮發(fā)，達到豬舍無臭、無排放的環(huán)保要求，豬舍墊料一次投入，可連續(xù)使用三年不用更換。采用生物發(fā)酵舍零排放養(yǎng)豬技術(shù)后，由于有機墊料里含有相當(dāng)活洛性的特殊有益微生物，有夠迅速有效地降解、消化豬的糞尿排泄物。不需要每天清掃豬欄，沖洗豬舍，于是沒有任何沖洗圈舍的污水，從而沒有任何廢棄物排放出養(yǎng)豬場豬舍，真正達到養(yǎng)豬零排放的目的。微生物群落在零排放豬舍中起到?jīng)Q定性的作用，然而，基質(zhì)墊層中的微生物群落動態(tài)研究，顯得十分的薄弱，一方面是由于許多功能微生物無法人工培養(yǎng)，另一方面，用分離微生物的方法研究微生物群落動態(tài)工作量繁重，因此，相關(guān)的研究未見報道。作者引入FAME譜圖分析方法，研究微生物脂肪酸生物標(biāo)記（biomarker）變化動態(tài)，指示微生物群落的變化。該墊料在使用1年半后，形成可直接用于果樹、農(nóng)作物有機肥，達到循環(huán)利用、變廢為寶的效果，另外，由于生物發(fā)酵舍養(yǎng)豬技術(shù)不有需要用水沖豬舍、不需要每天清除豬糞；采用自動給食、自動飲水技術(shù)等眾多優(yōu)勢，達到了省工節(jié)本的目的。可節(jié)水90%以上，在規(guī)模養(yǎng)豬場應(yīng)用這項技術(shù)，經(jīng)濟效益十分明顯。FAME譜圖分析方法的原理是基于脂類幾乎是所有生物細胞膜的重要組成部分[1～3]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Fraterrigo</Author><Year>2006</Year><RecNum>53</RecNum><record><rec-number>53</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">53</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Fraterrigo,J.M.</author><author>Balser,T.C.</author><author>Turner,M.G.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofZoology,UniversityofWisconsin,Madison,Wisconsin53706,USA.jmfrater@</auth-address><titles><title>Microbialcommunityvariationanditsrelationshipwithnitrogenmineralizationinhistoricallyalteredforests</title><secondary-title>Ecology</secondary-title></titles><pages>570-9</pages><volume>87</volume><number>3</number><keywords><keyword>*Agriculture</keyword><keyword>AppalachianRegion</keyword><keyword>Bacteria/growth&development</keyword><keyword>Biomass</keyword><keyword>Ecosystem</keyword><keyword>FattyAcids/analysis</keyword><keyword>Fungi/growth&development</keyword><keyword>Nitrogen/*metabolism</keyword><keyword>Phospholipids/analysis</keyword><keyword>Soil/*analysis</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword><keyword>Trees/*microbiology</keyword></keywords><dates><year>2006</year><pub-dates><date>Mar</date></pub-dates></dates><accession-num>16602287</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16602287</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Fraterrigo,Balseretal.2006),不同微生物體內(nèi)往往具有不同的磷脂脂肪酸組成和含量水平，其含量和結(jié)構(gòu)具有種屬特征或與其分類位置密切相關(guān)，能夠標(biāo)志某一類或某種特定微生物的存在，是一類最常見的生物標(biāo)記物。但是古生菌不能使用FAME譜圖進行分析,因為它的極性脂質(zhì)是以醚而不是酯鍵的形式出現(xiàn)[4]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Steger</Author><Year>2003</Year><RecNum>168</RecNum><record><rec-number>168</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">168</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Steger,K.</author><author>Jarvis,A.</author><author>Smars,S.</author><author>Sundh,I.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofMicrobiology,SwedishUniversityofAgriculturalSciences,Box7025,SE-75007Uppsala,Sweden.kristin.steger@mikrob.slu.se</auth-address><titles><title>Comparisonofsignaturelipidmethodstodeterminemicrobialcommunitystructureincompost</title><secondary-title>JMicrobiolMethods</secondary-title></titles><pages>371-82</pages><volume>55</volume><number>2</number><keywords><keyword>Biodegradation,Environmental</keyword><keyword>Bioreactors</keyword><keyword>FattyAcids/*analysis/metabolism</keyword><keyword>GasChromatography-MassSpectrometry</keyword><keyword>Phospholipids/*analysis/metabolism</keyword><keyword>RefuseDisposal/*methods</keyword><keyword>Soil/*analysis</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword></keywords><dates><year>2003</year><pub-dates><date>Nov</date></pub-dates></dates><accession-num>14529958</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=14529958</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Steger,Jarvisetal.2003)。此外,磷脂不能作為細胞的貯存物質(zhì),一旦生物細胞死亡，其中的磷脂化合物就會馬上消失,因此，磷脂脂肪酸可以代表微生物群落中“存活”的那部分群體[5]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Masood</Author><Year>2005</Year><RecNum>709</RecNum><record><rec-number>709</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">709</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Masood,A.</author><author>Stark,K.D.</author><author>Salem,N.,Jr.</author></authors></contributors><auth-address>LaboratoryofMembraneBiochemistryandBiophysics,NationalInstitutesonAlcoholAbuseandAlcoholism,NationalInstitutesofHealth,Rockville,MD,USA.</auth-address><titles><title>Asimplifiedandefficientmethodfortheanalysisoffattyacidmethylesterssuitableforlargeclinicalstudies</title><secondary-title>JLipidRes</secondary-title></titles><pages>2299-305</pages><volume>46</volume><number>10</number><keywords><keyword>Chemistry,Clinical/methods</keyword><keyword>Chromatography,Gas/*methods</keyword><keyword>Esters/*analysis/chemistry</keyword><keyword>FattyAcids/*analysis</keyword><keyword>Humans</keyword></keywords><dates><year>2005</year><pub-dates><date>Oct</date></pub-dates></dates><accession-num>16061957</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16061957</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Masood,Starketal.2005)。目前所知道的微生物已經(jīng)超過了十萬種，這還是一個正在急劇擴大著的數(shù)字?？焖佟?zhǔn)確鑒定微生物日益成為臨床、環(huán)境和工業(yè)領(lǐng)域的迫切需要。通常把鑒定微生物的技術(shù)分成四個不同的水平：①細胞的形態(tài)和習(xí)性水平②細胞組分水平③蛋白質(zhì)水平④基因或DNA水平[6]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Webster</Author><Year>2006</Year><RecNum>186</RecNum><record><rec-number>186</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">186</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Webster,G.</author><author>Watt,L.C.</author><author>Rinna,J.</author><author>Fry,J.C.</author><author>Evershed,R.P.</author><author>Parkes,R.J.</author><author>Weightman,A.J.</author></authors></contributors><auth-address>CardiffSchoolofBiosciences,CardiffUniversity,MainBuilding,ParkPlace,Cardiff,WalesCF103TL,UK.websterg@cardiff.ac.uk</auth-address><titles><title>Acomparisonofstable-isotopeprobingofDNAandphospholipidfattyacidstostudyprokaryoticfunctionaldiversityinsulfate-reducingmarinesedimentenrichmentslurries</title><secondary-title>EnvironMicrobiol</secondary-title></titles><pages>1575-89</pages><volume>8</volume><number>9</number><keywords><keyword>DNAFingerprinting/methods</keyword><keyword>DNA,Bacterial/isolation&purification</keyword><keyword>FattyAcids</keyword><keyword>Genes,Bacterial/genetics</keyword><keyword>GeologicSediments/*microbiology</keyword><keyword>IsotopeLabeling/methods</keyword><keyword>MolecularSequenceData</keyword><keyword>Phospholipids/chemistry</keyword><keyword>Phylogeny</keyword><keyword>RNA,Ribosomal,16S/genetics</keyword><keyword>Sulfates/metabolism</keyword><keyword>Sulfur-ReducingBacteria/*classification/genetics/metabolism</keyword></keywords><dates><year>2006</year><pub-dates><date>Sep</date></pub-dates></dates><accession-num>16913918</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16913918</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Webster,Wattetal.2006)。。在微生物分類學(xué)發(fā)展的早期，主要的分類鑒定指標(biāo)尚停留在細胞的形態(tài)和習(xí)性水平，從本世紀(jì)60年代起，后三個水平的分類鑒定理論和技術(shù)開始發(fā)展。脂類是最常見的生物標(biāo)志物，現(xiàn)代微生物學(xué)研究表明：微生物細胞結(jié)構(gòu)中普遍含有的脂肪酸成分與微生物DNA具有高度的同源性，各種微生物具有其特征性的細胞脂肪酸指紋圖譜[7]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Neufeld</Author><Year>2007</Year><RecNum>118</RecNum><record><rec-number>118</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">118</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Neufeld,J.D.</author><author>Dumont,M.G.</author><author>Vohra,J.</author><author>Murrell,J.C.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofBiologicalSciences,UniversityofWarwick,Coventry,CV47AL,UK.</auth-address><titles><title>Methodologicalconsiderationsfortheuseofstableisotopeprobinginmicrobialecology</title><secondary-title>MicrobEcol</secondary-title></titles><pages>435-42</pages><volume>53</volume><number>3</number><keywords><keyword>Biodiversity</keyword><keyword>CarbonIsotopes/diagnosticuse</keyword><keyword>DNA/analysis/isolation&purification</keyword><keyword>*EnvironmentalMicrobiology</keyword><keyword>FattyAcids/analysis</keyword><keyword>IsotopeLabeling/*methods</keyword><keyword>RNA/analysis</keyword><keyword>SensitivityandSpecificity</keyword></keywords><dates><year>2007</year><pub-dates><date>Apr</date></pub-dates></dates><accession-num>17072677</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=17072677</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Neufeld,Dumontetal.2007)，脂類作為標(biāo)志物用于細菌鑒定早在6O年代就開始了。利用GC或GC-MS分析微生物細胞的脂肪酸分布，是從細胞組分水平上鑒定微生物的重要內(nèi)容，開辟了一個微生物檢測和鑒定的新途徑[8]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Winding</Author><Year>2005</Year><RecNum>192</RecNum><record><rec-number>192</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">192</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Winding,A.</author><author>Hund-Rinke,K.</author><author>Rutgers,M.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofEnvironmentalChemistryandMicrobiology,NationalEnvironmentalResearchInstitute(NERI),Frederiksborgvej399,P.O.Box358,4000Roskilde,Denmark.aw@dmu.dk</auth-address><titles><title>Theuseofmicroorganismsinecologicalsoilclassificationandassessmentconcepts</title><secondary-title>EcotoxicolEnvironSaf</secondary-title></titles><pages>230-48</pages><volume>62</volume><number>2</number><keywords><keyword>Bacteria</keyword><keyword>Biomass</keyword><keyword>CarbonDioxide/metabolism</keyword><keyword>Ecology</keyword><keyword>EnvironmentalMonitoring/*methods</keyword><keyword>Fungi</keyword><keyword>Mycorrhizae</keyword><keyword>Nitrogen/metabolism</keyword><keyword>Oxygen/metabolism</keyword><keyword>*Soil</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword></keywords><dates><year>2005</year><pub-dates><date>Oct</date></pub-dates></dates><accession-num>15925407</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=15925407</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Winding,Hund-Rinkeetal.2005)。磷脂脂肪酸PLlFAs(phospholipidsfattyacid,磷脂脂肪酸PlFAs)法是一種可用于定性和定量分析土壤微生物復(fù)雜微生物群落多樣性的方法[9-11]ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Torneman</Author><Year>2007</Year><RecNum>175</RecNum><record><rec-number>175</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">175</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Torneman,N.</author><author>Yang,X.</author><author>Baath,E.</author><author>Bengtsson,G.</author></authors></contributors><titles><title>SpatialCovariationofMicrobialCommunityCompositionandPolycyclicAromaticHydrocarbonConcentrationinaCreosotePollutedSoil</title><secondary-title>EnvironToxicolChem</secondary-title></titles><pages>1</pages><dates><year>2007</year><pub-dates><date>Dec17</date></pub-dates></dates><accession-num>18085835</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=18085835</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Torneman,Yangetal.2007)?磷脂是所有生活細胞的細胞膜的基本組分，具有結(jié)構(gòu)多樣性和高的生物學(xué)特異性，是特別有效的生物標(biāo)記物。本研究應(yīng)用PlFAs法分析零排放豬場豬舍基質(zhì)墊層微生物群落磷脂脂肪酸生物標(biāo)記特征,并結(jié)合Shannon-wiener(H1)?豐富度指數(shù)(S)和Pielou均勻度(J)等多樣性指數(shù)測定度方法,進行微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記總量的比較、微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的檢測和聚類分析、微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性指數(shù)、基質(zhì)墊層微生物脂肪酸生物標(biāo)記特征指數(shù)B的分析，基質(zhì)墊層耗氧細菌和厭氧細菌脂肪酸生物標(biāo)記發(fā)酵指數(shù)F的分析，揭示養(yǎng)豬糞便排放過程，基質(zhì)墊層微生物變化的特點，從而了解微生物群落的變化，找出零排放豬場豬舍基質(zhì)墊層糞便分解功能的微生物指標(biāo)，作為監(jiān)控零排放豬場豬舍基質(zhì)墊層功能發(fā)揮的標(biāo)準(zhǔn)。2材料與方法2.1基質(zhì)墊層微生物群落取樣零排放豬場豬舍基質(zhì)墊層微生物群落取樣于寧德地區(qū)農(nóng)科所養(yǎng)殖場，基質(zhì)墊層用日本洛東微生物菌種（福州洛東公司生產(chǎn)）處理兩個月，零排放I號菌種（研究者自行研制）處理一個月，兩個欄緊靠著，基質(zhì)墊層高度80cm，養(yǎng)豬分別在前者60和后者30天后進行取樣；取樣層分為第一層第1層（0-20cm）、第二層第2層（20-40cm）、第三層第3層（40-60cm）、第四層第4層（60-80cm）；取樣方法為五點取樣，每層的樣本充分混合后取出小樣進行微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記分析。2.2微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的檢測ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Margesin</Author><Year>2007</Year><RecNum>109</RecNum><record><rec-number>109</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="fapdftxw19rrf3ez2en5p9amvewz0ax0fxee">109</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Margesin,R.</author><author>Hammerle,M.</author><author>Tscherko,D.</author></authors></contributors><auth-address>InstituteofMicrobiology,LeopoldFranzensUniversity,Technikerstrasse25,A-6020Innsbruck,Austria.Rosa.Margesin@uibk.ac.at</auth-address><titles><title>Microbialactivityandcommunitycompositionduringbioremediationofdiesel-oil-contaminatedsoil:effectsofhydrocarbonconcentration,fertilizers,andincubationtime</title><secondary-title>MicrobEcol</secondary-title></titles><pages>259-69</pages><volume>53</volume><number>2</number><keywords><keyword>Biodegradation,Environmental</keyword><keyword>ColonyCount,Microbial</keyword><keyword>Dihydropyridines</keyword><keyword>*EnvironmentalMonitoring</keyword><keyword>FattyAcids/metabolism</keyword><keyword>Fertilizers/analysis</keyword><keyword>*Gasoline/analysis</keyword><keyword>Gram-NegativeBacteria/growth&development/isolation&</keyword><keyword>purification/*metabolism</keyword><keyword>Hydrocarbons/analysis</keyword><keyword>Lipase/metabolism</keyword><keyword>Petroleum/analysis/metabolism</keyword><keyword>Phospholipids/metabolism</keyword><keyword>*SoilMicrobiology</keyword><keyword>SoilPollutants/*metabolism</keyword><keyword>SpeciesSpecificity</keyword><keyword>TimeFactors</keyword></keywords><dates><year>2007</year><pub-dates><date>Feb</date></pub-dates></dates><accession-num>17265002</accession-num><urls><related-urls><url>/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=17265002</url></related-urls></urls></record></Cite></EndNote>(Margesin,Hammerleetal.2007)PLFAs的提取方法參考Frostegard[12]和Kourtev[13]略做修改。脂肪酸提取步驟：1）脂肪酸的釋放和甲酯化，取10g土樣于50ml離心管中，加入20ml0.2mol/L的KOH甲醇溶液，斡旋震蕩５min，并于37度水浴溫浴１h，每10min斡旋樣品一次。2）中和溶液pH值：加入3ml溶1.0mol/L的醋酸溶液，充分搖勻。3）脂肪酸的萃?。杭尤?0ml正已烷，充分搖勻，2000r離心15min，取上層正己烷相于干凈玻璃試管中，吹干，溶劑揮發(fā)。4）在玻璃試管中加入0.6ml體積比為1:1的正已烷:甲基丁基醚溶液中，充分溶解３-５min，轉(zhuǎn)入GC小瓶，用于脂肪酸測定。溶液配制：溶液1，0.2MKOH甲醇溶液。溶液2，1.0MHAc溶液。溶液3，正己烷。溶液4，正己烷:甲基叔丁基醚1:1?脂肪酸提取步驟：1）脂肪酸的釋放和甲酯化，取10g土樣于50ml離心管中，加入20ml溶液１，斡旋震蕩５min，并于37度水浴溫?。県，每10min斡旋樣品一次。中和溶液pH：加入3ml溶液２，充分搖勻。脂肪酸的萃取：加入10ml溶液３，充分搖勻，2000r離心15min，取上層正己烷相于干凈玻璃試管中，吹干，溶劑揮發(fā)。在玻璃試管中加入0.6ml溶液４，充分溶解３-５min，轉(zhuǎn)入GC小瓶，用于脂肪酸測定。樣品脂肪酸成份檢測及成份分析參照Margesin等[14]。脂肪酸成份檢測：用微生物自動分析儀（SherlockMIS美國MIDI公司生產(chǎn)）分析微生物脂肪酸生物標(biāo)記，在下述氣相色譜條件下平行分析脂肪酸甲酯混合物標(biāo)樣和待檢樣本：二階程序升高柱溫，170℃起始，經(jīng)5℃/min升至260℃，而后經(jīng)40℃/min升至310℃，維持90S；汽化室溫度250℃；檢測器溫度300℃；載氣為H2(2ml/min)，進樣模式為分流進樣，分流比為100:1；輔助氣：Air（350ml/min），H2（30ml/min）；尾吹氣為N2(30ml/min)；柱前壓l0.00psi(1Psi=6.895kPa)；進樣量lμl。脂肪酸成份分析：系統(tǒng)根據(jù)各組分保留時間計算等鏈長(ECl)值確定目標(biāo)組分的存在、采用峰面積歸一化法計算各組分的相對含量，再將二者與系統(tǒng)譜庫中的標(biāo)準(zhǔn)菌株數(shù)值匹配計算相似度(similarityindex，SI)，從而給出一種或幾種可能的菌種鑒定結(jié)果。一般以最高SI的菌種名稱作為鑒定結(jié)果，但當(dāng)其報告的幾個菌種的SI比較接近時，則根據(jù)色譜圖特征及菌落生長特性進行綜合判斷。以脂肪酸混合標(biāo)樣校正保留時間。2.3微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記總量的比較將兩個微生物菌種處理的基質(zhì)墊層各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記分別計算總和，以微生物脂肪酸生物標(biāo)記總和代表微生物群落總量，作圖比較不同菌種處理的基質(zhì)墊層各層微生物群落總量的變化，分析處理的效果。2.4微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的檢測將樣本微生物脂肪酸生物標(biāo)記（PFlAs）分析的結(jié)果，以處理層次為指標(biāo)，以脂肪酸生物標(biāo)記為樣本，構(gòu)建表格，總體分析各脂肪酸生物標(biāo)記（PFlAs）在各處理基質(zhì)墊層中的分布。2.5微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的聚類分析將樣本微生物脂肪酸生物標(biāo)記（PFlAs）分析的結(jié)果，以處理層次為指標(biāo)，以脂肪酸生物標(biāo)記為樣本，構(gòu)建矩陣，將數(shù)據(jù)進行中心化處理，蘭氏歐氏距離為聚類尺度，用類平均法對數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類，分析各類的特點。2.6微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記多樣性指數(shù)引入群落生態(tài)學(xué)Pielou均勻度指數(shù)（J），對微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記在不同處理各層次分布的均勻度進行分析，均勻度指數(shù)越高，表明微生物生物標(biāo)記（PFlAs）在基質(zhì)墊層各層次分布的頻次較高，分布較為均勻，其計算公式為：J=-∑PilnPi/lnS式中S為群落中的脂肪酸的總種類數(shù)。引入群落生態(tài)學(xué)多樣性指數(shù)香農(nóng)指數(shù)（H），對微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記在不同處理各層次分布的多樣性指數(shù)進行分析，多樣性指數(shù)高，表明微生物生物標(biāo)記（PFlAs）在基質(zhì)墊層各層次分布的總量較高，分布的格局較復(fù)雜，Shannon-wiener多樣性指數(shù)（H1）的計算公式為：H=-∑PilnPi式中，Pi=Ni/N，Ni為處理i的特征脂肪酸個數(shù)，N為該試驗中總特征脂肪酸個數(shù)。S為特征脂肪酸i在供測土樣中出現(xiàn)的次數(shù)，即豐富度指數(shù)。2.7不同基質(zhì)墊層特征微生物脂肪酸生物標(biāo)記特征指數(shù)（B）的分析選用微生物脂肪酸生物標(biāo)記16:00代表細菌數(shù)量，18:3ω6c(6,9,12)代表真菌數(shù)量，20:4ω6,9,12,15c代表原生生物數(shù)量，TBSA10Me18:0代表放線菌數(shù)量，比較分析基質(zhì)墊層各層次微生物分布的情況。構(gòu)建生物標(biāo)記特征指數(shù)，細菌用16:00代表，真菌用18:3ω6c(6,9,12)代表，原生動物用20:4ω6,9,12,15c代表，放線菌用TBSA10Me18:0代表，生物標(biāo)記特征指數(shù)（B）公式為：特征指數(shù)B越小，表明細菌和真菌的含量相對較少。2.8不同基質(zhì)墊層耗氧細菌和厭氧細菌脂肪酸生物標(biāo)記發(fā)酵指數(shù)F的分析選用微生物脂肪酸生物標(biāo)記17:0ISO代表耗氧細菌，18:1ω7c代表厭氧細菌，計算耗氧細菌/厭氧細菌的比例，分析基質(zhì)墊層各層次耗氧細菌和厭氧細菌分布的情況。用17:0ISO代表耗氧細菌，用18:1ω7c代表厭氧細菌，構(gòu)建發(fā)酵指數(shù)F，公式為：3結(jié)果與分析3.1微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的比較試驗結(jié)果見圖1。脂肪酸生物標(biāo)記總量代表著微生物的總含量。日本洛東微生物菌種處理組和零排放I號菌種處理組各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記含量變化趨勢相近，兩個處理的第二層第2層微生物含量最低，其余較高；前者的各層微生物脂肪酸生物標(biāo)記含量比后者略高。日本洛東微生物菌種處理組第一層第1層為268249、第二層第2層為133483、第三層第3層為270406、第四層第4層為271520；零排放I號菌種處理組203721、第二層第2層184572、第三層第3層220481、第四層第4層236522。日本洛東微生物菌種零排放I號菌種圖1不同微生物菌種處理組各層脂肪酸生物標(biāo)記總量變化3.2微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記在基質(zhì)墊層中的分布試驗結(jié)果見表1。從不同微生物菌種處理組基質(zhì)墊層的不同層次中分析出37個脂肪酸生物標(biāo)記，指示著不同類群的微生物，包括細菌、真菌、放線菌、原生生物等。不同脂肪酸生物標(biāo)記在基質(zhì)墊層的各層次的分部有幾種類型：（1）生物標(biāo)記數(shù)量小，在各層中的分布不完全，如11:0ISO3OH指示著耗氧細菌，數(shù)量在220以下，在洛東微生物菌種處理組僅分布在第二層第2層（20-40cm）,其余層次沒有分布，零排放I號微生物菌種處理組分布在第一、二、三層次，第四層第4層次沒有分布；（2）生物標(biāo)記數(shù)量小，在各層次的分布為完全分布，如12:00指示著細菌，數(shù)量在576-1329之間，在兩種微生物菌種處理的基質(zhì)墊層的各層完全分布；（3）生物標(biāo)記數(shù)量大，在各層次的分布不完全，如17:0ISO3OH指示著耗氧細菌，數(shù)量在1854-10315之間，在洛東微生物菌種處理組各層次中僅在第二、三層中分布，零排放I號微生物菌種處理組各層次中在第一、三、四層中分布，第二層第2層沒有分布；（4）生物標(biāo)記數(shù)量大，在各層次的分布為完全分布，如18:1ω9c指示著細菌，數(shù)量在31320-107126之間，在兩種微生物菌種處理的基質(zhì)墊層的各層完全分布。表1不同微生物菌種處理組脂肪酸生物標(biāo)記在各層的分布生物標(biāo)記序號/代碼/指示微生物種類洛東微生物菌種處理組零排放I號微生物菌種處理組第一層第1層第二層第2層第三層第3層第四層第4層第一層第1層第二層第2層第三層第3層第四層第4層11:0ISO1. O9022000149193139011:0ISO3OH2. O10441038303650060912:003. O117797067815761329115595796812:03OH4. O135780547048042155636813:0ISO5. O224270366036526343330314:006. O243518176532312105358635193664344414:0ISO7. O26182660314391021148113141450121115:0ANTEISO8. O3314518448395684518110921081012235926815:0ISO9. O341547952261249484371277511449131801128815:0ISO3OH10. O35332152133011301256433312378259015:1ISOG11. O3815310134351844953158254816:0012. O42細菌592613237860500667355123548358561785661516:010methyl13. O43硫酸鹽還原細菌9400275592319427000680316:0ANTEISO14. O4610414369097435775101091114316:0ISO15. O4710313506785565281708166967885738716:0Nalcohol16. O49544064661048573856086816:1ω5c17. O56甲烷氧化菌1806016651985123201287217016:1ω9c18. O59001027000756017:0019. O603213179330582820289627783312329017:010methyl20. O611252818117756550637854359317:0ANTEISO21. O637216246150272967485547535438471517:0CYClO22. O645972218548562938579942415849580117:0ISO23. O65耗氧細菌4989198644092745366639664032369517:0ISO3OH24. O66018541031507664064171102017:1ω8c25. O712375110423992779183914711813190817:1ω9cISO26. O1200000449253705119018:0027. O7392406890103538698782072718510869318:0ISO28. O2006078279448504271517443674408633218:010MeTBSA29. O122放線菌3572129832311541243523422518412718:1ω7c11methyl30. O54779182463360024280404418:1ω7c31. O87厭氧細菌16247672216772137581129212713125031136118:1ω9c32. O885311335554592591071263498231320409815074018:3ω6c(6,9,12)33. O92真菌2252151230472010181716911916222219:0ω8cCYClO34. O971145361371100011264827466018947776220:0035. O1001462173412571159117711221384120320:1ω9c36. O1047101291114711817388690020:4ω6,9,12,15c37. O199原生動物954313665926244130501603346034333.3微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的聚類分析分析結(jié)果見圖2。當(dāng)λ1=6.791時，可將基質(zhì)墊層的微生物脂肪酸生物標(biāo)記分為23類，第一類類型Ⅰ中含有脂肪酸生物標(biāo)記15:0ANTEISO（耗氧細菌）、18:00（細菌）、15:0ISO（耗氧細菌）、16:0ISO（耗氧細菌）、18:1ω7c（厭氧細菌）、16:00（細菌）和、18:1ω9c（細菌），其特征為生物標(biāo)記含量高，數(shù)量在67475-431260之間，同時在不同層次基質(zhì)墊層中皆為完全分布、微生物都是細菌；。第二類型Ⅱ中含有脂肪酸生物標(biāo)記17:0CYClO、19:0ω8cCYClO、17:0ISO3OH和18:1ω7c11methyl，其特征是生物標(biāo)記含量中等，17:0CYClO和19:0ω8cCYClO兩種脂肪酸標(biāo)記在不同層次基質(zhì)墊層中完全分布，17:0ISO3OH和18:1ω7c11methyl兩種脂肪酸標(biāo)記在不同層次基質(zhì)墊層中不完全分布；類Ⅲ為其余的脂肪酸生物標(biāo)記，數(shù)量差異較大，但都在60000以下，在基質(zhì)墊層中分布的形式多樣化，有完全分布和不完全分布，微生物中含有細菌、真菌、放線菌、原生生物等。圖2基質(zhì)墊層微生物群落脂肪酸生物標(biāo)記的聚類分析3.4微生物群落脂肪酸生物