實(shí)驗(yàn)13 DNA片段的PCR擴(kuò)增課件

DNA片段的PCR擴(kuò)增浙江省麗水中學(xué)李成惠實(shí)驗(yàn)13《生物學(xué)·選修1》浙科版中央電視臺(tái)綜合頻道大型公益尋人行動(dòng)《等著我》是全國(guó)首檔國(guó)家力量全媒體大型公益尋人節(jié)目，也是中央電視臺(tái)2014年重磅推出的全新公益欄目。DNA的體內(nèi)復(fù)制和體外復(fù)制體內(nèi)DNA復(fù)制體外DNA復(fù)制體內(nèi)DNA復(fù)制體外DNA復(fù)制

模板DNA4種dNTPTaq聚合酶（耐高溫）引物Ⅰ，引物Ⅱ（DNA）模板原料酶引物親代DNA4種脫氧核苷酸（dNTP）解旋酶,DNA聚合酶等

RNA原則堿基互補(bǔ)配對(duì)原則堿基互補(bǔ)配對(duì)原則PCR-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction）

是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。PCR儀PCR實(shí)驗(yàn)操作1.每組取81μL已配好的預(yù)混液（在標(biāo)有TaqDNA聚合酶的離心管中）加入到1個(gè)0.5ml離心管內(nèi)，然后按下表依次加入相關(guān)液體得到反應(yīng)液。2.每組取20μL剛配好的反應(yīng)液（0.5ml的離心管中）加入到1個(gè)0.2ml離心管內(nèi)，加入15μL石蠟封閉體系3.將離心管放入全自動(dòng)基因擴(kuò)增儀中，

按下面程序設(shè)定參數(shù)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)反應(yīng)試劑用量dNTPmixture4μL引物I5μL引物II5μL模板DNA5μL循環(huán)過(guò)程溫度時(shí)間循環(huán)次數(shù)預(yù)變性95℃30s變性95℃20s0次或12次或30次退火52℃20s延伸72℃20s保溫72℃30s總計(jì)0s或780s或1860s問(wèn)題2經(jīng)12次復(fù)制后可得到多少種分子量不同的DNA片段？其中哪種類型的DNA片段含量最多？問(wèn)題1復(fù)制幾次后可得到只含有目的基因的DNA片段？活動(dòng)：繪制PCR擴(kuò)增目的基因模式圖目的基因活動(dòng)：繪制PCR擴(kuò)增目的基因模式圖目的基因12次循環(huán)后第一次復(fù)制第二次復(fù)制第三次復(fù)制復(fù)制三次后出現(xiàn)只含有目的基因的DNA片段30次循環(huán)后活動(dòng)：繪制PCR擴(kuò)增目的基因模式圖問(wèn)題3擴(kuò)增獲得的這些DNA片段，用怎樣的方法來(lái)檢測(cè)或分離目的基因呢？問(wèn)題2經(jīng)12次復(fù)制后可得到多少種分子量不同的DNA片段？其中哪種類型的DNA片段含量最多？問(wèn)題1復(fù)制幾次后可得到只含有目的基因的DNA片段？活動(dòng)：繪制PCR擴(kuò)增目的基因模式圖目的基因瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作1.溶膠2.制膠瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作3.加樣瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作12次循環(huán)組30次循環(huán)組4.電泳瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作5.觀察瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作DNA圖譜觀察儀瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)原理：

1.DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。2.4SRedPlus核酸染色劑能與DNA靜電結(jié)合。4SRedPlus在紫外光

下可獲得最佳激發(fā)，在DNA圖譜觀察儀下可看到明顯的DNA條帶。1溶膠2制膠3加樣4電泳瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作5觀察瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)操作6.分析與討論0次12次12次30次30次2000bpMarker5000bpMarker0次12次12次30次30次PCR應(yīng)用-親子鑒定實(shí)驗(yàn)13DNA片段的PCR擴(kuò)增主要內(nèi)容1PCR實(shí)驗(yàn)條件2PCR實(shí)驗(yàn)操作3PCR實(shí)驗(yàn)原理4瓊脂糖凝膠電泳5PCR的應(yīng)用THANKS!!Manytraditionalartsarelosingnowadays,becausesomeofthemhavebeenrep