實驗13 DNA片段的PCR擴增課件

DNA片段的PCR擴增浙江省麗水中學李成惠實驗13《生物學·選修1》浙科版中央電視臺綜合頻道大型公益尋人行動《等著我》是全國首檔國家力量全媒體大型公益尋人節(jié)目，也是中央電視臺2014年重磅推出的全新公益欄目。DNA的體內(nèi)復制和體外復制體內(nèi)DNA復制體外DNA復制體內(nèi)DNA復制體外DNA復制

模板DNA4種dNTPTaq聚合酶（耐高溫）引物Ⅰ，引物Ⅱ（DNA）模板原料酶引物親代DNA4種脫氧核苷酸（dNTP）解旋酶,DNA聚合酶等

RNA原則堿基互補配對原則堿基互補配對原則PCR-聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction）

是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復制。PCR儀PCR實驗操作1.每組取81μL已配好的預混液（在標有TaqDNA聚合酶的離心管中）加入到1個0.5ml離心管內(nèi)，然后按下表依次加入相關(guān)液體得到反應液。2.每組取20μL剛配好的反應液（0.5ml的離心管中）加入到1個0.2ml離心管內(nèi)，加入15μL石蠟封閉體系3.將離心管放入全自動基因擴增儀中，

按下面程序設定參數(shù)，進行PCR擴增實驗反應試劑用量dNTPmixture4μL引物I5μL引物II5μL模板DNA5μL循環(huán)過程溫度時間循環(huán)次數(shù)預變性95℃30s變性95℃20s0次或12次或30次退火52℃20s延伸72℃20s保溫72℃30s總計0s或780s或1860s問題2經(jīng)12次復制后可得到多少種分子量不同的DNA片段？其中哪種類型的DNA片段含量最多？問題1復制幾次后可得到只含有目的基因的DNA片段？活動：繪制PCR擴增目的基因模式圖目的基因活動：繪制PCR擴增目的基因模式圖目的基因12次循環(huán)后第一次復制第二次復制第三次復制復制三次后出現(xiàn)只含有目的基因的DNA片段30次循環(huán)后活動：繪制PCR擴增目的基因模式圖問題3擴增獲得的這些DNA片段，用怎樣的方法來檢測或分離目的基因呢？問題2經(jīng)12次復制后可得到多少種分子量不同的DNA片段？其中哪種類型的DNA片段含量最多？問題1復制幾次后可得到只含有目的基因的DNA片段？活動：繪制PCR擴增目的基因模式圖目的基因瓊脂糖凝膠電泳實驗操作1.溶膠2.制膠瓊脂糖凝膠電泳實驗操作3.加樣瓊脂糖凝膠電泳實驗操作12次循環(huán)組30次循環(huán)組4.電泳瓊脂糖凝膠電泳實驗操作5.觀察瓊脂糖凝膠電泳實驗操作DNA圖譜觀察儀瓊脂糖凝膠電泳實驗操作瓊脂糖凝膠電泳實驗原理：

1.DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。2.4SRedPlus核酸染色劑能與DNA靜電結(jié)合。4SRedPlus在紫外光

下可獲得最佳激發(fā)，在DNA圖譜觀察儀下可看到明顯的DNA條帶。1溶膠2制膠3加樣4電泳瓊脂糖凝膠電泳實驗操作5觀察瓊脂糖凝膠電泳實驗操作6.分析與討論0次12次12次30次30次2000bpMarker5000bpMarker0次12次12次30次30次PCR應用-親子鑒定實驗13DNA片段的PCR擴增主要內(nèi)容1PCR實驗條件2PCR實驗操作3PCR實驗原理4瓊脂糖凝膠電泳5PCR的應用THANKS!!Manytraditionalartsarelosingnowadays,becausesomeofthemhavebeenrep