方法學(xué)評價(jià)教材

方法學(xué)評價(jià)臨床生化教研室掌握內(nèi)容：

1.方法學(xué)評價(jià)概念及方法選擇要求

2.方法學(xué)評價(jià)的主要試驗(yàn)及用途

3.溯源性及實(shí)驗(yàn)方法、參考物的分級

熟悉內(nèi)容：

1.溯源鏈及校準(zhǔn)層次的意義

2.質(zhì)量目標(biāo)及其設(shè)定方法了解內(nèi)容：

1.方法學(xué)常用的統(tǒng)計(jì)學(xué)概念基本概念復(fù)習(xí)1.平均數(shù)（average）：又稱均值，是一種用于描述數(shù)值變量集中趨勢或平均水平的指標(biāo)。用X表示。2.標(biāo)準(zhǔn)差（standarddeviation）：是描述一組變量離散分布的統(tǒng)計(jì)量。是所有變量對于均數(shù)的離散程度的指標(biāo)。用S表示。3.方差（variance）：其大小反映一組資料的離散趨勢大小，用S2表示。4.變異系數(shù)（coefficientofvariation，CV）：是標(biāo)準(zhǔn)差和平均值之比的百分?jǐn)?shù)。是相對標(biāo)準(zhǔn)差的一種表示方法。5.正態(tài)分布（normaldistribution）：是變量分布的一種常見形式，正態(tài)分布曲線是以均數(shù)為中心，左右完全對稱的鐘形曲線，它有兩個(gè)參數(shù)：總體均數(shù)μ和總體標(biāo)準(zhǔn)差σ，一般用N(μ，σ2)表示其函數(shù)。6.第一類錯(cuò)誤（typeⅠerror）：又稱Ⅰ型錯(cuò)誤，即拒絕了實(shí)際上成立的H0，為“棄真”的錯(cuò)誤，其概率通常用α表示。7.第二類錯(cuò)誤（typeⅡerror）：又稱Ⅱ型錯(cuò)誤，不拒絕實(shí)際上不成立的H0，為“存?zhèn)巍钡腻e(cuò)誤，其概率通常用β表示。8.直線回歸分析(linearregression)：是一種處理兩個(gè)變量之間關(guān)系的統(tǒng)計(jì)方法。方程為：Y=a+bX，其中X為自變量，Y為因變量。a為回歸直線的截踞，b為回歸直線斜率。9．靈敏度(sensitivity)：是指檢測信號的變化量（Δy）與被測物變化量(Δx)的比值?？梢苑从硟x器、試劑對樣本濃度變化的反應(yīng)能力。S=Δy/Δx10.基質(zhì)效應(yīng)（matrixeffect）：被測量以外的某種樣品特性對被測量的值的影響。11.準(zhǔn)確度（accuracy）：表示測量結(jié)果與真值的一致程度。12.精密度（precision）：表示測量結(jié)果中的隨機(jī)誤差大小的程度，即指一定條件下進(jìn)行多次測定時(shí)，所得結(jié)果之間的符合程度。13.系統(tǒng)誤差（systematicerror）：指在重復(fù)條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差，即有一定大小和方向的誤差。14.隨機(jī)誤差（randomerror）：是指測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之差。15.金標(biāo)準(zhǔn)（goldstandard）：是指被公認(rèn)的診斷疾病的最可靠方法，金標(biāo)準(zhǔn)能正確區(qū)分受試者患病與否。

臨床生化檢測方法的選擇和評價(jià)，是臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量控制的重要基礎(chǔ)工作。當(dāng)建立一個(gè)新的方法，或引進(jìn)新的方法、都應(yīng)對它們的技術(shù)性能作出評價(jià)，以便科學(xué)的選擇和應(yīng)用。第一節(jié)臨床生化檢測方法的選擇一檢驗(yàn)方法和標(biāo)準(zhǔn)品的分級（一）方法的分級

臨床生化檢驗(yàn)方法根據(jù)其準(zhǔn)確度與精密度的不同可以分為決定性方法、參考方法、常規(guī)方法等三級。

1．決定性方法（definitivemethod）是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。用于發(fā)展及評價(jià)參考方法和一級標(biāo)準(zhǔn)品。

2．參考方法（referencemethod）是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機(jī)誤差相比可以忽略不計(jì)，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。這類方法在條件許可的實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)經(jīng)常使用。用于評價(jià)常規(guī)方法和試劑盒，鑒定二級標(biāo)準(zhǔn)品。

3．常規(guī)方法（routinemethod）指性能指標(biāo)符合臨床或其他目的的需要，有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟(jì)實(shí)用。這類方法經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后可稱為推薦方法（recommendedmethod），推薦方法應(yīng)具有足夠的實(shí)驗(yàn)證據(jù)三級方法的相互關(guān)系常規(guī)方法參考方法決定性方法準(zhǔn)確度增加應(yīng)用范圍增加（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物）的定義為：一類具有一種或多種成分、且含量均勻確定的物質(zhì)。

；被用于校正儀器或用于評價(jià)一種測定方法的物質(zhì)，并將其分成三級。

（二）標(biāo)準(zhǔn)品的分級1．一級標(biāo)準(zhǔn)品（原級參考物，primaryreferencematerial

）是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書；用于校正決定性方法，評價(jià)及校正參考方法以及為二級標(biāo)準(zhǔn)品定值。2．二級標(biāo)準(zhǔn)品（次級參考物，secondaryreferencematerial

）包括用于常規(guī)分析的標(biāo)準(zhǔn)液。這類標(biāo)準(zhǔn)品可由實(shí)驗(yàn)室自已配制或?yàn)樯唐?，它的示值必須用一級?biāo)準(zhǔn)品和參考方法并由訓(xùn)練有素的，能熟練掌握參考方法的操作者確定；主要用于常規(guī)方法的評價(jià)或?yàn)榭刂莆锒ㄖ岛统Ｒ?guī)測定的結(jié)果計(jì)算。3．校準(zhǔn)品（calibrator）用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測定得到校準(zhǔn)品，用于常規(guī)測定中的標(biāo)準(zhǔn)4.控制物（controlmaterial）具有與檢測過程相適應(yīng)的特性，其成分及基質(zhì)與檢測樣本相同或相似，且均勻、穩(wěn)定。用于質(zhì)量控制，控制患者樣本的測定誤差各級實(shí)驗(yàn)方法與參考物的相互關(guān)系決定性方法用途：評價(jià)參考方法及為一級參考物定值一級參考物用途：發(fā)展和評價(jià)參考方法，校正決定性方法和參考方法，產(chǎn)生二級參考物參考方法用途：為二級參考物及控制物定值，評價(jià)常規(guī)方法（標(biāo)準(zhǔn)化、偏差、干擾因素）

二級參考物用途：常規(guī)方法的工作標(biāo)準(zhǔn)及為控制物定值臨床生化檢測項(xiàng)目方法表項(xiàng)目決定性方法參考方法常規(guī)方法鈣IDMS原子吸收分光光度法鄰甲酚酞絡(luò)合酮法，MTB法鎂IDMS原子吸收分光光度法MTB法葡萄糖IDMS己糖激酶法葡萄糖氧化酶法尿素IDMS尿素酶法脲酶波氏法肌酐總蛋白IDMS——離子交換法凱氏定氮法肌酐氨酰基水解酶法雙縮脲法二、檢測方法的選擇在選擇實(shí)驗(yàn)室分析方法時(shí)，應(yīng)采用滿足客戶需要并適用于所進(jìn)行的方法。應(yīng)優(yōu)先使用以國際、區(qū)域或國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法。當(dāng)客戶未指定所用方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇國際、區(qū)域或國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的，或由知名的技術(shù)組織或有關(guān)科學(xué)書籍和期刊公布的，或由設(shè)備制造商指定的方法。（一）分析方法的選擇我國實(shí)驗(yàn)室中使用的分析儀器和試劑，應(yīng)具有國家藥品監(jiān)督管理局核發(fā)的相應(yīng)文號。實(shí)驗(yàn)室制定的或采用的方法如能滿足實(shí)驗(yàn)室的預(yù)期用途并經(jīng)過驗(yàn)證，也可以使用。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用自己制定的檢測方法的過程應(yīng)是有計(jì)劃的活動(dòng)，應(yīng)指定足夠的、有資格的人員進(jìn)行。接受客戶委托又必須使用標(biāo)準(zhǔn)方法中未包含的方法時(shí)，應(yīng)征得客戶的同意，所制定的方法在使用前應(yīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)拇_認(rèn)。（二）方法的確認(rèn)確認(rèn)是通過核查并提供客觀證據(jù)，以證實(shí)某一特性預(yù)期用途的特殊要求得到滿足。實(shí)驗(yàn)室在使用非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室自己設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，應(yīng)對方法進(jìn)行確認(rèn)，以證實(shí)該方法適用于預(yù)期的用途。確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，如：方法的精密度、線性分析范圍、與參考方法的比較、結(jié)果的不確定度、檢出限、抗干擾能力滿足預(yù)定用途或應(yīng)用領(lǐng)域的需要。（三）常規(guī)方法選擇的原則（一）適用性微量快速方法簡便安全可靠成本低廉（二）可靠性較高精密度、準(zhǔn)確度較好檢測范圍三、方法選擇的步驟1.提出要求2.獲取資料3.選定候選方法4.候選方法的初步試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍和重復(fù)性；重復(fù)試驗(yàn)——精密度；對比試驗(yàn)——準(zhǔn)確度；評價(jià)臨床方法的文件核準(zhǔn)（approved），編號為A：核準(zhǔn)文件是修改后的最終文件。提議（proposed），此類文件編號為P：“提議文件”的內(nèi)容通常要接受廣泛、細(xì)致、全面的評論；暫定（tentative）文件，編號為T。暫定文件還需要進(jìn)行特定的評價(jià)或需要收集數(shù)據(jù)，以保證其應(yīng)用；還有一類委員會報(bào)告，則是尚未通過一致化過程的文件，編號為R。美國的國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）多年來一直致力于制定一系列評價(jià)臨床方法的文件。NCCLS是一個(gè)全球性、多學(xué)科、非營利性的標(biāo)準(zhǔn)化和教育性的團(tuán)體，旨在促進(jìn)醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程和應(yīng)用。它在發(fā)展相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)和指南時(shí)采取了特有的一致化過程（consensusprocess）。NCCLS的自愿一致化過程是一個(gè)建立正式標(biāo)準(zhǔn)的過程，包括：方案的認(rèn)可；建立和公開對有關(guān)文件的評論；根據(jù)使用者的意見修改文件。方法學(xué)評價(jià)文件（1）EP5-A：臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價(jià)核準(zhǔn)指南（EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices;ApprovedGuideline）。用于臨床化學(xué)設(shè)備進(jìn)行精密度評價(jià)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及如何與生產(chǎn)廠聲明的精密度進(jìn)行比較。EP6-P2：定量分析方法的線性評價(jià)：統(tǒng)計(jì)方法提議指南第二版（EvaluationoftheLinearityofQuantitativeAnalyticalMethods:AStatisticalApproach;ProposedGuidelineSecondEdition），用于在評價(jià)方法過程中檢查檢測方法的線性，也可作為常規(guī)質(zhì)量保證的一部分，進(jìn)行線性檢查鏈及驗(yàn)證廠家聲明的線性范圍。方法學(xué)評價(jià)文件（2）EP7-P：臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾提議指南（InterferenceTestinginClinicalChemistry;ProposedGuideline），提供背景信息和鑒定程序，用于干擾物對檢測結(jié)果影響的定性。EP9-A：用病人標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評估核準(zhǔn)指南（MethodComparisonandBiasUsingPatientSamples;ApprovedGuideline），主要用于檢測兩種臨床方法或設(shè)備間的偏倚，和使用病人標(biāo)本進(jìn)行方法比較的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)分析。方法學(xué)評價(jià)文件（3）EP10-A：定量實(shí)驗(yàn)室方法的初步評價(jià)核準(zhǔn)指南（PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMethods;ApprovedGuideline），提供了用于分析方法和設(shè)備操作的初步評價(jià)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析。EP11-P：用于體外診斷檢測說明的統(tǒng)一描述提議指南（UniformDescriptionofClaimsForInVitroDiagnosticTests;ProposedGuideline）。方法學(xué)評價(jià)文件（4）EP12-P：用于定性實(shí)驗(yàn)評價(jià)的用戶協(xié)議提議指南（UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;ProposedGuideline）。EP13-R：實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)-標(biāo)準(zhǔn)差報(bào)告（LaboratoryStatistics–StandardDeviation;AReport）。方法學(xué)評價(jià)文件（5）EP14-A：基質(zhì)效應(yīng)的評價(jià)核準(zhǔn)指南(EvaluationofMatrixEffects;ApprovedGuideline)。EP15-A：精密度和準(zhǔn)確度性能的應(yīng)用核準(zhǔn)指南（UserDemonstrationofPerformanceforPrecisionandAccuracy;ApprovedGuideline）。方法學(xué)評價(jià)文件（6）EP17-P：檢測單位使用的質(zhì)量管理提議指南（QualityManagementforUnit–UseTesting;ProposedGuideline）。EP21-P（NEW）：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的評估提議指南（EstimationofTotalAnalyticalErrorforClinicalLaboratoryMethods;ProposedGuideline）。第二節(jié)臨床生化檢測方法的評價(jià)

和性能判斷方法學(xué)評價(jià)（evaluationofmethodology）通過實(shí)驗(yàn)途徑測定分析方法的技術(shù)性能，并評價(jià)其是否能接受。

評價(jià)實(shí)驗(yàn)的過程就是對誤差的測定。

一、方法學(xué)評價(jià)的意義和內(nèi)容主要的方法技術(shù)性能指標(biāo)：

準(zhǔn)確度(accuracy)

靈敏度(sensitivity)

特異度(specificity)

分析測量范圍(analyticalmeasurerange,AMR)評價(jià)實(shí)驗(yàn)的過程就是對誤差的測定。

確定方法的質(zhì)量目標(biāo)選定及進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕沂痉治稣`差類型的實(shí)驗(yàn)收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析判斷方法的可接受性二、方法學(xué)評價(jià)的基本步驟三、誤差的分類和表示1.系統(tǒng)誤差（SE）定義：指測定值與真值存在的同一傾向的偏差。系統(tǒng)誤差或正或負(fù)，即具有單向性，一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測定中重復(fù)出現(xiàn)。三、誤差的分類和表示2.系統(tǒng)誤差分類恒定系統(tǒng)誤差（CE）指測定值與真值之間存在恒定的誤差，其大小與干擾物濃度相關(guān)，而與被測物濃度無關(guān)。比例系統(tǒng)誤差（PE）誤差大小與被測物濃度成正比。三、誤差的分類和表示3.隨機(jī)誤差（RE）定義：多次重復(fù)測定某一物質(zhì)時(shí)出現(xiàn)的誤差，誤差無一定的大小和方向，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布。誤差類型示意圖比較方法結(jié)果試驗(yàn)方法結(jié)果比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差隨機(jī)誤差揭示誤差類型的實(shí)驗(yàn)

誤差類別實(shí)驗(yàn)隨機(jī)誤差（RE）重復(fù)性比例誤差（PE）回收恒定誤差（CE）干擾系統(tǒng)誤差（SE）方法對比總誤差（TE）重復(fù)性和方法對比四、方法評價(jià)方案（一）精密度評價(jià)

1．目的要求精密度是指在一定條件下多次重復(fù)測定得到的一系列單次測定值之間的接近程度，是表示測定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。反映精密度好壞的指標(biāo)是變異系數(shù)CV，CV越小精密度越好，反之則差，故有人稱其為不精密度。變異系數(shù)CV包括：批內(nèi)、批間、日間和總CV，其中總CV最重要，它代表整個(gè)分析體系的可重復(fù)程度。重復(fù)性試驗(yàn)：是將同一材料分成數(shù)份試驗(yàn)樣本，進(jìn)行多次分析測定（一般20次），其目的就是評價(jià)或驗(yàn)證試驗(yàn)方法的隨機(jī)誤差或不精密度。用以描述與時(shí)間相關(guān)的不精密度的實(shí)驗(yàn)包括：批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)、日內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)和日間重復(fù)性試驗(yàn)等。

批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)：相同條件下對同一樣本在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行多次重復(fù)測定計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)（CV%<5%）。日內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)：在一天內(nèi)對一個(gè)或多個(gè)樣本進(jìn)行重復(fù)測定，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。日間重復(fù)性試驗(yàn)：將樣品每天一次隨機(jī)插入常規(guī)標(biāo)本中檢測，連續(xù)20工作日計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。2．評價(jià)前的準(zhǔn)備①對于評價(jià)對象和評價(jià)方案均應(yīng)熟悉。②實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)是同批次配制，或同一批號的商品試劑盒和參考物，儀器也應(yīng)處于良好的工作狀態(tài)③實(shí)驗(yàn)用標(biāo)本一般選擇2個(gè)（亦可更多），一個(gè)在正常范圍或在醫(yī)學(xué)決定水平附近，另一個(gè)為異常值，實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的介質(zhì)應(yīng)與臨床標(biāo)本一致。批內(nèi)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)舉例:GOD-POD法測血糖【原理】批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)是指在相同條件下對同一標(biāo)本在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行m輪，每輪n次重復(fù)測定，以獲得批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)的試驗(yàn)方法。其結(jié)果能反映各次測定結(jié)果相互接近的程度，用于客觀評價(jià)GOD-POD法測血糖隨機(jī)誤差的大小。

【操作步驟】

將血清標(biāo)本用GOD-POD法作5輪，每輪4次血糖測定，即可獲得20個(gè)測定數(shù)據(jù)。

【結(jié)果計(jì)算】1．檢驗(yàn)20次測定數(shù)據(jù)中的離群值（用Grubbs檢驗(yàn)準(zhǔn)則，檢驗(yàn)離群值）2．按照批內(nèi)精密度的計(jì)算公式計(jì)算5輪每輪4次測定值的平均數(shù)()、標(biāo)準(zhǔn)差(S)和變異系數(shù)(CV%)。

【評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)】

要求試驗(yàn)求得的血清葡萄糖GOD-POD測定法的CV值＜5%。

（二）.準(zhǔn)確度的評價(jià)：準(zhǔn)確度（accuracy）：是指測定值與真值接近的程度。真值通常難以得到，實(shí)際使用相對真值。偏差（bias）：重復(fù)測定均值與真值之差。偏差系數(shù)（coefficientofbias）：=|真值-X|×100/真值?；厥赵囼?yàn)、干擾試驗(yàn)和方法比較試驗(yàn)是評價(jià)準(zhǔn)確度的常用試驗(yàn)。回收試驗(yàn)回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。用于測定實(shí)驗(yàn)方法的比例系統(tǒng)誤差。這種誤差常隨分析物的濃度增加而增加，常因樣品中其它物質(zhì)與分析物競爭分析試劑并與之發(fā)生反應(yīng)而引起。

【原理】回收試驗(yàn)是發(fā)現(xiàn)分析方法比例系統(tǒng)誤差的有效評價(jià)方法。通過測定GOD-POD法測血糖的回收率，能較確切地判斷該分析方法比例系統(tǒng)誤差的有無或大小，可以對方法的準(zhǔn)確性作出可靠評價(jià)。

【操作步驟】1．樣品制備

基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml+0.1ml生理鹽水。

回收樣品Ⅰ：血清0.9ml＋0.01ml80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液＋0.09ml生理鹽水。

回收樣品Ⅱ：血清0.9ml＋0.06ml80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液＋0.04ml生理鹽水。

回收樣品Ⅲ：血清0.9ml＋0.09ml80mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液＋0.01生理鹽水。

2．血糖濃度測定按GOD-POD法測定各制備樣品的血糖濃度，每份樣品作雙份檢測，結(jié)果取平均值?！窘Y(jié)果計(jì)算】【結(jié)果判斷】一般檢驗(yàn)方法要求回收率在95%-105%之間，最為理想的回收率應(yīng)是100%。

干擾試驗(yàn)：

干擾試驗(yàn)是通過定量檢測樣本中的物質(zhì)所引起試驗(yàn)方法的系統(tǒng)誤差，以評估方法的準(zhǔn)確度。由干擾物質(zhì)引起的誤差通常是很恒定的系統(tǒng)誤差，與分析物的濃度無關(guān)。

【原理】干擾試驗(yàn)是測定特異性和干擾二者引起的誤差。在具體方法學(xué)評價(jià)實(shí)驗(yàn)中，首先要確定被試可疑物質(zhì)是否引起誤差；若能引起誤差，再進(jìn)一步探討其誤差的來源是因方法特異性差還是干擾若加入的物質(zhì)本身和分析試劑反應(yīng)并產(chǎn)生讀數(shù)，這是特異性差若加入物質(zhì)并不與分析試劑反應(yīng)，但它改變了分析物和分析試劑間的反應(yīng)，這是干擾。干擾與特異性差的區(qū)別：

1.如果加入物和樣品中的分析物類似也同分析試劑發(fā)生交叉反應(yīng)產(chǎn)生讀數(shù)，影響了分析物測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，稱為特異性差，如鄰甲苯胺法測定葡萄糖時(shí)，甘露糖和半乳糖與試劑發(fā)生的顯色反應(yīng)。

2.若加入物不與分析試劑發(fā)生反應(yīng)，但它改變了分析物與分析試劑間的反應(yīng)就是干擾。如葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖時(shí)，尿酸可以與葡萄糖氧化酶反應(yīng)生成的過氧化氫發(fā)生反應(yīng)，使部分過氧化氫不能參與后續(xù)過氧化物酶的偶聯(lián)反應(yīng)，降低顯色強(qiáng)度，產(chǎn)生負(fù)的測定誤差，因此是尿酸對該反應(yīng)產(chǎn)生了干擾不是尿酸被測定。

【操作步驟】1．樣品制備

基礎(chǔ)樣品：血清0.9ml＋生理鹽水0.1ml。

干擾樣品Ⅰ：血清0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.05ml+生理鹽水0.05ml。

干擾樣品Ⅱ：血清0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml。

尿酸樣品：生理鹽水0.9ml＋9.0mmol/L尿酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml。

2．血糖值測定取各樣品按GOD-POD法操作。

【結(jié)果計(jì)算】【結(jié)果判斷】Bias＜允許誤差(EA)的臨界值，表明由干擾物引起的偏差對臨床診斷和治療不產(chǎn)生不良影響，可被接受。血糖2.8、6.7、8.9mmol/L時(shí)的EA為0.56mmol/L。

（三）方法比對：是將試驗(yàn)方法與比較方法進(jìn)行比較，用于評價(jià)方法的恒定和比例系統(tǒng)誤差?；静襟E是用試驗(yàn)方法和比較方法同時(shí)測定一組患者的樣本，分析二者測定結(jié)果的差異，可得到恒定和比例系統(tǒng)誤差的信息。通常樣本數(shù)量不低于40例，濃度盡可能涵蓋整個(gè)“可報(bào)告范圍”，每個(gè)樣品最好分批測定2次，每份樣品最好在2h內(nèi)完成試驗(yàn)和比較方法的測定。每天8個(gè)樣本在不同的分析批測定，連續(xù)測定5天。1.作圖：作圖能直觀反映數(shù)據(jù)的分布特點(diǎn)。左：橫坐標(biāo)（x）為比較方法的結(jié)果，縱坐標(biāo)（y）為兩方法之間的差異，理想情況是數(shù)據(jù)圍繞在零線上下均勻分布。右：橫坐標(biāo)（x）為比較方法的結(jié)果，縱坐標(biāo)（y）為試驗(yàn)方法結(jié)果?？娠@示出兩種方法的相關(guān)性。2.統(tǒng)計(jì)分析：統(tǒng)計(jì)分析可提供兩種方法間系統(tǒng)誤差的大小及系統(tǒng)誤差的類型的客觀數(shù)據(jù)。常用統(tǒng)計(jì)包括：相關(guān)回歸分析和配對t檢驗(yàn)等。1）：相關(guān)回歸分析：Y=a+bX，a為回歸線截踞，反映恒定系統(tǒng)誤差大小。b為回歸線斜率，反映比例系統(tǒng)誤差的大小，相關(guān)系數(shù)r可幫助判斷測定的濃度范圍對于斜率和截踞的評估是否合適，而不能用于判斷方法是否可接受。2）：配對t檢驗(yàn)：對與比對分析物濃度范圍窄的項(xiàng)目，最好采用配對t檢驗(yàn)。3）：性能判斷：任何方法都存在不同程度的系統(tǒng)誤差(SE)和隨機(jī)誤差(RE)。TE=SE+RE不同項(xiàng)目可總允許誤差是不同的，可查閱美國臨床實(shí)驗(yàn)室修正案（CLIA88）規(guī)定的能力驗(yàn)證（proficiencytesting,PT）可接受標(biāo)準(zhǔn)。（四）、線性評價(jià)1．目的要求線性范圍是分析方法的一個(gè)重要技術(shù)指標(biāo)，它能判斷對某一分析方法測得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。常規(guī)方法應(yīng)具有較寬的分析范圍，一般應(yīng)覆蓋臨床可能出現(xiàn)的高值。

2．評價(jià)前準(zhǔn)備①熟悉儀器、評價(jià)方案和試劑。②評價(jià)標(biāo)本的介質(zhì)應(yīng)與實(shí)際測定的標(biāo)本相一致，理想的標(biāo)本是病人的低值或高值標(biāo)本，這往往不易收集到，亦可用病人的混合標(biāo)本加入分析物作為高值標(biāo)本，用正常人標(biāo)本作為低值標(biāo)本。③濃度范圍應(yīng)以分析項(xiàng)目的線性要求為準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本

線性實(shí)驗(yàn)應(yīng)使用與病人標(biāo)本相似的標(biāo)本或注明標(biāo)本的基質(zhì)類型，最少使用4個(gè)濃度水平，推薦5個(gè)水平。高值標(biāo)本應(yīng)高于線性上限30％，低值標(biāo)本應(yīng)低于線性低限。線性實(shí)驗(yàn)可使用的標(biāo)本混合病人血清（理想的標(biāo)本基質(zhì)）；加入待測物的混合人血清，在沒有干擾物存在時(shí)不需高純度的加入品；經(jīng)過、特殊處理的混合人血清，用于降低分析物濃度，如：透析、熱處理、層析；對鹽水透析過的混合人血清，在線性實(shí)驗(yàn)中使用此類標(biāo)本可掩蓋不同的基質(zhì)效應(yīng)；商品質(zhì)控品或校準(zhǔn)品，此類標(biāo)本由于不是正常的生理形式，可掩蓋實(shí)際的線性結(jié)果；水溶液，一般無基質(zhì)效應(yīng)。實(shí)際工作中，可準(zhǔn)備如下血清：低濃度X1混合血清；高濃度X5混合血清；血清X2：3份“X1”+1份“X5”；血清X3：2份“X1”+2份“X5”；血清X4：1份“X1”+3份“X5”。濃度由低到高順序：X1,X2,X3,X4,X5配制溶液濃度的計(jì)算X為標(biāo)本濃度，V為標(biāo)本體積結(jié)果記錄如下表：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品濃度測定次數(shù)X1Y1-1Y1-2Y1-3Y1-4X2Y2-1Y2-2Y2-3Y2-4X3Y3-1Y3-2Y3-3Y3-4X4Y4-1Y4-2Y4-3Y4-4X5Y5-1Y5-2Y5-3Y5-4X1：低濃度混合血清X5：高濃度混合血清X2：3份X1+1份X5X3：2份X1+2份X5X4：1份X1+3份X5每個(gè)樣品測定2~4次，在一個(gè)工作日內(nèi)完成。數(shù)據(jù)的處理以分析物濃度為X軸，反應(yīng)值或儀器輸出值（均值）為Y軸，繪制X-Y線性圖（Y=aX+b）。目測線性和進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，判斷是否符合要求。何為方法學(xué)評價(jià)，其基本步驟是什么？方法學(xué)評價(jià)指通過實(shí)驗(yàn)途徑測定分析方法的技術(shù)性能，并評價(jià)其是否能接受。評價(jià)實(shí)驗(yàn)的過程就是對誤差的測定?；静襟E：確定方法的質(zhì)量目標(biāo)、選定及進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕沂痉治稣`差類型的實(shí)驗(yàn)、收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、判斷方法的可接受性。方法學(xué)評價(jià)試驗(yàn)的原理及用途（1）重復(fù)性試驗(yàn)：是將同一材料分成數(shù)份試驗(yàn)樣本，進(jìn)行多次分析測定（一般20次），其目的就是評價(jià)或驗(yàn)證試驗(yàn)方法的隨機(jī)誤差。（2）回收試驗(yàn)即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。用于測定實(shí)驗(yàn)方法的比例系統(tǒng)誤差。（3）干擾試驗(yàn)是通過定量檢測樣本中的物質(zhì)所引起試驗(yàn)方法的恒定系統(tǒng)誤差。（4）方法比對試驗(yàn)是將試驗(yàn)方法與比較方法進(jìn)行比較，用于評價(jià)方法的恒定和比例系統(tǒng)誤差。（5）線性范圍實(shí)驗(yàn)?zāi)芘袛鄬δ骋环治龇椒y得的濃度或活性值與設(shè)定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。常規(guī)方法應(yīng)具有較寬的分析范圍，一般應(yīng)覆蓋臨床可能出現(xiàn)的高值。五、靈敏度、檢測限和生物檢測限靈敏度：是指檢測信號的變化量（Δy）與被測物變化量(Δx)的比值，又稱敏感度。可以反映儀器、試劑對樣本濃度變化的反應(yīng)能力。S=Δy/Δx

靈敏度反映儀器、試劑對樣本濃度變化的反應(yīng)能力。如吸光度A與樣本濃度C的關(guān)系為一條A-C曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）ΔA/ΔC即為反應(yīng)的靈敏度。靈敏度的高低應(yīng)按照其樣本的醫(yī)學(xué)決定水平來選擇合適的化學(xué)反應(yīng)。檢測限：是指在給定的置信水平上能夠檢出被測物的最小濃度或最小質(zhì)量。對于吸收光譜分析，其與空白信號相區(qū)別的最小信號YL由下面公式計(jì)算：YL=Yb+ksb

Yb為空白信號的平均值，sb為空白信號的標(biāo)準(zhǔn)差，k為置信水平確定的系數(shù)。國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IUPAC)建議k取3（99.7%）能產(chǎn)生凈響應(yīng)信號為YL-Yb的被測物濃度就是方法對該物質(zhì)的檢測限（D）

(S為靈敏度)D=YL—Yb/S=3sb/S

檢測限的單位為濃度單位生物檢測限：大于檢測限的響應(yīng)信號說明樣本內(nèi)含有被測物，但方法還不能正確報(bào)告定量結(jié)果。某濃度的樣本單次檢測所具有的最小響應(yīng)信號，剛大于空白檢測限響應(yīng)信號，其濃度稱為生物檢測限。檢測限與靈敏度的關(guān)系為，方法靈敏度越高，檢測限就越低，檢測能力也就越強(qiáng)。IUPAC建議用檢測限而不用靈敏度來衡量分析方法的檢測能力。六、方法性能決定圖繪制準(zhǔn)確度和精密度是檢測系統(tǒng)的兩大最主要的性能指標(biāo)，二者結(jié)合就是總誤差（totalerror，TE），當(dāng)TE小于允許總誤差（allowabletotalerror，TEa）時(shí)，則檢測系統(tǒng)的性能合格，當(dāng)TE大于TEa時(shí)，則檢測系統(tǒng)的性能不可接受。目前，有三種計(jì)算誤差TE的方式（bias代表不準(zhǔn)確度，s或CV代表不精密度）：（1）TE=bias+2s<TEa；或：TE%=bias%+2CV%<TEa%（2）TE=bias+3s<TEa；或：TE%=bias%+3CV%<TEa%（3）TE=bias+4s<TEa；或：TE%=bias%+4CV%<TEa%應(yīng)用Westgard方法決定圖（method