耐缺氧檢驗方法

八、耐缺氧檢驗方法1常壓耐缺氧實驗1.1原理缺氧對機(jī)體是一種緊張性刺激，影響機(jī)體各種代謝，特別是影響機(jī)體的氧化供能，最終會導(dǎo)致機(jī)體的心、腦等主要器官缺氧供能不足而死亡。1.2材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、鈉石灰（或等量氫氧化鈉和碳酸鈣）。1.3實驗動物推薦用近交系成年小鼠，單一性別，18－22g，每組10－15只。1.4劑量分組及受試樣品給予時間實驗設(shè)三個劑量組和一個陰性對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，必要時設(shè)陽性對照組。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。1.5實驗步驟各劑量組經(jīng)口連續(xù)給予不同濃度受試樣品，對照組給予同等容量溶劑，于末次灌胃后1小時，將各組小鼠分別放入盛有5g鈉石灰的250mL磨口瓶內(nèi)（每瓶1只用凡士林封瓶口，蓋嚴(yán)，使之不漏氣，立即計時，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察小鼠因缺氧而死亡的時間。1.6統(tǒng)計方法及結(jié)果判定缺氧時間為計量數(shù)據(jù)，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計。受試樣品組與對照組比較，存活時間延長，并具有統(tǒng)計學(xué)意義，則判定該實驗結(jié)果陽性。1.7注意事項：1.7.1每個磨口瓶內(nèi)最好只放1只小鼠，以防互相干擾影響耐缺氧能力的測定。1.7.2磨口瓶一定要密閉封嚴(yán)，以防漏氣，否則會影響實驗結(jié)果。1.7.3磨口瓶必須等容量（誤差1mL實驗前先用水加以校正。1.7.4每批實驗動物的體重應(yīng)盡量保持一致。2亞硝酸鈉中毒存活實驗2.1原理亞硝酸鈉使正常二價鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)槿齼r鐵血紅蛋白，破壞血紅蛋白攜氧能力，造成組織缺氧死亡。2.2材料亞硝酸鈉、秒表、1mL注射器2.3實驗動物推薦用近交系成年小鼠，單一性別，18－20g，每組10－15只。2.4劑量分組2.5實驗步驟各劑量組經(jīng)口連續(xù)給予不同濃度受試樣品，對照組給予同等容量溶劑，于末次灌胃后1小時，各組動物按200－240mg/kgBW劑量腹腔注射亞硝酸鈉（注射量為0.1mL/10g立即計時，記錄動物存活時間。2.6統(tǒng)計方法及結(jié)果判定存活時間為計量數(shù)據(jù)，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計。受試樣品組與對照組比較，存活時間延長，并具有統(tǒng)計學(xué)意義，則判定該實驗結(jié)果陽性。3急性腦缺血性缺氧實驗3.1原理動物斷頭后，由于腦供血終止，在短時間內(nèi)腦中原有的血液和營養(yǎng)物質(zhì)尚能使腦功能維持短暫時間，顯示出有規(guī)律地張口喘氣，以喘氣時間為指標(biāo)，可觀察受試樣品對腦缺血性缺氧的保護(hù)作用，凡能使腦耗氧降低的受試樣品，均能延長動物喘氣時間。3.2材料剪刀、秒表3.3實驗動物3.4劑量分組3.5實驗步驟各劑量組經(jīng)口連續(xù)給予不同濃度受試樣品，對照組給予同等容量溶劑，于末次灌胃后1小時，各組動物自頸部逐只斷頭，立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間。3.6統(tǒng)計方法及結(jié)果判定喘氣停止時間為計量數(shù)據(jù)，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計。受試樣品組與對照組比較，喘氣時間延長，并具有統(tǒng)計學(xué)意義，則判定該實驗結(jié)果陽性。3.7結(jié)果判定常壓耐缺氧實驗、亞硝酸鈉中毒存活實驗、急性腦缺血性缺氧實驗三項實驗中任二項實驗結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有耐缺氧的