細胞形態(tài)觀察與顯微測量

實驗室規(guī)則

一、遵守實驗紀(jì)律，按時到達實驗室，不得遲到或早退。實驗中途因故需外出時應(yīng)向任課教師請假。二、進入實驗室之前要換好白大衣。三、保持實驗室安靜，不許在實驗室內(nèi)大聲喧嘩及隨意走動。四、必須嚴(yán)肅認真地進行實驗。實驗期間不得進行任何與實驗無關(guān)的活動。五、實驗室內(nèi)各組儀器及器材由各組自已使用，不得互相調(diào)換。要愛護儀器、標(biāo)本和設(shè)備。如遇儀器損壞或不靈，應(yīng)及時報告任課教師，以便修理或更換，不要自行亂修。損壞器材或設(shè)備者應(yīng)按有關(guān)規(guī)定進行賠償。六、注意節(jié)約實驗材料、藥品和水、電等。七、保持實驗室內(nèi)清潔整齊。實驗結(jié)束后，各組必須認真清理各自的實驗臺面，將器材清洗后點清數(shù)目，然后擺放整齊。班級值日生負責(zé)清掃室內(nèi)衛(wèi)生，關(guān)好水、電開關(guān)和門、窗等，經(jīng)教師允許后方可離開實驗室。八、動物尸體、紙片及實驗廢物應(yīng)放到指定地點，不得隨意亂丟。九、有不遵守上述要求者，任課老師將終止其實驗，并取消其當(dāng)堂實驗成績。常用手術(shù)器械及操作方法

1．解剖針：用于挑、刺等。常用來搗髓處死蟾蜍，持法如執(zhí)筆法。

2．解剖刀(即外科手術(shù)刀)：用于各種皮膚切口和組織切除等。持法有執(zhí)弓法與執(zhí)筆法兩種。前者用于較大力量切開較長距離的堅韌的組織，如大動物的皮膚切口等；后者則用于小力量的短距離切開，或分離皮膚和肌肉等。

3．大剪刀：用于剪毛、皮膚、皮下組織和肌肉等。持法如圖。

4．眼科剪刀：用于剪斷神經(jīng)、血管、筋膜等細軟組織。

5．眼科鑷子：用于提取神經(jīng)、血管和筋膜等細軟組織。

6．鈍頭鑷子：用于提取臟器、組織等。

7．有鉤鑷子：用于提取皮膚切口等。實驗一

動物細胞的基本形態(tài)觀察與顯微測量實驗?zāi)康闹苽洳煌毎呐R時制片觀察、了解細胞的基本形態(tài)學(xué)會使用測微尺測量紅細胞的大小學(xué)習(xí)搗碎法處死蟾蜍。實驗用品一、材料和標(biāo)本蟾蜍一只。二、器材和儀器配有目鏡測微尺的顯微鏡一臺、載片十張、蓋片三張、吸水紙、手術(shù)器材一套、解剖盤一個、鏡臺測微尺一個、小平皿一個、牙簽。三、試劑1％甲苯胺蘭、1％甲基蘭、Ringer氏液(兩棲類用)。實驗原理細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是很多細胞的共同特點，在分化程度較高的細胞更為明顯，這種合理性是生物漫長進化過程所形成的。例如：具有收縮機能的肌細胞伸展為細長形；具有感受刺激和傳導(dǎo)沖動機能的神經(jīng)細胞有長短不一的樹枝狀突起；游離的血細胞為圓形、橢圓形或圓餅形。不論細胞的形狀如何，細胞的結(jié)構(gòu)一般分為三大部分：細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核。但也有例外。例如：哺乳類紅細胞成熟時細胞核消失。實驗內(nèi)容

一、蟾蜍血涂片的制備與觀察1.搗髓法處死蟾蜍左手握住蟾蜍的身體和四肢，使其腹部貼著掌心，食指壓住蟾蜍頭部前端使其盡量腹屈。在頭與軀干之間可觸及一凹陷(即枕骨大孔所在處)，右手持解剖針直插入此凹陷約l～2mm，隨即將針尖轉(zhuǎn)向頭側(cè)插入顱腔搗毀腦組織。然后將解剖針抽回并轉(zhuǎn)向尾側(cè)刺入脊椎管內(nèi)搗毀其脊髓。如此直至其四肢松軟，呼吸消失為止。2.取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在載片上。將另一載片的一端呈45°角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載片上形成均勻的薄層。(圖l一1)。晾干。顯微鏡觀察可見蟾蜍紅細胞為橢球形，有核。白細胞數(shù)目少，為圓形。血涂片的制備蟾蜍血細胞二、蟾蜍肝臟壓片的制備與觀察剪開蟾蜍腹腔，取一小塊(約2～3mm3)肝放在平皿內(nèi)，用Ringer氏液洗凈，用鑷子輕壓將肝中的血擠出。然后放在載片上，另一載片放在組織上，垂直用力擠壓。用甲基蘭染色5min。顯微鏡下觀察可見肝細胞核染成蘭色，肝細胞緊密排列，擠成多角形。細胞核40×蟾蜍肝臟壓片三、制備蟾蜍脊髓壓片觀察脊髓前角運動神經(jīng)細胞取蟾蜍一只，破壞腦和脊髓，在口裂處剪去頭部，除去延腦，剪開椎管，可見乳白色脊髓，取下脊髓放在平皿內(nèi)，用Ringer氏液洗去血液后放在載片上，剪碎。將另一載片壓在脊髓碎塊上，用力擠壓。將上面的載片取下即可得到壓片。取壓片時要垂直臺起，切勿碾壓。在壓片上滴一滴甲苯胺蘭染液，染色10分鐘，蓋上蓋片，吸去多余染液。在顯微鏡下觀察，染色較深的小細胞是神經(jīng)膠質(zhì)細胞。染成蘭紫色的、大的、有多個突起的細胞是脊髓前角運動神經(jīng)細胞，胞體呈三角形或星形，中央有一個圓形細胞核，內(nèi)有一個核仁。40×蟾蜍脊髓前角運動神經(jīng)細胞神經(jīng)細胞神經(jīng)膠質(zhì)細胞四、蟾蜍骨骼肌細胞的剝離與觀察剪開蟾蜍腿部皮膚，剪下一小塊肌肉，放在載片上，用鑷子和解剖針剝離肌肉塊成為肌束，繼續(xù)剝離，可得到很細的肌纖維(肌細胞)。盡可能拉直肌纖維。在顯微鏡下觀察，肌細胞為細長形，可見折光不同的橫紋，每個肌細胞有多個核，分布于細胞的周邊。實驗內(nèi)容骨骼肌橫紋細胞核40×蟾蜍骨骼肌細胞骨骼肌橫紋細胞核40×蟾蜍骨骼肌細胞五、人口腔上皮細胞標(biāo)本的制備與觀察用牙簽刮取口腔上皮細胞均勻地涂在載片上(不可反復(fù)涂沫)，滴一滴甲苯胺蘭染液，染色5分鐘，蓋上蓋片，吸去多余染液。顯微鏡下觀察可見復(fù)蓋口腔表面的上皮細胞為扁平橢圓形，中央有橢圓形核，染成蘭色。

40×人口腔上皮細胞細胞核細胞質(zhì)細胞膜顯微測量測微尺的使用

測微尺分目鏡測微尺和鏡臺測微尺，兩尺配合使用。目鏡測微尺是一個放在目鏡像平面上的玻璃圓片。圓片中央刻有一條直線，此線被分為若干格，每格代表的長度隨不同物鏡的放大倍數(shù)而異。因此，用前必須測定。鏡臺測微尺是在一個載片中央封固的尺，長1毫米(1000μm)，被分為100格，每格長度是10微米。測量方法1．將鏡臺測微尺放在顯微鏡的載物臺上夾好，小心轉(zhuǎn)動目鏡測微尺和移動鏡臺測微尺使兩尺平行，記錄鏡臺測微尺若干格所對應(yīng)的目鏡測微尺的格數(shù)。2．公式：目尺每格長度（μm）=臺尺的若干格數(shù)×10對應(yīng)目尺的格數(shù)【作業(yè)】

一、分別求出使用低倍鏡(10X)，高倍鏡(40X)時目鏡測微尺每格代表的長度：低倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度=X10(μm)=μm高倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度=X10(μm)=μm二、分別繪制所觀察的6種細胞并注明基本結(jié)構(gòu)。三、計算蟾蜍紅細胞的核質(zhì)比例。計算細胞、細胞核體積的公式：圓形V=4/3πr3(r為半徑)

橢圓形V=4/3πab2(a、b為長、短半徑)

核質(zhì)比N／D=Vn／(Vc—Vn)(Vn為核的體積，Vc是細胞質(zhì)的體積)預(yù)習(xí)：細胞的生理活動觀察細胞生物學(xué)實驗繪圖方法與要求一、在仔細觀察的基礎(chǔ)上，選擇典型結(jié)構(gòu)進行描繪