DB13-T1384-10-2011飼料中20種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定

ICS65.120

B46

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T1384.10—2011

飼料中20種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定

Determinationof20kindsofsulfonamidesantibioticsresiduesinfeed

producinganimalorigin

DB13/T1384.10—2011

飼料中20種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中20種磺胺類(lèi)藥物殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺

胺甲基異噁唑、磺胺二甲異噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺－6－甲氧嘧啶、磺胺鄰二

甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺甲噻二唑、磺胺、磺胺喹噁

啉、磺胺氯噠酮?dú)埩袅康臋z驗(yàn)。

本標(biāo)準(zhǔn)各組分的定量限均為10.0μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3原理

樣品中的磺胺類(lèi)藥物經(jīng)乙腈和二氯甲烷依次提取，液液分配凈化后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，

外標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1甲醇：色譜純。

4.2乙腈：色譜純。

4.3二氯甲烷：分析純。

4.4正己烷：分析純。

4.5無(wú)水硫酸鈉：分析純。于650℃灼燒4h，冷卻后，貯存于具玻璃塞的干燥玻璃容器內(nèi)備用。

4.6乙酸：優(yōu)級(jí)純。

4.70.2％乙酸水溶液：移取0.2mL乙酸，加水定容至1L。

4.8樣品定容液：移取700mL0.2％乙酸水溶液，用甲醇定容至1L。

4.9磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基異噁唑、磺

胺二甲異噁唑、磺胺甲噻唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺－6－甲氧嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二

甲嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺胍、磺胺甲噻二唑、磺胺、磺胺喹噁啉、磺胺氯噠酮標(biāo)

準(zhǔn)物質(zhì)，純度≥99.0％。

4.10標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100mg/L）：準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的每種磺胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)

貯備溶液。-18℃保存，保存期為三個(gè)月。

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DB13/T1384.10—2011

5儀器和設(shè)備

5.1液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源。

5.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。

5.3均質(zhì)器。

5.4渦旋混合器

5.5振蕩器。

5.6高速離心機(jī)，5000r/min。

5.7氮?dú)獯蹈蓛x。

6測(cè)定步驟

6.1提取

稱(chēng)取5g均質(zhì)試樣（精確到0.01g）和10g經(jīng)灼燒無(wú)水硫酸鈉，于具蓋的聚丙烯離心管中，加入25mL

乙腈，用均質(zhì)器于18000r/min下均質(zhì)1min，5000r/min離心5min，吸取上清液轉(zhuǎn)至50mL容量瓶

中。用25mL二氯甲烷重復(fù)提取一次，振蕩20min，5000r/min離心5min，合并上清液并用二氯甲烷

定容到50mL。取10mL提取液室溫下氮?dú)獯蹈伞Ｓ?mL樣品定容液（4.9）渦旋溶解殘?jiān)?/p>

6.2凈化

上述殘?jiān)芙庖河?mL正己烷脫脂，5000r/min離心5min，去除上層正己烷層后，重復(fù)脫脂一

次。取下層溶液過(guò)0.2μm有機(jī)系濾膜，供液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

6.3測(cè)定

6.3.1色譜參考條件

色譜柱：C8柱，150mm×4.6mm（i.d.），5μm，或相當(dāng)者。

柱溫：室溫。

進(jìn)樣量：20μL。

流動(dòng)相：A相－甲醇，B相－0.2％乙酸水溶液。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

流速：0.2mL/min。

表1液相色譜梯度洗脫條件

時(shí)間（min）甲醇0.2％乙酸水溶液

0～510％90％

6～1530％70％

16～2080％20％

21～3030％70％

31～3510％90％

6.3.2質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）。

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掃描方式：正離子掃描。

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。

Q1，Q3均為單位分辨率（UNIT）。

定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、裂解電壓、碰撞能量見(jiàn)附錄A。

6.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取空白樣品按照6.1和6.2處理。用所得的樣品溶液將磺胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液逐級(jí)稀釋得到的濃度為

0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.2mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進(jìn)樣檢測(cè)，

以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

6.3.4定量測(cè)定

外標(biāo)法定量。待測(cè)樣液中各種磺胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)稀釋后再

進(jìn)樣分析。

6.3.5定性判定

在相同試驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物與同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間偏差在±2.5％之內(nèi)；且樣品

譜圖中各組分定性離子的相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較，若偏差不超過(guò)表2

規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。

表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度（％）＞50＞20～50＞10～20≤10

允許的相對(duì)偏差（％）±20±25±30±50

6.4空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。

7結(jié)果計(jì)算

按式（1）計(jì)算。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

c×A×v×K

X=…………………(1)

As×m

式中：

X──試樣中待測(cè)組分殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）。

c──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中磺胺類(lèi)藥物濃度，單位為毫克每升（mg/L）。

A──試樣溶液中磺胺類(lèi)藥物的峰面積。

As──標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中磺胺類(lèi)藥物的峰面積。

v──試樣定容體積，單位為毫升（mL）。

m──試樣稱(chēng)樣量，單位為克（g）。

K──稀釋倍數(shù)。

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DB13/T1384.10—2011

8準(zhǔn)確度

在添加濃度10.0μg/kg～40.0μg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在70%～120%之間。

9允許差

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的15％。

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AA

附錄A

（資料性附錄）

磺胺類(lèi)藥物的參考質(zhì)譜條件

表A.1磺胺類(lèi)藥物的參考質(zhì)譜條件

名稱(chēng)定性離子對(duì)m/z定量離子對(duì)m/z裂解電壓V碰撞能量V

281.0/156.312010

磺胺甲氧噠嗪281.0/156.3

281.0/215.412015

281.0/156.312010

磺胺對(duì)甲氧嘧啶281.0/156.3

281.0/215.412010

285.1/156.310015

磺胺氯噠嗪285.1/156.3

285.1/108.310020

301.3/156.312010

磺胺喹噁啉301.3/156.3

301.3/92.012015

250.2/156.312010

磺胺吡啶250.2/156.3

250.2/184.412010

265.3/156.312010

磺胺甲嘧啶265.3/156.3

265.3/172.212010

271.3/156.212010

磺胺甲噻二唑271.3/156.2

271.3/108.312020

311.2/156.312015

磺胺二甲氧嘧啶311.2/156.3

311.2/108.312020

281.0/156.312010

磺胺-6-甲氧嘧啶281.0/156.3

281.0/215.412010

215.4/156.21205

磺胺醋酰215.4/156.2

215.4/108.312015

279.0/186.312015

磺胺二甲嘧啶279.0/186.3

279.0/156.312015

256.0/156.312015

磺胺噻唑256.0/156.3

256.0/108.312015

215.2/156.310015

磺胺胍215.2/156.3

215.2/108.310020

311.1/156.312015

磺胺鄰二甲氧嘧啶311.1/156.3

311.1/108.312015

336.0/156.212015

磺胺硝苯336.0/156.2

336.0/294.312020

279.2/124.112015

磺胺二甲異嘧啶279.2/124.1

279.2/186.312015

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DB13/T1384.10—2011

表A.1(續(xù))

名稱(chēng)定性離子對(duì)m/z定量離子對(duì)m/z裂解電壓V碰撞能量V

315.2/156.312020

磺胺苯吡唑315.2/156.3

315.2/160.412020

254.1/156.312015

磺胺甲基異噁唑254.1/156.3

254.1/147.212020

251.1/156.312010

磺胺嘧啶251.1/156.3

251.1/185.412010

268.3/156.31205

磺胺二甲異噁唑268.3/156.3

268.3/113.212010

6

DB13/T1384.10—2011

BB

附錄B

（資料性附錄）

20種磺胺的二級(jí)質(zhì)譜圖