T-GDPIA 1-2019 塑料制品表面排斥細菌粘附能力的測試方法

ICS

83.140.01C29 T/GDPIA

1—2019塑料制品表面排斥細菌粘附能力的測試方法Test

determining

the

bacterial-repellent

發(fā)布

實施廣東省塑料工業(yè)協(xié)會發(fā)

布T/GDPIA

1—2019 前言

................................................................................

II1

..............................................................................

12

規(guī)范性引用文件

....................................................................

13

術語和定義

........................................................................

14

測試方法

..........................................................................

15

排斥細菌粘附性能評價

..............................................................

66

試驗報告

..........................................................................

6T/GDPIA

1—2019 本標準按GB/T

給出的規(guī)則起草。本標準由廣東省塑料工業(yè)協(xié)會提出。本標準由廣東省塑料工業(yè)協(xié)會歸口。本標準起草單位：嘉豐工業(yè)科技（惠州）有限公司、廣東省塑料工業(yè)協(xié)會、嘉瑞金屬制品（深圳）料及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（廣東）。本標準起草人：趙艷華、符岸、武友、蔡恒志、但丹、何國山、王萬卷。IIT/GDPIA

1—20191范圍本標準規(guī)定了塑料制品表面的抗細菌粘附性能的測試方法和評價的術語和定義

、測試方法、排斥細菌粘附性能評價、試驗報告。本標準適用于經(jīng)處理后排斥細菌粘附的塑料制品。2 規(guī)范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T

6682—2008 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T

31402—2015 塑料

塑料表面抗菌性能試驗方法3 術語和定義GB/T

31402—2015界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1排斥細菌粘附

bacterial

Repellent制品表面抑制細菌吸附的狀態(tài)或減少制品表面細菌附著的作用。3.2排斥細菌粘附效率

bacterial

Repellent

Efficiency經(jīng)排斥細菌粘附處理的制品表面相比未經(jīng)排斥細菌粘附處理的制品表面對細菌吸附數(shù)量降低的百分數(shù)。3.3接種液

inoculum種或多種組成，用于加入測試介質(zhì)中或至于樣本表面以測試樣本對其生長的促進或抑制性能。4 測試方法4.1 測試原理aATCC

ATCC

25312bCIP

104337cNCIB

dNBRC

ATCC

BAA-2731ATCC

ATCC

ATCC

ATCC

eCMCC

ATCC

ATCC

6305ATCC

ATCC

ATCC

中國普通微生物菌種保藏管理中心（成員，與金黃色葡萄球菌ATCC

等同的國內(nèi)菌株號為CGMCC

，與大腸桿菌

1.2463

1.8722a

b

c

d

e

T/GDPIA

1—2019附的細菌降低量來定量評定聚合物表面的排斥細菌粘附效率。4.2 材料4.2.1 試驗細菌試驗使用的細菌需從國際或國家菌種保藏中心獲得。試驗使用菌株如表1中所列。根據(jù)需要也可以釋說明。表1 試驗使用菌株表1 試驗使用菌株4.2.2.1 純水用于配制所有溶液和培養(yǎng)基的水都應是符合GB/T

—2008規(guī)定的蒸餾水或去離子水。4.2.2.2胰蛋白酶大豆肉湯T/GDPIA

1—2019將17.0

g

酪蛋白胨、

g

大豆蛋白胨、

g

葡萄糖、

g

氯化鈉、2.5

g

磷酸氫二鈉1000

mL

pH

調(diào)整至～。然后用高壓蒸汽鍋在

℃條件下滅菌15

min。如不立即使用，應存放于4

8

℃

條件下。不得使用存放時間超過一個月的胰蛋白酶大豆肉湯。4.2.2.3 胰蛋白酶大豆瓊脂將15.0

g

酪蛋白胨、5.0

g

大豆粉木瓜蛋白胨、

g

氯化鈉、

g

瓊脂粉加入1000

mL

蒸餾1

min

～7.5。之后用高壓蒸汽鍋于121

℃條件下滅菌

。

如不立即使用，于4

8

℃

條件下保存。不得使用存放時間超過一個月的胰蛋白酶大豆瓊脂。4.2.2.4營養(yǎng)瓊脂將5.0

g

牛肉膏、10.0

g

蛋白胨、

g

氯化鈉、15.0

g

瓊脂粉加入1000

蒸餾水或去離子水1

min

調(diào)至～7.5高壓蒸汽鍋于

℃條件下滅菌15

。

4

℃～8

℃

間超過一個月的營養(yǎng)瓊脂。4.2.2.5 生理鹽水將9.0

g

氯化鈉溶解于少量蒸餾水或去離子水中，然后稀釋至1000

mL，攪拌均勻，制成生理鹽水。于121

4

℃～8

月的生理鹽水。4.2.2.6 1/500

營養(yǎng)肉湯（1/500

）取4.2.2.2500鈉或鹽酸溶液將

pH

調(diào)整至7.2～7.5。用高壓蒸汽鍋于

℃條件下滅菌

min。

如不立即使用，于4

℃～8

℃條件下保存。不得使用存放時間超過一個月的1/500

NB。4.3 儀器設備如無特別說明，使用以下器具和材料：a)

錐形燒瓶：容量為

。b)

培養(yǎng)皿：直徑

㎜，滅菌后使用。c)

菌落計數(shù)器。d)

移液槍：量程為

10

μL～100

μL，

μL～1000

μL。e)

移液槍頭

：量程為

100

μL、

1000

μL

兩種，滅菌后使用。f)

培養(yǎng)箱：在設定所需溫度下，溫度精度±2

g)

振動培養(yǎng)箱，在設定所需溫度下，溫度精度

±2

℃，轉(zhuǎn)速

200

rpm。h)

高壓滅菌鍋：

能保持（±2

的溫度和（103±5）

的壓力。i)

離心機：設定轉(zhuǎn)速

6000

rpm/s～9000

rpm/s。j)

pH

計：精度±。k)

分光光度計：所使用波長為

600

nm。l)

無菌試管：容積為

mL、50

。m)

抽吸泵。n)

天平：精度±0.01

g。900mm

～1600

mm900mm

～1600

mm

之間。測試的試樣應直接從最終產(chǎn)品本身制備。但是，如果產(chǎn)品的形狀不允許這樣4.4 儀器滅菌和菌種保藏4.4.1 高壓蒸汽滅菌將物品放入高壓蒸汽滅菌鍋，于121

℃溫度條件下滅菌15

min

或以上。4.4.2 玻璃器皿的滅菌134

℃溫度條件下滅菌15

，然后烘干。4.4.3 塑料器皿的滅菌121

℃條件下滅菌15

，然后烘干。4.4.4 液體的滅菌將配備好的液體如液體培養(yǎng)基、生理鹽水以及稀釋倍的培養(yǎng)基（1/500

NB）等放入高壓蒸汽鍋中，于121

℃溫度條件下滅菌15

min。4.4.5 菌種的保藏菌種接種于適當?shù)呐囵B(yǎng)基上，存放于5

℃～8

℃

條件下，需要時進行轉(zhuǎn)種。不得使用轉(zhuǎn)種超過5次或轉(zhuǎn)種間隔超過1個月的菌種，應從相關菌種保藏機構獲取新的菌種進行實驗。4.5 試驗步驟4.5.1 接種液的制備用無菌接種環(huán)將細菌從細菌標準液轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基并在一定溫度條件下±1)

℃培養(yǎng)

h

～24

h。使用無菌接種環(huán)，將培養(yǎng)后的細菌轉(zhuǎn)移至液體培養(yǎng)基并在一定溫度條件下培育18

h1/500

1×106

CFU/mL～1×108

備用。制備好的菌種需要保存在0

℃條件下，并且在制備好的兩小時之內(nèi)使用。細菌接種液濃度建議為×106

CFU/mL～10×106

CFU/mL。若需使用其他接種液濃度以符合測試設備的最優(yōu)測量范圍，需在測試報告中指出。4.5.2 試樣的制備3理的空白試樣進行對比。在測試過程中，首先將含有排斥細菌粘附添加劑的樣品和未經(jīng)處理的對照樣品裁制成±

mm×(50±2)

mm，,厚度不宜超過10

mm

的試樣。如果樣品很難切成上述尺寸，則可以使用其他形狀或尺寸的樣品，只要保證樣品的表面積在2 2不是50

mm×50

mm，實際尺寸應在測試報告指出。樣不是標準尺寸，則薄膜的尺寸應按比例進行調(diào)整。但是，薄膜的尺寸不應小于

，并且要保證樣不是標準尺寸，則薄膜的尺寸應按比例進行調(diào)整。但是，薄膜的尺寸不應小于

，并且要保證以70%酒精擦洗）。要清洗，清洗方法應在實驗報告中注明。4.5.3 樣品的接種首先將制備的試樣和空白對照試樣分別放入無菌培養(yǎng)皿中，試樣的測試面朝上。然后吸取

mL上一步驟所準備的菌液并將其滴在樣品表面。取一塊面積為40

×

40

的無菌薄膜或蓋玻片，將影響測試效果。試樣接種完成之后，蓋上培養(yǎng)皿蓋。覆蓋試樣的薄膜的尺寸是

±

2)

×

(40

±

mm，對應試樣的尺寸為

mm×50

。若試2覆蓋薄膜的邊緣在試樣邊緣2.5

mm～5.0

mm以內(nèi)的范圍。體積也要相應進行改變以保證在單位面積接觸的細菌數(shù)量范圍與標準樣一致，并在報告中詳細列出。

mL增稠劑，降低菌液的流動性。任何一種避免菌液泄露的非標準的操作都需要在報告中列出。覆蓋膜。4.5.4接種試樣的孵育將上述菌液接種的試樣轉(zhuǎn)入恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)孵化24

h35±185%下的。如有必要，可根據(jù)具體要求做出改變培養(yǎng)條件。非標準培養(yǎng)溫度和濕度應在實驗報告中詳細列出。4.5.5 從試樣中回收細菌5

mL無菌生理鹽水至樣品表面以沖洗未附著的細菌，之后再用移液槍將生理鹽水吸出。使用無菌拭子在樣品的測試區(qū)域以Z字形來回擦拭以收集表面細菌。之后將收集了細菌的拭子放入含有1

mL生理鹽水的離心管中并擰緊離心管蓋。將離心管放至渦輪混合器上振動至少60

s至生理鹽水中。將細菌分散的生理鹽水進行稀釋并接種于瓊脂板上，在35℃條件下培養(yǎng)18

h～48

h后，利用細菌計數(shù)器進行細菌計數(shù)。所得數(shù)值將用于樣品細菌排斥率的計算。出。4.6 試驗結果4.6.1 活菌數(shù)測定T/GDPIA

1—2019根據(jù)式（1）計算塑料表面活菌數(shù):E

=

A

.

…………………(1)A——覆蓋膜的表面積，單位為cm

A——覆蓋膜的表面積，單位為cm

，或者是試樣表面接種物的接觸面積。E——每個檢測標本每平方厘米所吸附的活菌數(shù)；C——含有細菌的生理鹽水用于接種至瓊脂板后，依據(jù)培養(yǎng)結果所計算出的細菌濃度（CFU/mL）；D——含有細菌的生理鹽水用于接種至瓊脂板的稀釋倍數(shù)；V——含有細菌的生理鹽水用于接種至瓊脂板的體積(mL)；24.6.2 排斥細菌粘附效率測定根據(jù)式（2）計算塑料表面的排斥細菌粘附效率GR

100

…………

式中：GR

——試樣的排斥細菌粘附效率；ē對照——空白對照組活菌數(shù)的算術平均值；ē樣品——樣品組活菌數(shù)的算術平均值。5排斥細菌粘附性能評價5.1 當滿足

5.2、

和

中分別給出的

3

效，應重新進行試驗。5.2 未經(jīng)處理的試樣接種后吸附的活菌數(shù)的對數(shù)值應滿足以下要求:

mean

0.2

………………

5.3 試樣在孵化5.3 試樣在孵化

24

h

后回收到的活菌數(shù)不得少于

。5.4 空白對照試樣在孵化

24

h

后回收到的活菌數(shù)不得超過

1.0×

CFU/cm

。Lmax——在試樣中發(fā)現(xiàn)的最大活菌數(shù)的常用對數(shù)(10為底)；Lmin——在試樣中發(fā)現(xiàn)的最小存活菌數(shù)的共同對數(shù)；Lmean——在試樣中發(fā)現(xiàn)的活菌數(shù)量平均值的普通對數(shù)。224.535

6 試驗報告T/GDPIA

1—2019試驗報告應包括以下信息：a)

注明采