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文檔簡介

實(shí)驗(yàn)一酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

(enzymelinkedimmunosorbent

assay,ELISA)1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的基本方法及原理

2.掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果的觀察與判斷

3.了解ELISA在微生物檢測中的應(yīng)用二、實(shí)驗(yàn)原理抗原或抗體結(jié)合到固相載體的表面仍保持其活性抗原或抗體與酶交聯(lián)成酶標(biāo)抗原或抗體后，仍保持其免疫活性和酶活性標(biāo)本中的抗原或抗體、標(biāo)記抗原或抗體能按一定的次序與固相載體表面的抗原或抗體反應(yīng)，并通過底物與酶的反應(yīng)來反映標(biāo)本中的抗原或抗體的量2

三、實(shí)驗(yàn)材料

1.器材

1）酶聯(lián)免疫檢測儀

2）12聯(lián)孔聚苯乙烯條

3）37℃溫箱

4）微量加液器及移液器頭2.試劑

1）包被液

2）pH7.4磷酸鹽緩沖液3）洗滌液3

三、實(shí)驗(yàn)材料

2.試劑

4）封閉液：5）酶標(biāo)抗體稀釋液6）底物液7）終止液8）未知抗原

9）HRP羊抗兔血清：4四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、稀釋未知抗原：用pH9.60.05M碳酸緩沖液將抗原稀釋至

2、包被未知抗原：在聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中，各加入不同稀釋倍數(shù)的抗原0.1ml，以不加抗原的兩孔為對照，置于4℃冰箱過夜或37℃2小時(shí)

5四、實(shí)驗(yàn)步驟

3、洗滌：快速甩動(dòng)12聯(lián)孔條，倒出孔內(nèi)包被液，之后在每小孔加入

洗滌緩沖液，室溫靜置放3min，甩出洗滌緩沖液，重復(fù)三次。最后把反應(yīng)板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡

4、封閉：每小孔加封閉液

5、洗滌：同上

6、加酶標(biāo)抗體：各孔中加入新配制酶標(biāo)記抗體6四、實(shí)驗(yàn)步驟

7、洗滌：同上

8、加底物顯色：各反應(yīng)孔中加底物溶液

9、終止反應(yīng)：待有顏色反映時(shí)，于各反應(yīng)孔加入終止液

10、比色：在酶標(biāo)儀上，于450nm讀取A或

OD值

7五、

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